‘宁杞8号’体细胞胚胎发生体系建立

以宁夏枸杞新品种‘宁杞8号’幼嫩叶片为外植体,探讨激素组合及添加物对‘宁杞8号’体细胞胚胎诱导、体胚增殖、萌发和植株再生的影响,并建立高效稳定的体细胞胚胎发生体系。结果表明:通过对6-BA、2,4-D和IAA进行正交分析,筛选出‘宁杞8号’体细胞胚诱导最优激素组合:6-BA 1.0 mg·L~(-1)+2,4-D0.3 mg·L~(-1)+IAA 0.4 mg·L~(-1),体胚诱导率达88.67%。极差分析比较各激素间的影响,6-BA对体胚诱导影响最显著。当高浓度的生长素及低浓度细胞分裂素浓度适宜的配比时,才能诱导产生形态正常数量多的‘宁杞8号’体细胞胚。在体胚增殖培养中,6-BA的浓度过高易导致玻璃化,不利于‘宁杞8号’体胚增殖生长。随着激素浓度的增高,体胚增殖倍数增加,玻璃化率也越高,综合分析得到‘宁杞8号’最佳体胚增殖培养基为6-BA 0.4 mg·L~(-1)+NAA 0.6 mg·L~(-1)。当添加IBA 0.3 mg·L~(-1)+GA_30.4 mg·L~(-1)+蔗糖10 g·L~(-1)时,‘宁杞8号’体胚萌发率最高,萌发率达89.17%。添加GA_3及低浓度蔗糖能促进成熟的体胚萌发。对‘宁杞8号’体萌发的影响程度依次是IBA蔗糖GA_3。活性炭能有效提高‘宁杞8号’体胚再生植株率,同时对萌发体胚的根的发育也有促进作用,当IBA 0.1 mg·L~(-1)+KT 0.4 mg·L~(-1)+活性炭1 g·L~(-1)时,‘宁杞8号’体胚再生植株效果最佳,体胚再生率达91.67%。     

降低卷丹百合组培褐变技术研究

以卷丹百合Lilium lancifolium鳞片为外植体,采用1/2MS+0.8 mg·L~(-1) 6-BA+0.2 mg·L~(-1) NAA为基本培养基,研究不同消毒时间的外植体消毒效果,探讨聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、抗坏血酸(V?)、活性炭(AC)以及光、暗两种培养条件对卷丹百合组织培养过程中褐变的影响。结果表明,用75%酒精消毒30 s、0.1%HgCl_2消毒10 min、2%NaClO消毒6 min的消毒效果最好,污染率为33.33%,成活率和诱导率均为66.67%。在培养基中加入PVP、V?、AC和暗培养均能减轻褐变的发生,其中以4.5 mg·L~(-1) PVP处理对卷丹百合褐变的抑制效果最好,外植体褐变率最低为30%,愈伤组织诱导率为70%。     

帝萝花‘璀璨明珠'的植株高效再生

为解决木本切花植物帝萝花‘璀璨明珠’繁殖效率低的问题,该文以帝萝花‘璀璨明珠’的幼嫩枝芽为外植体,研究了不同基本培养基对其长势的影响、不同激素种类和浓度对其增殖和生根的效果,分析了其离体繁殖的生长特点,并建立了高效的帝萝花‘璀璨明珠’组培快繁技术体系。结果表明:帝萝花‘璀璨明珠’幼嫩枝芽的消毒方法为0.1%的升汞溶液浸泡12 min,污染率为21.5%;外植体在WPM+ZT 1 mg·L~(-1)+NAA 0.1 mg·L~(-1)培养基上,侧芽萌发率为73%;增殖的最佳培养基为MS+BA 0.4 mg·L~(-1)+NAA 0.05 mg·L~(-1),增殖系数为6.63,增殖方式为侧芽增殖和植株基部丛生芽增殖;生根的适宜培养基为MS+IBA 0.75mg·L~(-1)+NAA 1 mg·L~(-1),生根率为70%;生根瓶苗移栽于珍珠岩和细草炭(体积比为0.5∶1)的基质中,光照强度为10 000～12 000 lx,空气湿度为70%～80%下培养,60 d后成活率可达72%。该研究结果为帝萝花组培种苗的商业化生产提供了技术支撑,同时促进了该高档木本切花的推广和种植及产业化。     

