苦橙叶精油化学成分及抗炎作用研究

为探究苦橙叶精油的抗炎作用。实验采用气相-质谱联用法(GC-MS)分析精油成分,并建立脂多糖(LPS)诱导RAW 264.7细胞炎症模型,用Griess法检测一氧化氮(NO)含量评价其体外抗炎作用,随后进一步通过巴豆油致小鼠耳肿胀模型和鸡蛋清致小鼠足肿胀模型评价其体内抗炎作用。结果表明苦橙叶精油成分以酯类、醇类物质为主;25μg/mL浓度能显著抑制RAW 264.7细胞NO的释放;中浓度苦橙叶精油能明显减轻小鼠耳肿胀程度;低、中、高浓度苦橙叶精油均对小鼠足肿胀模型有炎症缓解作用,并于肿胀前期呈浓度依赖性。以上实验证明苦橙叶精油在体外和体内具有一定抗炎作用。     

余甘子不同溶剂提取物抗炎活性的研究

本试验旨在筛选出余甘子不同溶剂提取物的最佳抗炎活性部位。试验以水、乙醇、乙酸乙酯和石油醚为提取溶剂得到余甘子不同溶剂提取物(水提取物分成三个组分:水(1)组分分子量小于6000;水(2)组分分子量在6000到10000之间;水(3)组分分子量大于10000),采用LPS诱导RAW264.7巨噬细胞建立炎症模型;以NO分泌量和细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)释放量为指标,筛选出余甘子不同溶剂提取物最佳抗炎活性部位。余甘子不同溶剂提取物在浓度25~400μg/m L之间对细胞无明显细胞毒性(P0.05)。与模型组相比,水(1)、水(2)和乙醇提取物能显著抑制LPS诱导巨噬细胞分泌NO(P0.05)。在细胞因子实验中,乙醇提取物极显著抑制LPS诱导RAW264.7巨噬细胞分泌IL-1β和TNF-α(P0.01);乙酸乙酯提取物抑制LPS诱导RAW264.7巨噬细胞分泌IL-6的效果最佳。综合评价得出余甘子乙醇提取物作为筛选出的最佳抗炎活性部位,其极显著抑制LPS诱导RAW264.7巨噬细胞分泌NO和细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6),可以作为后续分离鉴定抗炎活性物质单体的活性部位。     

阻断Kv1.3通道可增强RAW264.7巨噬细胞的吞噬功能

本研究旨在阐明电压门控性钾通道1.3(Kv1.3)在巨噬细胞吞噬功能中的作用.利用RAW264.7巨噬细胞吞噬鸡红细胞的半定量检测系统及吞噬异硫氰酸荧光素标记的大肠杆菌(E.coli)k-12的流式细胞术定量检测系统测定巨噬细胞的吞噬功能.研究发现,用海葵神经毒素(Sh K)(100 pmol/L)选择性阻断Kv1.3通道能显著增强处于静息状态的和被脂多糖(LPS)激活的RAW264.7巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力;Sh K也可增强静息RAW264.7细胞吞噬大肠杆菌的能力,但由于LPS刺激吞噬的效应近乎饱和,Sh K并不能进一步增加被LPS激活的RAW264.7细胞吞噬大肠杆菌的数量.Sh K促进LPS激活的RAW264.7细胞释放一氧化氮(NO),但并不增加静息RAW264.7细胞的NO释放.Sh K(100 pmol/L)自身并不影响静息RAW264.7细胞释放细胞因子,但能抑制LPS激活的RAW264.7细胞释放白细胞介素-1?.Sh K(100 pmol/L)对RAW264.7细胞的活力无明显影响.RAW264.7细胞表达Kv1.3通道蛋白;LPS使RAW264.7细胞的Kv1.3蛋白表达下调,菲律宾菌素Ⅲ(小凹蛋白依赖性内吞途径抑制剂)使Kv1.3蛋白表达上调,细胞松弛素D对Kv1.3蛋白表达无明显影响.研究表明,RAW264.7细胞表达Kv1.3蛋白;阻断Kv1.3通道可增强RAW264.7细胞的吞噬能力和NO生成.结果提示,Kv1.3通道可能是RAW264.7细胞吞噬活动的负调节因子,有可能成为治疗巨噬细胞吞噬功能异常相关疾病的一个靶点.     

