用凹形载玻片测定花粉管的生长

花粉管的生长速度,一般都用载玻片、玻璃小环、盖玻片和凡土林做成花粉萌发小室来测定。但是05cm高、1．5cm口径的玻璃小环难于制得,且操作复杂,不能尽如人意。现介绍一种只需用凹形载玻片和盖玻片做成的花粉萌发小室,便可测定花粉管生长速度的简易方法。实验材料有凹形载玻片、盖玻片、滴管、培养基（含10％～20％蔗糖、10～20mg／L硼酸、l％～2％琼脂）、显微镜、培养箱。测定时,取一片凹形载玻片,向凹孔内滴加少许清水（切忌多加）;将培养花粉所用培养基滴加在盖玻片中央,面积约Icm’,培养基用量要少,需薄而平,否则会与凹孔…     

花粉管生长测定实验中培养小室的改进

花粉管生长测定实验是用悬滴培养法培养花粉粒 ,使其在潮湿的环境中萌发 ;花粉粒萌发的潮湿环境是培养小室或称潮湿小室。传统培养小室的制作 ,是在一干净载片上放置一玻璃环 (φ=15mm,h=5mm) ,环口用金刚砂磨平 ,并在边缘涂上凡士林 ,使玻璃环固定在玻片上 ,以防止水分蒸发。环内放两滴水 ,然后用一洁净盖玻片 ,中央滴一滴液体培养基 ,再将花粉粒撒于培养基上 ,将此盖片盖于玻璃环上 ,有花粉粒的一面朝下。经2 0～ 2 5℃培养一段时间后 ,将此装置直接放于低倍镜下观察 ,并测定花粉管的长度。这种传统培养小室有 4个缺点 :1)将长玻璃管切割…     

植物胚胎学实验方法（一）：花粉生活力的测定

采集的花粉和经贮存的花粉,在使用之前必须作生活力的测定以鉴定其质量。测定花粉生活力的方法主要有三种。即离体萌发、活体萌发和用氧化还原染料的非萌发分析测定法。这里介绍三种经常用的和在短时间可以得到结果的方法:花粉离体萌发法,用氧化还原染料染色法和荧光素二醋酸脂的荧光方法。     

玉米花粉体外萌发方法改进及其对花粉介导转基因的作用

超声波处理花粉介导植物基因转化方法由山西省农业科学院生物技术研究中心发明, 已被国家知识产权局授予发明专利(专利号ZL 99121152.9)。在该专利的基础上, 针对玉米(Zea mays)花粉取样、保存和处理条件等因素对其体外萌发的影响进行深入研究, 提出了改进玉米花粉体外萌发实验的方法。研究结果表明, 在不同时期对开花的玉米进行花粉培养时所需蔗糖溶液的浓度不同; 确定了玉米花粉的保存时间、条件及其对超声波处理后花粉萌发率的影响, 以提高该转化方法中花粉的活力, 并进一步验证了该转基因方法的可靠性; 讨论了玉米花粉体外萌发的操作技巧和各因子的参数, 对提高花粉介导植物基因转化效率有一定的参考价值。     

芸苔属脱外壁花粉作为研究花粉萌发的新实验系统

脱外壁花粉的分离与人工萌发已在芸苔属(Brassica L.)中取得成功。由于其缺乏外壁与萌发沟这一特点,脱外壁花粉是研究花粉萌发的有用的实验系统。作者重点研究了脱外壁花粉分离与萌发过程中有关极性形成、萌发位点预定及新壁的合成等问题。结果表明在外壁脱离之前花粉已经活化并预先建立了极性;脱外壁后的萌发位点仍位于原萌发沟处;在萌发位点处合成的新壁可能起限定花粉管直径的作用。由此推论,脱外壁花粉可在花粉生物学研究中广泛加以应用。     

杜鹃红山茶花粉萌发力及贮藏耐性的研究

以2～3年生嫁接的杜鹃红山茶(Camellia azalea)花粉为实验材料,研究了不同培养基、不同培养温度对其萌发的影响,同时探讨了不同贮藏条件和贮藏时间下花粉生活力的差异。结果表明:杜鹃红山茶花粉在不同培养时间下其萌发率呈抛物线型,花粉在15%蔗糖+0.02%硼酸的培养基上萌发率最高,30℃的培养温度比25℃、20℃更适合杜鹃红山茶花粉萌发。-20℃冷冻保存和液氮保存都是适合杜鹃红山茶花粉长期保存的方式。     