抗性赤松体胚发生细胞结构观察与增殖条件的优化

为了更有针对性地优化原生抗性赤松体胚发生培养体系,本研究通过体式镜定性观察种室中的合子胚分布、胚性胚柄细胞结构变化,通过Image-Pro Plus软件定量分析胚性细胞团在不同生长调节物质配方下胚头胚柄的比例变化,了解体胚发生的营养需求。结果发现,抗性赤松裂生多胚更易形成胚性细胞团;改变原有培养条件细胞团会出现胚头胚柄分离、胚头细胞颜色加深的反应;使用低浓度的混合生长调节物质配比(0.1 mg·L~(-1)2,4-D+1 mg·L~(-1) NAA+0.5 mg·L~(-1) 6-BA)能够提高体胚增殖速度;表明抗性赤松胚性细胞团增殖速度加快的内在机理为增加胚性细胞团中胚头与胚柄的比例。     

银叶树品种‘Kelvin Red’启动培养研究

以银叶树‘Kelvin Red’为试材,对其离体快繁启动培养过程进行了研究。试验结果表明:银叶树外植体最佳的消毒方案为75%酒精浸泡30s,再用0.1%升汞进行5+4 min的二次消毒;最佳取材季节为冬季;最佳外植体类型为茎尖和茎段中上部半木质化部分;最佳培养基配方为WPM+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.5 mg/L。     

绒毛白蜡体胚诱导和植株再生

该文探讨了基本培养基、外植体、培养条件以及植物生长调节剂配比对绒毛白蜡(Fraxinus velutina)体胚诱导的影响。结果表明,胚根是诱导体胚发生的最佳外植体;体胚诱导的最适培养基为改良MS+2 mg·L~(–1) 6-BA+0.1 mg·L~(–1) NAA、30g·L~(–1)蔗糖、5.0 g·L~(–1)琼脂;暗培养20天后进行光照培养(14小时光照/10小时黑暗),光密度为100~(–1)20μmol·m~(–2)·s~(–1),昼温度(25±2)°C,夜温度(18±2)°C;成功诱导出体细胞胚并获得再生植株,体胚诱导率可达59.8%,体胚萌发率达81.2%。壮苗最适培养基为改良WPM+0.5 mg·L~(–1) 6-BA+0.2 mg·L~(–1) ZT+0.01 mg·L~(–1) NAA。生根最适培养基为改良1/2MS+1.0 mg·L~(–1)IBA+0.05 mg·L~(–1) NAA+20 g·L~(–1)蔗糖,生根率高达97.3%,试管苗移栽成活率达97.8%。     

独脚金离体培养与快速繁殖

采用茎段作为外植体,建立独脚金Striga asiatica的组织培养快速繁殖方法。结果显示,0.1%升汞溶液处理7~9 min是较有效的消毒方法;诱导不定芽增殖培养基适宜配方为MS+6-BA 3.0 mg·L~(-1)+IBA 0.1mg·L~(-1);生根培养基配方为MS+NAA 0.1 mg·L~(-1)+IBA 0.5 mg·L~(-1),培育周期为3个月。     