麻欠产地对精油化学成分及抗炎效果的影响

为了进一步探究麻欠的产地对精油成分和抗炎效果的影响,本研究针对从西双版纳州的勐仑、勐旺、勐醒三个地点采集的麻欠果实,以水蒸馏法提取精油,用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术分析化学成分并用RAW 264.7细胞研究抗炎效果。精油共鉴定出21种化合物,以烯、醇类物质组成为主。其中勐仑与勐醒所产精油成分含量相似,与勐旺所产精油差异较大。溶剂对照、地塞米松或麻欠精油预处理RAW264.7细胞后,LPS处理培养24 h后,测定NO、TNF-α的含量。三地精油对LPS刺激产生的NO和TNF-α均有显著抑制作用。结果表明,虽然三个地点的麻欠精油成分有差异,但是抗炎效果相当。     

恰麻古多糖对巨噬细胞RAW264.7体外免疫调节作用初探

初步探讨恰麻古粗多糖BRP、中性多糖BRNP-1、BRNP-2及酸性多糖BRAP-1、BRAP-2对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用。实验方法选用CCK-8法检测不同质量浓度各恰麻古多糖组对巨噬细胞RAW264.7细胞增殖率的影响;以中性红法观察各组恰麻古多糖对巨噬细胞RAW264.7吞噬活性的影响;Griess法测定恰麻古多糖致巨噬细胞RAW264.7对NO的释放水平;采用酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒检测细胞因子TNF-α(肿瘤坏死因子)与IL-6(白介素-6)分泌水平。实验结果显示不同质量浓度各恰麻古多糖组能够显著提高巨噬细胞RAW264.7增殖率与对中性红的吞噬活性,并能够刺激巨噬细胞释放NO,且促进其TNF-α及IL-6分泌水平。通过实验,初步验证了各恰麻古多糖具有良好的生物活性,并对巨噬细胞RAW264.7具有免疫调节作用。     

连翘脂素对LPS诱导RAW264.7细胞炎症反应的影响

为研究连翘脂素的抗炎效应及其抗炎机制,以地塞米松作为阳性对照,建立脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症模型,检测炎症因子的释放及相关蛋白和mRNA的表达,以期提高对连翘脂素抗炎作用的全面认识并为连翘脂素临床开发提供有力的科学依据。实验采用Griess法检测细胞上清液中NO含量,ELISA法检测TNF-α和IL-6的含量,Westernblot法检测iNOS、COX-2蛋白的表达,RT-qPCR法检测iNOS、COX-2mRNA的表达。与LPS组比较,连翘脂素组和地塞米松组可以明显降低LPS诱导的RAW264.7细胞释放NO、TNF-α和IL-6的量,并呈现浓度依赖关系。Westrenblot和RT-qPCR结果显示连翘脂素能抑制LPS诱导的iNOS、COX-2的蛋白表达以及mRNA的表达,并呈浓度依赖关系。实验研究表明连翘脂素能够明显抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症因子的释放,iNOS、COX-2蛋白及mRNA的表达从而抑制炎症反应。     

表没食子儿茶素-3-没食子酸酯抑制脂多糖诱导的巨噬细胞促炎因子TNF-α和IL-1β基因表达

表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)具有抗氧化、抗癌、抗炎等多种生物学特性,但对巨噬细胞中表达TNF-α及IL-1β的报告尚存在争议.本文旨在探索EGCG对脂多糖(LPS)诱导的小鼠腹腔巨噬细胞和RAW264.7细胞促炎细胞因子Tnf-α和Il-1β基因表达的影响.MTT结果显示,0~100μmol/L EGCG对RAW264.7细胞活力没有影响;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和ELISA分析显示,1 mg/L LPS可显著升高小鼠腹腔巨噬细胞和RAW264.7细胞Tnf-α和Il-1βmRNA和蛋白水平,EGCG单独处理对巨噬细胞Tnf-α和Il-1β的基因表达与蛋白生成没有影响,但可以抑制LPS诱导的巨噬细胞Tnf-α和Il-1β的基因表达与蛋白生成,并存在剂量依赖效应.上述结果提示,EGCG可以剂量依赖方式抑制LPS诱导的巨噬细胞促炎细胞因子Tnf-α和Il-1β的表达,这可能与EGCG的抗炎效应有关.     

