皱纹盘鲍消化腺的超微结构

在电镜下研究了大连地区皱纹盘鲍消化腺的超微结构。结果表明,皱纹盘鲍同其它腹足纲软体动物一样,消化腺由消化细胞、排泄细胞和钙细胞三种细胞类型组成。消化细胞呈柱状或锥体形,数量最多,细胞表面具微绒毛,顶端胞质内具顶颗粒,细胞中央区域具有许多“具电子致密核心池”结构,细胞基部胞质内含成簇的脂滴,线粒体球形或不规则,游离核糖体丰富。胞核椭圆形或不规则,位于细胞的基部,染色质多呈块状散布于核内,亦有少量贴核膜分布,核仁一个,十分明显。排泄细胞形状和结构与消化细胞相似,其主要特征是在细胞的在部区域内具有许多含高电子致密物的大液泡。钙细胞呈锥体形,大多分布在消化细胞和排泄细胞的基部,其主要特征是细胞内具有许多呈同心环状的钙粒子。     

皱纹盘鲍肾脏的组织化学和超微结构

以组织学、组织化学和透射电镜观察等方法研究了皱纹盘鲍（Haliotis discus hannai)的肾脏。肾脏由无数肾小管和集合管组成。肾小管上皮细胞游离面有明显的刷状缘,并有少量纤毛,细胞顶端存在大量直径为0.8-1.8μm的折光小体,组化研究显示小体内含铁。基底端质膜高度内折,并呈碱性磷酸酶活性。上皮细胞与血窦仅有基底膜相隔,细胞内最具特征性的结构是“膜囊体”,光镜下它呈嗜酸性团块,组化研究显示含丰富的蛋白质,电镜下观察它由双层单位膜围成的众多的小管及扁囊构成,小管的直径或扁囊的高度为30－80nm,某一局部的小管或扁囊的形状及排列很有规律性。“膜囊体”的性质尚不清楚。除纤毛数量增加和“膜囊体”较小一局部的小管或扁囊的形状主排列很有规律性。“膜囊体”的性质尚不清楚。除纤毛数量增加和“膜囊体”较小外,集合管上皮细胞的组织化学和超微结构类似于肾小管上皮细胞。在集合管和腔上皮还存在少量的粘液细胞。     

皱纹盘鲍的染色体研究

本文报道皱纹盘鲍的染色体制备方法及核型分析结果。皱纹盘鲍的2n=36,可配为18对,中央着丝点(M)的11对,即1,3,6,7,9,11,12,13,14,16,17号染色体。亚中央着丝粒(Sm)的7对,即2,4,5 8,15,18号染色体,NF=72。染色体的长度呈连续递变。其中相对长度最长的1号染色体为7.09,最短的18号染色体4.11,单倍体总长687.05。     

皱纹盘鲍齿舌形成的研究

对不同发育阶段的皱纹盘鲍齿舌发育状况及成鲍齿舌囊组织结构切片的光镜观察,了解齿舌开始出现的时期、发育状况及如何形成的.稚鲍剥离时的大量死亡与齿舌形态发育没有直接的联系.     

皱纹盘鲍受精过程的电镜观察

本文用透射电镜观察了皱纹盘鲍的受精过程。鲍卵子的胶膜使精子活化,并诱发了顶体反应,卵黄膜使顶体反应达到高潮。精子入卵后,卵发生皮层反应并形成受精膜开 减数分裂。此外,还观察到鲍的多精入卵现象。     

皱纹盘鲍脓毒败血症的流行病学研究

在１９９２年９月到１９９５年１１月间,我们对辽宁、山东沿海数个皱纹盘鲍Ｈａｌｉｏｔｉｓｄｉｓ－ｃｕｓｈａｎｎａｉＩｎｏ．产区进行了实地调查和样本的细菌学检验,证实了鲍脓毒败血症的发生和流行遍布辽宁、山东沿海,发现：病原菌Ｖｉｂｒｉｏｃａｍｐｌｂｅｌｉ主要是在鲍的消化道内越冬的。海水温度是启动鲍脓毒败血症爆发、流行和结束的首要因子。在浮筏式养殖体系中,Ｖ．ｃａｍｐｂｅｌｉ主要是经由消化道感染鲍的。人工感染实验中,第一周内的死亡数占总死亡数的７０％以上。     

皱纹盘鲍脓疱病的组织学和超微结构研究

１９９３年９月以来,大连地区许多养鲍厂的皱纹盘鲍都发生了严重的脓疱病。通过病理组织切片研究证明,脓疱病的病灶是从鲍足下表面开始逐渐扩展向足的深部,由于该病的唯一病原菌－河流弧菌Ⅱ的大量繁殖瞳的结缔组织、肌纤维坏死瓦解或破碎,病灶中只剩下鲍的血淋巴细胞、弧菌及细胞碎片。     