速生白榆的组织培养与快速繁殖

该文以速生白榆半木质化枝条为外植体,使用75%的酒精和0.1%HgCl_2消毒处理,外植体经过启动培养后,在增殖培养基中进行丛生芽诱导,将丛生芽切成单株进行生根诱导,最终建立起成熟的速生白榆组培快繁体系。结果表明:外植体最佳消毒处理组合为75%的酒精处理50 s+0.1%HgCl_2处理8 min,外植体污染率为17.3%,成活率为78%;将消毒处理过的外植体接种到启动培养基中,培养25 d,最终筛选出最适白榆外植体启动的培养基为MS+1.0 mg·L~(-1)6-BA+0.1 mg·L~(-1)IBA+30 g·L~(-1)蔗糖+6.5 g·L~(-1)琼脂,启动率高达87.5%;将经过启动培养后的外植体腋芽切下,接种到增殖培养基中进行丛生芽诱导,最终筛选出最佳增殖培养基为MS+0.5 mg·L~(-1)6-BA+0.1 mg·L~(-1)KT+0.1 mg·L~(-1)IBA+30 g·L~(-1)蔗糖+6.5 g·L~(-1)琼脂,继代周期25 d,增殖系数达6.2;将丛生芽切成单株,接种到生根诱导培养基中,筛选出最佳生根培养基为1/2 MS+0.1 mg·L~(-1)IBA+0.1 mg·L~(-1)IAA+30 g·L~(-1)蔗糖+6.5 g·L~(-1)琼脂,生根诱导30 d,生根率达97%。将生根苗在室外炼苗后,移栽到珍珠岩∶蛭石∶泥炭土体积比为1∶1∶1的混合基质中,成活率在90%以上。较高的增殖系数、生根率和移栽成活率可以降低生产成本,进而实现工厂化育苗。     

‘杨氏金红50号’猕猴桃的离体快繁研究

为建立‘杨氏金红50号’猕猴桃的离体快繁体系,该研究以其带腋芽茎段为外植体,采用组织培养的方法进行离体培养,并建立了两种离体再生途径:途径I为直接诱导茎段腋芽出芽;途径Ⅱ为茎段基部先产生愈伤组织,再分化不定芽。结果表明:‘杨氏金红50号’猕猴桃带腋芽茎段的最佳灭菌方式为75%酒精30 s+15%Ca(Cl O)_25 min+0.1%升汞8 min;在途径I中,诱导茎段腋芽出芽的最优培养基为MS+4.0 mg·L~(-1)6-BA+0.1 mg·L~(-1)NAA;在途径Ⅱ中,诱导茎段基部产生愈伤组织并产生不定芽的最优培养基为MS+3.0 mg·L~(-1)6-BA+0.3 mg·L~(-1)NAA;培养丛生芽的最佳植物生长调节剂组合为MS+4.0 mg·L~(-1)6-BA+0.4 mg·L~(-1)NAA;不定芽生根培养的最佳植物生长调节剂组合为1/2 MS+0.9 mg·L~(-1)IBA,20 d左右分化出不定根,40 d左右获得完整植株;生根后的组培苗在田园土∶细沙=1∶1的基质中能达到96%的移栽成活率。     

塔杨松散型均质胚性愈伤组织培养体系

为了获得塔杨(Populus×canadensis Moench‘Tower’)松散型、均质、胚性愈伤组织(LHEC),以塔杨试管苗叶片为外植体,通过不同浓度激素(BA、KT、2,4-D)、蔗糖和无机盐处理,建立了松散型愈伤组织(LC)诱导—继代培养—胚性愈伤诱导的高效体系。结果显示:塔杨叶片在低蔗糖和低无机盐(1/4MS+2 mg·L~(-1)2,4-D+1mg·L~(-1)BA+10 g·L~(-1))的培养基上培养可以诱导出完全的LC(诱导率100%)。LC在继代培养基(MS+2.0mg·L~(-1)2,4-D+2.0 mg·L~(-1)BA+Vc100 mg·L~(-1)+30 g·L~(-1))上进行2~3次转接后,再转移到LHEC培养基(MS+0.5 mg·L~(-1)2,4-D+3 mg·L~(-1)BA+Vc100 mg·L~(-1)+40 g·L~(-1)蔗糖)上培养4~5周(每7天转接1次),即可诱导出具有许多球状体(原胚状体)的松散型胚性愈伤组织。此外,适当的2,4-D与BA浓度比例,可以使LC保持细胞的松散特性、不形成根、无褐变,生长快;含有30 g·L~(-1)蔗糖的培养基利于LC生长和LHEC的形成;维生素C能较好的抑制继代培养中的褐变;BA有利于形成LC,而KT有利于紧密型愈伤组织的形成,同时BA处理的愈伤组织生长较KT处理的快;当2,4-D浓度为0.5~1 mg·L~(-1)时,随着BA浓度的增加,LHEC的数量也随之增加,当BA为3 mg·L~(-1)时,LHEC数量达到最大值100%。本文还对影响愈伤组织胚性化的主要因素进行了讨论。提出的各项建议对均质胚性愈伤组织LHEC的培养有重要的指导意义。     