山香圆叶挥发油化学成分及抗氧化和抗炎活性研究CSCD

山香圆叶具有较好的临床疗效,但其挥发油的化学成分和生物活性尚未深入研究。本文应用超临界萃取法提取其挥发油,采用GC-MS对其小极性物质进行全面分析(甲酯化和非甲酯化),并对其中等极性物质进行LC-MS分析,采用了DPPH法和ABTS法测定了其抗氧化活性,采用LPS诱导RAW 264.7细胞模型探索山香圆叶挥发油的抗炎活性。GC-MS非甲酯化和甲酯化分别鉴定了38和42个化合物,主要为亚油酸、γ-谷甾醇、角鲨烯、2,2′-亚甲基双-(4-甲基-6-叔丁基苯酚)、反-9-十八碳烯酸、棕榈酸等物质。LC-MS的正负离子模式下,共鉴定出256个化合物,主要为萜类、苯丙素类、酚类、黄酮类、生物碱类、香豆素及其衍生物类、脂肪酰类、倍半萜类、脂肪酸类等化合物。活性研究表明,山香圆叶挥发油具有较好的抗DPPH和ABTS自由基能力,同时能显著抑制LPS诱导RAW 264.7细胞NO和IL-6的释放量,且成剂量依赖性。以上结果表明,山香圆叶挥发油具有较复杂的化学成分,并具有较好的抗氧化和抗炎作用,可作为开发功能性食品和药品的天然来源。     

山银花油GC-MS及LC-MS的全成分表征及体外抗炎和抗氧化活性研究

山银花是一种有价值的药用资源,但其油的化学成分和生物活性尚未深入研究。本文通过气相色谱-质谱仪联用法(GC-MS)及超高效液相色谱-高分辨质谱联用(UHPLC-QE-MS)对超临界CO₂萃取法得到的山银花油进行系统的化学成分表征,并探讨其体外抗氧化及细胞抗炎能力等生物活性。GC-MS共鉴别出66种化合物,主要为脂肪酸类、甾醇类和烷烃类化合物。UHPLC-QE-MS在正负离子模式下分别鉴别出83和71种化合物,主要为萜类、黄酮类等化合物。抗氧化结果表明山银花油清除ABTS自由基能力呈良好的剂量依赖性,DPPH自由基的IC₅₀值为3.49 mg/mL。同时抗炎实验表明山银花油可显著抑制脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞(RAW 264.7)炎性因子IL-6(P<0.05)和NO(P<0.05)的释放,发挥抗炎作用。以上结果表明,山银花油化学成分复杂多样,是一种具有较优抗炎作用的天然活性来源,且在食品医药中有较好的开发和应用价值。     

桑白皮中sanggenon B对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应的影响

采用硅胶柱层析等方法从桑白皮中分离出抗炎活性化合物,通过波谱分析进行化合物结构鉴定。体外培养RAW264.7细胞,构建脂多糖(LPS)诱导炎症模型,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞活性,利用Griess法和酶联免疫吸附(ELISA)法分别检测炎症因子一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的释放量,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot技术分别测定诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶-2(COX-2)mRNA和蛋白的表达水平。结果显示:桑白皮乙醇提取物(MRE)能显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO的分泌水平,且呈现量效关系。对桑白皮进行分离,得到1种抗炎活性化合物,经波谱数据分析,确定其为已知的Diels-Alder加合物桑根酮B(sanggenon B)。抗炎活性表明,sanggenon B显著下调了炎症因子NO、TNF-α、IL-6的合成,并抑制了RAW264.7细胞中i NOS、COX-2 mRNA和蛋白的表达水平。研究表明,从桑白皮中分离出的sanggenon B具有一定的抗炎作用,其抗炎机制可能与调控炎症因子的合成,降低i NOS、COX-2表达有关。     