幼龄皱纹盘鲍唾液腺和消化腺的超微结构与组织化学

以透射电镜观察和组织化学方法研究了45日龄皱纹盘鲍的唾液腺和消化腺。唾液腺由粘液细胞和纤毛细胞组成,粘液细胞含发达的粗面内质网和大量的粘原颗粒,分泌中性和酸性混合粘多糖。消化腺由消化细胞和嗜碱性细胞组成,消化细胞呈现活跃的内吞和细胞内消化,并具蛋白酶和非特异性酯酶活性。嗜碱性细胞含发达的粗面内质网和大量含铁的折光小体,折光小体的电子密度较低。     

皱纹盘鲍消化腺细胞类型和分泌产物

对皱纹盘鲍消化腺进行了组织学、组织化学、超微结构及酶活性测定等研究。消化腺由消化细胞和嗜碱性细胞组成。消化细胞能内吞腺管腔内的外源性物质,细胞内充满大量与异噬功能有关的囊泡。消化细胞具有内吞和细胞内消化、分泌、贮存等功能。嗜碱性细胞含有发达的粗面内质网以及许多含铁的折光小体,具有分泌和贮存金属离子的功能。消化腺还呈现多种水解酶活性。     

皱纹盘鲍肠粘膜上皮的结构和功能

以透射电镜和扫描电镜观察、组织化学及酶活性测定等方法研究了皱纹盘鲍的肠和直肠,肠和直肠粘膜上皮由5种细胞组成。具微绒的柱状细胞呈现吸收细胞的超微结构特征,纤毛柱状细胞参与运输食物颗粒和粪便,Ⅰ型腺细胞具蛋白酶、非特异性酯酶和脂酶活性,以顶浆分泌形式分泌消化酶,Ⅱ型腺细胞分泌物可能与包裹粪便有关,状细胞分泌酸性粘多糖。体外酶活性分析表明肠和直肠粘膜上皮分别具有4种和3种植物多糖酶。     

皱纹盘鲍伴侣蛋白CCTζ的分子克隆及其在不同锌含量日粮处理下的表达分析

伴侣蛋白CCT在蛋白折叠、抗胁迫以及调节细胞生长等生理过程中担负重要作用。研究利用同源克隆和RACE技术克隆了皱纹盘鲍伴侣蛋白CCTζ(HdhCCTζ)cDNA全长序列,并对CCTζ基因的序列特征进行了分析。HdhCCTζcDNA序列长1960 bp,开放阅读框为1599 bp,编码532个氨基酸,生物学软件推测其编码蛋白相对分子量为58.46 kD,等电点为6.53。BLAST分析结果表明HdhCCTζ与哺乳动物、鸟和鱼类等物种的CCT具有较高的同源性。生物信息学分析结果显示,HdhCCTζ蛋白序列中包含3个典型的CCT信号基序(35RTNLGPKGTLKML47,56LTKDGNVLLHEMQIQHP72和84QDDITGDGT92)以及1个腺苷三磷酸结合基序(89GDGTTS94)。此外,在HdhCCTζ蛋白序列中还包含3个糖基化位点(23NISA26,128NKSL131and234NVSL237)。实时荧光定量PCR检测结果显示,HdhCCTζ在皱纹盘鲍组织中为组成型表达,但主要集中在性腺、血淋巴和肝胰腺中表达。使用不同锌含量(6.69 mg/kg、33.85 mg/kg、710.63 mg/kg和3462.5 mg/kg)的日粮来饲喂幼鲍20周后,取其肝脏和血细胞总RNA,利用实时荧光定量PCR技术进行HdhCCTζmRNA的表达水平分析。分析结果显示,随着日粮中锌含量的增加,HdhCCTζmRNA在血淋巴和肝胰腺中的表达水平呈现上调的趋势。相比于锌适量组(33.85 mg/kg),过量的锌(3462.5 mg/kg)却能够下调HdhCCTζmRNA的表达水平。上述结果表明,HdhCCTζ的表达受到日粮中锌添加量的影响,而高表达量的HdhCCTζ可能在提高皱纹盘鲍机体抗胁迫过程中发挥重要作用。     