马来沉香组织培养技术研究

以马来沉香茎段为外植体,分别对外植体的消毒、启动培养、增殖培养、壮苗培养、生根培养、炼苗移栽环节进行研究,着重探索马来沉香组织培养技术各个环节的最佳培养基配方,为马来沉香的工厂化育苗提供技术指导。结果表明:马来沉香最佳消毒方法是用0.1%升汞消毒4～5min;启动率最高的培养基配方是1/2MS+6-BA 0.2mg·L-1+NAA 0.1mg·L-1+蔗糖30g·L-1+琼脂5.8g·L-1,启动率达70.5%;增殖系数最高的培养基是1/2MS+0.1mg·L-16-BA+25g·L-1蔗糖+5.8g·L-1琼脂,增殖系数达2.9;最佳壮苗培养基是1/2MS+30g·L-1蔗糖+5.8g·L-1琼脂;最佳生根培养基为1/2MS+NAA 5.0mg·L-1+20g·L-1糖+6g·L-1琼脂,培养2d后移入1/2MS培养基继续培养,生根率为83%;马来沉香移栽较难成活,在泥炭土∶黄泥土(2∶1)的基质上成活率最高,移栽成活率65%。     

“固液双层”培养法诱导马铃薯‘米拉’试管薯的研究

该研究以马铃薯‘米拉’品种的脱毒试管苗为材料,采用"固液双层"的培养方式,通过正交试验对其试管苗壮苗生长阶段和试管薯诱导阶段的培养基进行优化,并通过单因素试验研究蔗糖浓度、光照条件和CCC浓度对试管薯结薯的影响。结果表明:在"固液双层"培养中,‘米拉’壮苗培养阶段优化的培养基为改良MS培养基(硝酸铵为2 000 mg·L~(-1)、硝酸钾为2 000 mg·L~(-1))+500 mg·L~(-1)CCC+0.1%活性炭+0.1mg·L~(-1)DA-6+1 mg·L~(-1)6-BA+0.1 mg·L~(-1)NAA+3%蔗糖+6 g·L~(-1)琼脂,pH 5.8。试管薯诱导及生长阶段优化的培养基为MS_1培养基(微量元素和铁盐的用量为MS培养基的2倍)+1.5%活性炭+4 mg·L~(-1)6-BA+8%蔗糖。在试管薯诱导阶段,弱光4 h·d~(-1)培养诱导的试管薯,结薯指数、大薯率、薯块重量均优于暗培养。"固液双层"培养是一种低成本的方法,在组织培养室内就可以大量繁殖‘米拉’试管薯,并且能增加原种的数量,这种方法也能用于马铃薯其他栽培品种试管薯的诱导。     

‘长林53号’油茶胚发育特征分析及体胚再生体系优化

为了进一步优化普通油茶再生体系并了解外植体生理变化特点,选择普通油茶‘长林53号’不同时期的胚作为体胚再生体系的外植体,进行多因素多水平正交试验,同时测定和分析不同胚龄的胚生理生化指标。结果表明:7、8月份为茶果的快速生长期,此时胚中可溶性蛋白、果糖和蔗糖含量逐渐上升,可溶性总糖含量呈双峰曲线变化,7月27日,幼胚中ABA含量(110.13ng·g-1)及ABA与ZR含量比值(13.47)都达到最高;体胚再生体系构建过程表明,2,4-D对体胚诱导影响最大,其次是胚龄;‘长林53号’油茶最佳体胚诱导方法为选择茶果快速膨大期(7月27日)的幼胚作为外植体,最佳诱导配方为MS+0.5mg·L-1 2,4-D+0.5mg·L-1 KT+0.05mg·L-1 TDZ+500mg·L-1 Gly;IAA对胚状体萌发影响最大,胚状体萌发和组培苗生长最佳配方为MS+2mg·L-1 IAA+0.5mg·L-1 6-BA+0.5mg·L-1 TDZ+500mg·L-1 CH。     