黄芪甲苷Ⅳ对内毒素诱导RAW264.7细胞损伤的保护作用及机制研究

目的:研究黄芪皂苷Ⅳ对LPS诱导的巨噬细胞RAW264.7损伤的保护作用及机制.方法:测定细胞活力判断心肌细胞损伤的程度.TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-10的释放以及NF-кB蛋白、Akt和磷酸化Akt表达用以研究作用机制.结果:黄芪皂苷Ⅳ对LPS引起的RAW264.7细胞损伤具有显著的抑制作用,1,3和10μM黄芪皂苷Ⅳ可显著降低LPS诱导的RAW264.7细胞TNF-α,IL-1β和IL-6的生成,促进IL-10的释放.黄芪皂苷Ⅳ剂量依赖性地增加了由LPS刺激而引起的RAW264.7细胞NF-kB蛋白的表达,抑制了LPS所致的p-Akt蛋白表达的升高.结论:黄芪皂苷Ⅳ可通过Akt-NF-kB途径调控促炎因子和抗炎因子表达的失衡,有效发挥对LPS诱导巨噬细胞RAW264.7损伤的保护作用.     

氢生理盐水对小鼠足肿胀的抗炎效应

目的:研究氢生理盐水对角叉菜胶诱导足肿胀的抗炎效应.方法:以角叉菜胶诱导小鼠足肿胀为实验模型,通过测量足肿胀程度和中性粒细胞浸润程度来衡量炎症的严重度,进而研究氢生理盐水对于该炎症模型是否具有抗炎效应;并以巨噬细胞为切入点,采用RT-PCR和EUSA的方法来检测氢生理盐水对TNF-а分泌的影响,进而研究氢生理盐水对炎性细胞的作用.结果:氢生理盐水能够显著抑制角叉菜胶诱导的足肿胀,能够抑制炎症局部中性粒细胞的浸润,能够降低活化巨噬细胞的TNF-а的mRNA水平并能抑制巨噬细胞分泌TNF-а.结论:氢生理盐水不论在角又菜胶诱导的足肿胀动物模型上还是在LPs激活的巨噬细胞上都具有明显的抗炎效应,这一效应很可能是通过清除羟自由基、亚硝酸阴离子等自由基来实现的.     

艾纳香油中抗炎成分的筛选及其对炎性因子的影响

为了寻找艾纳香油中的抗炎物质,并研究其对巨噬细胞炎性因子的影响,本文采用动物炎症模型筛选艾纳香油中具有抗炎活性的部分化合物,再检测目标化合物对LPS刺激RAW264.7细胞中相关炎性因子的影响.发现艾纳香油中(-)-芳樟醇、反式-石竹烯抗炎活性最佳,且不同剂量的(-)-芳樟醇、反式-石竹烯均能抑制LTB4、PGE2、N...     

IFITM3在脓毒症模型及胆碱能抗炎模型中的表达

目的:探讨干扰素诱导的跨膜转运蛋白3(IFITM3)在LPS刺激的RAW264.7细胞系的脓毒症模型中的表达以及胆碱能抗炎模型中的表达。方法:用1μg/mL LPS刺激RAW264.7细胞24、48、72 h后,用Western-Blot法检测各组细胞IFITM3蛋白表达水平。用1μg/mL LPS刺激RAW264.7细胞后,给予50μM胆碱能受体激动剂GTS-21以及同时给予100 n M胆碱能受体拮抗剂α-BGT刺激细胞24 h后,用Western-Blot法检测各组细胞IFITM3蛋白表达水平。用ELISA法检测IL-1β的方法验证脓毒症模型和胆碱能抗炎模型的建立。结果:(1)1μg/mL LPS刺激RAW264.7细胞后,IFITM3蛋白表达明显降低(P0.01)。(2)1μg/mL LPS刺激RAW264.7细胞后再给予50μM GTS-21,IFITM3蛋白表达明显升高(P0.001);而给予100 nMα-BGT后,IFITM3蛋白表达明显降低(P0.001)。结论:LPS刺激的RAW264.7细胞IFITM3蛋白表达降低。给予胆碱能激动剂GTS-21后能够逆转LPS诱导的IFITM3表达的降低,给予胆碱能受体拮抗剂α-BGT则能阻断这种现象。IFITM3有可能在脓毒症中发挥保护作用,并且参与了胆碱能抗炎通路抗炎过程的调节。     