濒危植物缙云卫矛繁育系统研究

运用花粉萌发、联苯胺-过氧化氢法、花粉—胚珠比、杂交指数和套袋实验等方法,对缙云卫矛(Eu-onymuschloranthoidesYang)花粉活力、柱头可授性及繁育系统进行了研究。结果表明缙云卫矛花粉-胚珠比为764~1340,杂交指数等于3,结合人工授粉和套袋实验结果可以确定该物种的繁育系统属于自交亲和,有时需要传粉者。根据套袋实验及实地观察可以推测该物种以风媒传粉为主。其花粉活力较高,持续时间较长,花粉质量可能不是导致该物种濒危的主要原因。其雌雄性功能表达具一定的重叠期,提高了同株异花授粉的几率,雌雄性功能表达在时间上的差异不是影响其结实率的主要原因。气候条件对传粉过程的限制可能是导致该物种濒危的原因之一。     

紫斑牡丹小孢子形成过程的细胞遗传学研究

首次对紫斑牡丹栽培品种的花粉母细胞减数分裂过程进行了系统研究。细胞学观察发现约３３％的花粉母细胞减数分裂过程异常。对该品种花粉进行人工萌发试验 粉萌发率约为６５．４％。统计该品种的结实率发现,其有效结实率仅为２３．５％,认为该紫斑牡丹品种花粉母细胞减数分裂行为异常是形成败育花粉的关键原因,但它仅仅是导致该品种结实７率低的原因之一。     

淫羊藿花粉萌发及花粉管生长研究

运用方差分析、多重比较和正交实验方法对淫羊藿花粉的萌发和花粉管生长进行了研究.结果表明:培养基内硼酸、硝酸钙、蔗糖在一定浓度范围内,对花粉萌发及花粉管生长起促进作用,但超过一定浓度时则起抑制作用;镁和钾对花粉萌发及花粉管生长影响不显著.在正交实验中蔗糖和H3BO3对淫羊藿花粉萌发有显著影响,而培养基组分间没有明显的交互作用.淫羊藿最适花粉液体培养基为15%蔗糖 40 mg/L H3BO3 40 mg/LCa(NO3)2·4H2O;在pH值为5.0、25℃和600 lx光照时淫羊藿花粉萌发和花粉管生长最好.     

培养基组分、激素及pH值对转基因白桦花粉萌发的影响

采用花粉离体培养法研究了培养基不同组分、激素及pH值对转基因白桦（Betula platyphylla Suk.）花粉萌发的影响。结果表明,培养基组分在一定范围内促进花粉萌发,转基因白桦花粉萌发对硼酸和Ca^2＋的反应敏感,培养基中缺乏该物质时花粉不萌发。激素类物质低浓度时促进萌发,高浓度时抑制萌发。最适合培养基组分为蔗糖18%,硼酸0.015%,Ca^2＋ 0.020%,pH6.0,NAA 10mg/ml,6-BA 1mg/ml。并对不同保存条件（4℃,-20℃）下转基因白桦花粉的萌发率进行了比较,4℃下干燥保存更有利于保持转基因白桦花粉的活力。     

紫斑牡丹单瓣与半重瓣花粉超微结构及生理生化特性比较北大核心CSCD

该研究以3个紫斑牡丹品种(‘象牙白’、‘美人面’、‘紫金冠’)的单瓣与半重瓣花粉为材料,对其超微结构和生理生化特性进行观察分析,并对其花粉培养基进行筛选优化,探讨单瓣和半重瓣花粉的超微结构与花粉萌发率以及物质代谢与花粉萌发率之间的关系。结果表明:(1)紫斑牡丹花粉萌发的最适宜培养基为100 g·L^(-1)蔗糖+0.15 g·L^(-1)硼酸+10 g·L^(-1)琼脂。(2)花粉饱满率是影响花粉萌发的主要原因。(3)3个紫斑牡丹品种的单瓣花粉离体培养萌发率均显著高于半重瓣的花粉。(4)‘象牙白’、‘美人面’、‘紫金冠’单瓣花粉可溶性蛋白含量均高于半重瓣花粉,但三者单瓣花粉的MDA含量和3种保护酶(CAT、SOD、POD)活性均低于半重瓣花粉。研究认为,花粉体内蛋白质亏损和MDA、CAT、SOD、POD的积累可能是引起半重瓣紫斑牡丹花粉萌发率较低的生理原因之一。     