红芽芋茎尖的包埋玻璃化法超低温保存（英文）

对红芽芋(Colocasia esculenta var.cormosus ‘Hongyayu’)茎尖的包埋玻璃化法超低温保存技术进行了研究。茎尖从培养8周的试管苗上切下并包埋成海藻酸钙凝胶珠,并在MS+3.5 mg·L~(-1)6-BA+0.5 mg·L~(-1)IBA+0.1 mg·L~(-1)GA_3+0.3 mol·L~(-1)蔗糖的液体培养基中预培养24 h,随后用2 mol·L~(-1)甘油+0.4 mol·L~(-1)蔗糖的混合物在25℃下装载30 min,并用PVS2在25℃脱水20 min后将包埋的茎尖直接投入液氮保存。保存1 d后取出材料在40℃水浴快速复温3 min后,吸去冷冻管中PVS2,并用MS+3.5 mg·L~(-1)6-BA+0.5mg·L~(-1)IBA+0.1 mg·L~(-1)GA_3+1.2 mol·L~(-1)蔗糖的液体培养基在25℃洗涤3次,每次10 min。最后将茎尖接种于MS+3.5 mg·L~(-1)6-BA+0.5 mg·L~(-1)IBA+0.1 mg·L~(-1)GA_3的固体培养基上,暗培养3 d后转入正常的光周期中培养。红芽芋茎尖冻后成活率约为80%,其再生植株没有发生形态学的变化。这种包埋玻璃化法程序有望成为红芽芽茎尖超低温保存的常规方法。     

渗透剂对白刺花体细胞胚成熟及萌发的影响

该研究以蔗糖、麦芽糖、山梨醇及PEG(6000)为渗透剂,探讨了不同渗透剂对白刺花体细胞胚发育、胚成熟及萌发的影响。结果表明:白刺花下胚轴形成的胚性愈伤组织接种至MS+2,4-D 0.2 mg·L~(-1)+NAA 1.0 mg·L~(-1)+6-BA 2.0 mg·L~(-1)+TDZ 1.0 mg·L~(-1)+蔗糖40 g·L~(-1)+谷氨酰胺100 mg·L~(-1)+植物凝胶3g·L~(-1)的培养基上,体细胞胚发生率高达66. 21%,总胚数为79个; 7%蔗糖可使体细胞胚成熟率高达64.36%,同时也可提高多子叶畸形胚形成; 2%麦芽糖+2%山梨醇+4%蔗糖组合使体细胞胚成熟率最高达88.89%,畸形胚比例最低; 30 g·L~(-1)PEG培养时,体细胞成熟率最高,为82.35%;鱼雷期的体细胞胚最合适转接,可使体胚萌发率达90.58%,复合糖上培养得到的成熟体细胞胚生根率最高,为87.47%。这为实现白刺花体细胞胚育苗奠定了理论基础,并提供了可行的方案。     

芍药花药愈伤组织诱导及体细胞胚发生

以芍药(Paeonia lactiflora)品种粉玉奴花药为外植体,研究不同浓度2,4-D对愈伤组织诱导、体胚发生及植株再生的影响,采用组织细胞学方法观察愈伤组织以及体细胞胚发育过程,采用根尖染色体法鉴定再生植株倍性。结果表明,芍药花药愈伤组织诱导的最适培养基为MS+1 mg·L–1 2,4-D+1 mg·L–1 N...     