红毛五加多糖单一组分AHP-Ⅲ对巨噬细胞的免疫调节作用及其机制

探讨红毛五加多糖(Acanthopanax giraldii Hams polysaccharide)单一组分AHP-Ⅲ(Acanthopanax giraldii Hams polysaccharideⅢ)对小鼠巨噬细胞RAW 264.7的激活作用及机制。不同浓度AHP-Ⅲ作用RAW 264.7细胞,中性红试验检测细胞吞噬能力;ELISA和Griess法检测其IL-6、TNF-α和NO的释放量;RT-qPCR检测iNOS、TNF-α和IL-6 mRNA相对表达水平;Western blot检测NF-κB信号通路相关蛋白磷酸化水平。在实验浓度范围内,AHP-Ⅲ可显著增强RAW 264.7细胞的吞噬能力(P<0.05);促进RAW 264.7分泌NO、TNF-α和IL-6(P<0.05或P<0.001);并显著增加RAW 264.7细胞中IL-6、TNF-α和iNOS mRNA的表达量,呈剂量依赖性;Western blot结果表明,AHP-Ⅲ作用RAW 264.7细胞后,NF-κB中的p65、IKKβ、IκBα磷酸化水平明显升高。结果显示红毛五加多糖AHP-Ⅲ对小鼠巨噬细胞RAW 264.7具有显著激活作用。     

2-环戊氨基-5,8-二甲氧基-1,4-萘醌抑制LPS诱导的RAW264.7细胞内ROS水平与NO的分泌

炎症反应过程中有效控制巨噬细胞一氧化氮(niric oxide,NO)的过度分泌和细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,对抑制LPS诱导的巨噬细胞过度活化和巨噬细胞介导的急性炎症反应具有重要的临床意义。该研究检测了以5,8-二甲氧基-1,4-萘醌(5,8-dimethoxy-1,4-naphthoquinone,DMNQ)为中间体,通过有机合成反应获得的6种新萘醌类衍生物对LPS诱导的RAW264.7细胞NO分泌和细胞内ROS水平的抑制效果及其机理。结果显示,在6种新合成的化合物中,2-环戊氨基-5,8-二甲氧基-1,4-萘醌具有明显抑制RAW264.7细胞NO分泌和细胞内ROS水平的效果,同时不影响细胞的吞噬能力。另外,通过对细胞信号传导通路的分析发现,#6化合物能够有效地抑制ROS依赖性的ERK和JNK磷酸化水平,最终发挥降低LPS诱导的RAW264.7细胞NO分泌和i NOS蛋白质表达的作用。     