沙田柚花柱蛋白对花粉管生长的影响

本文以沙田柚及其授粉树种酸柚为材料,对其花粉在不同培养介质中的萌发率进行测定,筛选了０２～０４ｍｏｌ／Ｌ聚乙二醇－４００（ＰＥＧ－４００）＋００１％硼酸作为花粉萌发介质。用授粉后３ｄ的花柱提取液进行沙田柚、酸柚花粉萌发抑制实验,花柱提取液对自交花粉萌发无抑制作用,明显地抑制花粉管的生长。其中以花柱提取液的３５％饱和度硫酸铵级分对花粉管伸长的抑制最明显。模拟了花粉在雌蕊中的生长方式,进行花粉萌发生长,能收集到较多的花粉管,为研究花粉管的Ｓ－糖蛋白提供了材料。     

拟南芥花粉细胞质游离钙离子荧光测定法

以拟南芥花粉为材料,利用低温装载法在完整的花粉粒中,成功地载入酯化形式的钙离子荧光探针Fura-2/AM。利用荧光比率分析法对花粉细胞质中游离钙离子的分布特点进行研究并测定了花粉细胞内游离钙离子浓度。结果表明花粉萌发初期细胞质内游离钙离子呈极性分布,萌发沟附近的钙离子浓度明显高于其它部位,萌发孔附近最高,花粉细胞核中最低。花粉粒细胞萌发状态下的[Ca2 ]i=246±38nmol/L,该值与花粉粒细胞萌发状态下游离钙离子浓度用其它方法测得值接近,进一步表明所建立的用Fura-2/AM检测拟南芥花粉粒细胞质游离钙离子的方法是可靠的。     

毛茛叶报春组一存疑种花粉形态的多样性研究

对分布于浙江西北部的毛茛叶报春组(sect. Ranunculoides)一存疑种5个居群共50个植株的花粉形态进行了研究观察。结果表明该存疑种的花粉形态特征在种下具高度多样化,根据萌发孔类型、数量及组成的不同,其花粉可划分为多沟型、沟多孔少型、孔多沟少型、散孔型和环沟型5种类型;而且居群间花粉的大小及花粉类型的组成也存在较大的差异;此外,同一个植株或同一个花粉囊的花粉也可能具有多种类型的花粉。本文进一步证明了花粉形态特征在种内可能存在多样化的现象。花粉形态特征支持该存疑种为一个独立的新物种,它很可能是由具多沟型和散孔型花粉的亲本杂交进化而来。     

烟草脱外壁花粉人工萌发与离体授粉实验系统的建立

通过花蕾低温处理、花药漂浮培养与花粉短时酶解程序可脱去花粉外壁,分离出烟草(Nicotianatabacum L.)的脱外壁花粉。研究了分离过程中的酶液渗透压、培养基中聚乙二醇(PEG)与蔗糖以及添加水解乳蛋白等因素对脱外壁花粉人工萌发的影响。在含30％PEG-6000与0.1％水解乳蛋白的D_2培养基中,萌发率最高达57.8％;花粉管生长正常,培养24h后一半以上的花粉管中生殖细胞分裂成精子。用微滴和贴滤纸小片的方法将30～40粒脱外壁花粉授予柱头上,近一半能萌发花粉管并在花柱中生长。采取授粉后子房培养方法,获得了种子与幼苗。从而建立了脱外壁花粉离体授粉实验系统。讨论了脱外壁花粉人工萌发与离体授粉实验系统的建立对于研究外壁在花粉萌发中的生物学功能以及开拓新的转基因技术等方面的意义。     

铁皮石斛花粉块结构及发育过程的解剖学特征研究北大核心CSCD

兰科植物的有性生殖特殊,每朵花只有1个花药,且花粉有聚集成块发育的特征。为了揭示铁皮石斛花粉块的发育特征,该研究以野生铁皮石斛不同时期的花药为材料,采用半薄切片和植物组织化学方法对其发育过程进行解剖学观察分析,并对成熟花粉块进行离体培养,观察花粉管的萌发状况。结果表明:(1)铁皮石斛花药壁由1层表皮细胞,2层药室内壁细胞,1层中层细胞和1层绒毡层细胞组成。开花时,绒毡层细胞退化,中层细胞没有退化,药室内壁细胞则形成纤维状细胞壁;药室中的小孢子母细胞没有明显的胼胝质壁结构。(2)小孢子发生属同时型,减数分裂后四分体小孢子不分散,以四合花粉状态发育,并进一步连接形成花粉块。(3)在小孢子发育中,孢粉素覆盖在整个花粉块表面形成花粉外壁,但花粉块内部的花粉没有花粉外壁结构;在花粉块表面的花粉外壁上未见花粉萌发孔。(4)在花粉离体萌发实验中,具有花粉外壁的花粉块表面花粉未见萌发,仅由花粉块内部的花粉萌发出花粉管。     