枇杷属野生植物种胚离体培养和植株再生研究

以枇杷属Eriobotrya植物11个野生种、1个远缘杂交后代材料为试材,采用胚为外植体,在不同植物生长调节剂配比培养条件下,进行胚离体培养和植株再生研究。结果表明,胚培养的最佳培养基配方为MS + 6-BA 1.0 mg·L-1 + KT 1.0 mg·L-1 + NAA 0.1 mg·L-1。在此培养基中,所有试验材料均获得成功,其中栎叶枇杷E. prinoides的萌发率和丛芽率均达100%,有效地建立了枇杷属野生种的胚离体培养及其植株再生体系。     

‘章姬’草莓茎段愈伤组织诱导及高频植株再生体系的建立

该研究以‘章姬’脱毒苗带节匍匐茎段为外植体,以MS为基本培养基,进行单因素预实验,选取适合‘章姬’草莓生长的植物激素种类和质量浓度范围,进而通过L_9(3~4)正交实验研究不同植物激素种类及其质量浓度对愈伤组织诱导、丛芽发生及植株再生的影响。结果表明:采用的3种基本培养基中,B_5和1/2MS对抑制培养过程中的褐化现象明显优于MS,而附加20 g·L~(-1)Na_2S_2O_3在保证材料存活的前提下,大大降低了褐化率;去除褐化的材料在MS+0.1 mg·L~(-1)6-BA+0.05 mg·L~(-1)2,4-D+0.1 mg·L~(-1)NAA中可同步进行愈伤组织诱导和丛芽发生;丛芽增殖培养基为MS+0.1 mg·L~(-1)6-BA+0.1 mg·L~(-1)NAA,30 d后繁殖系数可达12.86;试管苗生根则在1/2MS+1.0 g·L~(-1)AC中进行,35 d后可获得生长健壮的再生植株,生根率92.50%。再生苗移栽成活率在95%以上。该研究建立了‘章姬’草莓体外高效快速繁殖体系,对短期内为‘章姬’草莓栽培提供大量种性稳定、质量优良的种苗具有重要意义,同时为其他草莓品种的体外快繁提供了技术参考。     

大花蕙兰‘黄金小神童'胚性愈伤组织诱导及植株再生研究

为解决大花蕙兰园艺品种‘黄金小神童’（Cymbidium Golden Elf ‘Sundust’）人工繁育周期长、系数低等问题,该研究以其侧芽茎尖为外植体,在1/2MS+1.0 mg·L^-1 NAA+50 g·L^-1香蕉泥+15 g·L^-1蔗糖中培养60 d后,以获得的愈伤组织与原球茎混合物为材料,通过L₉ （3）⁴正交与完全组合实验研究不同因素及组合对‘黄金小神童’胚性愈伤组织和原球茎发生及增殖的影响,进而建立‘黄金小神童’高效、稳定的丛芽增殖和植株再生体系。结果表明：（1）在MS+2.0 mg·L^-1 6-BA+150 mL·L^-1椰汁+20 g·L^-1蔗糖中,培养70 d后增殖系数达8.13,同时可获得桑葚状原球茎团。（2）原球茎团在MS+1.0 mg·L^-1 6-BA+1.0 mg·L^-1 NAA中培养70 d后,原球茎发育为幼芽,丛芽发生系数可达5.36;此...     

盘龙参组织培养与快繁研究

以野生花卉植物盘龙参Spiranthes sinensis的芽、花序为外植体,探讨不同消毒处理及植物生长调节剂对盘龙参组织培养的影响,建立组织培养快繁体系。结果显示,以0.1%升汞消毒6 min处理效果较好;丛生芽形成、花序愈伤组织诱导最适合的培养基组合为1/2MS+6-BA 2.5 mg·L~(-1)+NAA 0.25 mg·L~(-1);最佳增殖培养基组合为1/2MS+6-BA 2.0 mg·L~(-1)+NAA 0.75 mg·L~(-1);最佳生根培养基为1/2MS+NAA 1.25 mg·L~(-1)。