蔓三七茎多糖理化性质及抗氧化和免疫调节研究

为提取蔓三七茎中的多糖及研究它的理化性质并评价其抗氧化、免疫调节活性,以蔓三七茎为原料,采用水提醇沉法获得蔓三七茎粗多糖(GPSCP),先测定了粗多糖的含量、糖醛酸含量、硫酸根含量、蛋白质含量。再采用Sevage试剂和透析法对蔓三七茎粗多糖进行纯化,得到蔓三七茎多糖(GPSP)。采用气相色谱法测定GPSP中单糖组分和红外光谱测定多糖的结构,通过总抗氧化能力、DPPH自由基、OH自由基的清除能力评价GPSP的体外抗氧化能力;通过体外实验评估GPSP对RAW264.7巨噬细胞免疫调节活性。结果表明,所得GPSCP的得率为15.56%,总糖含量为52.32%;GPSP的得率为8.67%,含量为78.54±2.13%;GPSP中单糖组成为鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖,摩尔比为1.69∶4.64∶9.17∶1.00∶1.92∶4.85。体外抗氧化实验结果表明,GPSP具有良好的抗氧化能力,对总抗氧化能力、DPPH和OH自由基清除效果明显。GPSP可显著提高RAW264.7细胞内一氧化氮(NO)的浓度,在给药浓度为50.0μg/mL时,NO的分泌量达到最大,为39.28±3.25μmol/L,GPSP可以提高免疫力,在功能食品的开发中,可以作为一个潜在的免疫调节剂。     

灵芝菌丝体冻干粉对脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞相关因子分泌及蛋白表达的影响

通过体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,脂多糖(LPS)诱导刺激,考察了不同浓度灵芝菌丝体冻干粉(FDPGLM)处理后细胞活力、NO和IL‐6水平、Toll样受体4(TLR4)和i NOS m RNA表达、IκBa和磷酸化核转录因子κB(NF‐κB)p65蛋白表达之间的差异。结果显示:相对于LPS诱导来说,FDPGLM能以剂量依赖的方式显著抑制LPS诱导引起的NO和IL‐6水平上升(P0.01),显著下调TLR4 mRNA表达(P0.01),并显著抑制IκBa蛋白降解和NF‐κB p65蛋白磷酸化(P0.01),由此推测在LPS诱导的RAW264.7细胞中,FDPGLM可能经由TLR4/NF‐κB信号途径抑制促炎基因的激活并抑制促炎细胞因子比如IL‐6的分泌,提示FDPGLM在抗炎药理作用上的应用前景。     

绣球菌多糖表征及其抗氧化和免疫活性

提取纯化绣球菌多糖(Sparassis latifolia polysaccharides,SCPs),研究其表征和功能活性,探索绣球菌多糖表征与其抗氧化及免疫活性之间的关系。以绣球菌子实体为原料,采用聚能超声波辅助水提醇沉法提取绣球菌多糖,经DEAE-52、SephadexG-100纯化,用高效凝胶渗透色谱法、离子色谱法、傅里叶红外色谱法、扫描电镜、原子力显微镜对绣球菌多糖进行初步表征,检测绣球菌多糖清除DPPH、·OH、O2^-·自由基能力以及总还原力,用MTT法检测绣球菌多糖对巨噬细胞RAW264.7增殖的影响。结果表明,SCPs分子量范围为215Da–393kDa,由葡萄糖、甘露糖、半乳糖、木糖、果糖构成,摩尔比13:4:1:2:3,其表观形貌为簇状堆积,交织,结构规律性不强,表面光滑,呈一定的网络状结构,分子呈现链状构象,具有高度的分支结构,链间形成小环且伴随一定的球形颗粒。SCPs具有一定的还原能力和清除DPPH、·OH、O2^-·自由基的能力,且能够促进巨噬细胞RAW264.7的增殖。绣球菌多糖的抗氧化及免疫活性可能与其分子量、单糖组成、糖链分支及分子构象有关。     

合萌水提物抗炎镇痛作用的实验研究

目的:观察合萌水提物的抗炎、镇痛作用。方法:采用二甲苯致小鼠耳肿胀、角叉菜胶致小鼠足跖肿胀、醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加及醋酸致小鼠扭体实验、热板实验模型,观察合萌水提物的抗炎镇痛作用,并测定丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:合萌水提物可抑制二甲苯致小鼠耳肿胀,减轻小鼠足跖肿胀,降低小鼠毛细血管通透性,减少醋酸致小鼠扭体次数,增加热板小鼠痛阈值,降低血清MDA、NO含量,提高血清SOD活性。结论:合萌水提物具有抗炎镇痛作用,作用机制可能与降低血管通透性、抑制NO等炎症介质产生及增强清除自由基、抗脂质过氧化能力有关。