温度对斯托克通氏烟草雄配子体形成和发育的影响

为探究低温对斯托克通氏烟草(Nicotiana stocktonii)花粉母细胞(PMC)减数分裂及其雄配子体发育过程的影响,采用卡宝品红染色法,研究不同温度条件下该材料雄配子体形成和发育的过程。结果表明:种植于昼温(31±0.5)℃、夜温(11±0.5)℃人工气候箱中的Nicotiana stocktonii花粉母细胞减数分裂过程异常现象较少,出现微核的比率较低,用新鲜成熟的花粉做萌发实验花粉萌发率较高,为(71±3)%; 而种植于昼温(25±0.5)℃、夜温(3±0.5)℃条件下的Nicotiana stocktonii开花后花药大多干瘪,用新鲜成熟花粉做萌发实验花粉萌发率低,为(13.67±3)%,花粉母细胞减数分裂过程出现染色体桥、染色体不同步、染色体断片、落后染色体等现象,存在微核的细胞比率较高。因此,Nicotiana stocktonii花粉母细胞减数分裂与小孢子发育过程易受温度影响,从而影响花粉的可育性。     

花柱和花粉胞外钙调素对花粉萌发和花粉管伸长的影响

以烟草为材料,通过半体内实验,就花柱和花粉胞外钙调素对花粉萌发和花粉管伸长的影响进行了观察。发现用EGTA及钙调素抗血清处理柱头或花粉均可抑制花粉在柱头上的萌发;向花柱引导组织中显微注射纯化钙调素可促进花粉管束伸长,而注射钙调素抗血清可抑制花粉管束伸长;同时证实玉米花柱和花粉细胞壁中均存在钙调素及钙调素结合蛋白,而且花粉和花柱细胞壁中钙调素结合蛋白的种类有差异。结果表明存在于花粉和花柱细胞外的钙调素对花粉萌发和花粉管伸长均有促进作用。     

桃花粉低温和超低温保存方法比较研究

桃(Prunus persica(L.)Batsch)是我国重要的无性繁殖作物种质资源,目前主要保存于3个国家无性繁殖作物种质圃。随着以茎尖、花粉、休眠芽为保存载体的超低温保存技术的发展,超低温保存已成为无性繁殖作物重要备份保存方式。本研究以15份桃种质花粉为研究对象,开展含水量、回湿处理和保存温度(4℃低温保存和液氮超低温保存)对保存后花粉离体萌发率的影响研究。研究结果:明确了桃种质花粉超低温保存的含水量;揭示了回湿处理对部分桃种质花粉超低温保存产生显著影响;超低温保存后花粉离体萌发率最高可达83%;4℃低温保存和超低温保存比较研究结果表明,超低温保存4年后14份桃种质花粉离体萌发率仍可保持30%以上,11份桃种质花粉离体萌发率与保存前花粉离体萌发率相比无显著变化甚至显著提高,而4℃低温保存的花粉离体萌发率降至0。该研究为国家种质库建立花粉规模化超低温保存提供技术支撑。     

利用药片包装板进行花粉萌发实验

花粉萌发实验时,必须给试验花粉提供一个便于显微镜下观察且具良好通气保温条件的环境,否则花粉萌发率不高且萌发过程不易清楚观察。我们在教学时利用常见的药片和奶片包装板上的凹槽作为培养小室简便易行、效果很好。方法是用银子小心剥出槽内包装的物品,保持槽底透明塑料无折痕或嗜污,将凹槽完整剪下·口向上平置于载玻片上,也可滴一些封片用树胶将其固定,凹槽内滴1～2滴清水。另取一盖玻片滴一滴花粉前发用培养基,将试验花粉撒在培养基表面,反覆盖玻片于凹槽口,然后即可在显微镜下观察花粉萌发或进行花粉管生长的测定。利用药片…