饲料中钾对皱纹盘鲍幼鲍生长及其生理指标的影响

在以酪蛋白和明胶为蛋白源的半精制基础饲料中,添加不同浓度梯度的钾(0、2、4、8、16、32 g钾/kg饲料),钾源为KCl,配制成6种实验饲料(实测钾含量分别为:0.10、2.12、4.39、9.79、20.08和27.26 g/kg),探讨皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)幼鲍对饲料中钾的需求量及其在长期适应不同含量钾的过程中的生理反应。幼鲍初始体重为(0.24±0.00)g,初始壳长为(12.24±0.04)mm,实验在流水系统中进行,养殖周期为15周。实验期间水温12—23℃,海水钾含量为(472.94±3.59)mg/L。结果表明,饲料中不同含量的钾对皱纹盘鲍的增重率(WGR,%)、贝壳日增长(DISL,μm/d)及存活率没有显著影响(P>0.05)。皱纹盘鲍软体部的水分、粗脂肪和贝壳的灰分含量受饲料中钾含量的影响不显著(P>0.05)。当饲料中钾含量大于等于4.39 g/kg时,与0.10 g/kg饲料组相比,软体部粗蛋白质含量显著升高(P<0.05)。软体部钾的含量和贝壳中钾、钠的含量受饲料中钾含量的影响不显著(P>0.05)。幼鲍软体部钠含量在饲料钾含量为20.08、27.26 g/kg时显著低于其他各组(P<0.05)。鳃Na+-K+ATP酶活力随着饲料中钾含量的增加逐渐下降,当饲料中钾含量为20.08、27.26g/kg时,与0.10 g/kg组相比显著降低(P<0.05),但与其他组相比差异不显著。因此研究认为:以生长指标为判据,不需要在饲料中补充钾,海水中钾和饲料原料中的钾能够维持皱纹盘鲍幼鲍的正常生长;但以生理指标(软体部粗蛋白质和钠含量,鳃Na+-K+ATP酶活力)评判,饲料中钾的适宜含量为2.12 g/kg。     

饲料硒和维生素E对大鼠机体抗氧化能力的影响

 用克山病病区粮配成基础低硒饲料,补充硒和/或维生素E组成四种不同水平的饲料,饲喂雄性断乳大鼠,观察其对机体抗氧化能力的影响。评价指标是用抗坏血酸诱发的红细胞溶血率、被O~-_2(超氧阴离子)氧化的血红蛋白量和组织中的TBA值。动物饲养13周后,自尾静脉取血,测定溶血率和血红蛋白被氧化的百分率,和全血SeGSHPx(含硒谷胱甘肽过氧化物酶)活力。15周后将动物断头杀死,立即取出心脏和肝脏测定SeGSHPx活力和TBA值。结果表明在克山病病区粮的饲料中补充硒或维生素E,或者二者同时补充均明显提高组织中的SeGSHPx活力和降低组织中的TBA值。不论在硒缺乏时或硒充足时,饲料中补充维生素E显著降低抗坏血酸诱发的红细胞溶血率,对O~-_2氧化血红蛋白无保护作用。在维生素E缺乏时,仅补充硒对溶血无作用。不论饲料中维生素E缺乏或者充足,补充硒对O~-_1氧化血红蛋白均有显著保护作用。     

VE和L-肌肽对大菱鲆幼鱼生长、抗氧化、非特异性免疫及血清生化指标的影响

实验以大菱鲆（Scophthalmus maximus）幼鱼[（14.00±0.02）g]为研究对象,采用2×4双因素设计,设2个VE水平（0和75 mg/kg）和4个L-肌肽水平（0、50、100和200 mg/kg）,研究VE和L-肌肽对其生长、抗氧化、非特异性免疫及血清生化指标的影响。实验共分8组,每组3个重复,每个重复46尾鱼,实验周期为8周。结果显示:（1）在饲料中添加75 mg/kg VE显著提高了大菱鲆幼鱼增重率（WGR）和特定生长率（SGR）（P < 0.05）,L-肌肽添加量≤100 mg/kg对实验鱼生长性能无显著影响（P>0.05）,添加量为200 mg/kg时鱼体WGR、SGR和蛋白质效率（PER）显著降低,饲料系数（FCR）显著升高（P < 0.05）;（2）VE和L-肌肽对血清谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、过氧化氢酶（CAT）活性和丙二醛（MDA）含量及肝脏总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）活性和MDA含量均具有显著的交互作用（P < 0.05）,在VE 75 mg/kg水平下,L-肌肽添加量为50和100 mg/kg时血清GSH-PX活性最高,L-肌肽添加量为100和200 mg/kg时血清CAT活性最高且与添加量为50 mg/kg差异不显著（P>0.05）,添加100 mg/kg肝脏T-AOC和SOD活性达到最高且50 mg/kg组的SOD与100 mg/kg组差异不显著（P>0.05）,主效应结果显示,VE显著提高了血清T-AOC、SOD及肝脏CAT活性（P < 0.05）,L-肌肽显著提高了血清T-AOC（P < 0.05）;（3）VE和L-肌肽对血清补体C3和LZM活性交互作用显著,在75 mg/kg VE水平下,L-肌肽添加量为50 mg/kg时,补体C3水平最高（P < 0.05）,主效应显示,VE和L-肌肽对血清总蛋白（TP）影响均不显著（P>0.05）;（4）添加VE显著降低了血清总胆固醇（TCHO）和甘油三酯（TG）含量（P < 0.05）,添加L-肌肽显著降低了血清TG含量,且在L-肌肽50 mg/kg时达到最低。综合考虑大菱鲆幼鱼[（14.00-39.43）g]的生长性能、抗氧化性能、非特异性免疫及血清生化指标得出,在实验配方条件下（鱼油70 g/kg,大豆卵磷脂10 g/kg）,添加VE 75 mg/kg时,L-肌肽的适宜添加量为50 mg/kg。