"生物组织中可溶性糖、脂肪、蛋白质的鉴定"实验的改进

新编高中《生物》教材中增加了“生物组织中可溶性糖、脂肪、蛋白质的鉴定”实验 ,这是一个生物化学、组织化学的定性实验 ,方法简单易操作 ,但对条件有一定要求。学生操作中往往会因忽视必要的条件而失败或降低实验效果。本文介绍我们对该项实验进行的探讨和认识。1　实验材料的准备1 .1　可溶性糖的鉴定实验　苹果、梨和白心萝卜含糖量都较高 ,其中苹果的含糖量最高 ,实验效果也很明显 ,但要注意 ,苹果组织液必须临时制备 ,切勿保存时间过长。因苹果多酚氧化酶含量较高 ,组织液很易被氧化成褐色 ,将反应产生的颜色掩盖。气温低时 ,这种酶…     

抗大鼠巨噬细胞和多形核白细胞单克隆抗体的制备和应用

前言在研究工作中应用单克隆抗体在许多实验动物中鉴定淋巴细胞的群体和亚群是极其有用的。在一些实室验里已经制备成功几种与大鼠淋巴细胞表面抗原相反应的单克隆抗体OX—1 OX—6及抗T细胞的单克隆抗体。但是,迄今尚未涉及到抗大鼠巨噬细胞和多形核白细胞的单克隆抗体。而单核巨噬细胞和多形核白细胞则是免疫反应的重要组成部分。因此制备针对这些细胞的单克隆抗体,已成为大鼠角膜移植实验和其他有关实验的当务之急。这些单克隆抗体将会成为有用的标志,运用到实验大鼠模型中,以鉴定多形核白细胞、单核/巨噬细胞和淋巴细胞。本文将叙述     

对斐林试剂和双缩脲试剂应用的探究

人教社新版高中《生物》第1册教材中有“实验-生物组织中可溶性还原糖、蛋白质、脂肪的鉴定”的实验。可溶性还原糖用斐林试剂鉴定,蛋白质用双缩脲试剂鉴定。斐林试剂与双缩脲试剂都是由甲液（NaOH）和乙液（CuSO4）组成,参加鉴定反应时,却是以不同的反应物身分出现。但是,它们是否可以互换？在使用时是否可以颠倒加入的顺序等？为此笔者做了实验探究．现简述如下供大家探讨。     

利用RAPD分子标记对番茄杂交种纯度的鉴定研究

应用RAPD(RandomlyamplifiedpolymorphicDNA)分子标记对番茄京丹1号和毛粉802的F1代杂交种纯度进行鉴定的实验研究。该项研究使用了10个碱基的单随机引物和10个碱基的双随机引物进行扩增。在60个单引物扩增反应中获得7个京丹1号父本特有的核酸标记片段。但在14个双随机引物对京丹1号和毛粉802杂交组合的扩增反应中获得了7个京丹1号F1代杂交种特有的核酸标记片段和5个毛粉802父本特有的标记带。实验结果显示,双引物的扩增反应对鉴定双亲亲缘关系极近的杂交种纯度较单引物扩增反应更有效。其中,京丹1号的14个标记片段在北京蔬菜研究中心,种子纯度检测室又进行了重复扩增实验。实验结果为87%的RAPD标记可以在使用不同的PCR仪和不同来源的Taq酶的实验条件下得到。RAPD分子标记技术对鉴定双亲亲缘关系极近的杂交种纯度是真实可靠的。     

人源抗ICAM-1单链抗体的制备及其生物学活性鉴定

利用噬菌体展示技术筛选特异性人源抗ICAM-1单链抗体（Anti-human ICAM-1 scFv）并进行生物学活性鉴定。应用Tomlinson I+J噬菌体抗体库,以P1抗原肽为包被抗原,经过4轮“吸附-洗脱-扩增”进行亲和富集筛选。以PCR反应、ELISA抗原交叉反应和Dot blotting实验进行阳性克隆的鉴定。scFv经原核表达和分离纯化后,以Western blotting实验、竞争ELISA实验和细胞黏附抑制实验对其生物学活性进行初步鉴定。Tomlinson I+J噬菌体抗体库经4轮亲和富集筛选,利用ELISA方法成功筛出4株阳性克隆。通过PCR鉴定反应、ELISA抗原交叉反应和Dot blotting实验,最终获得了1株既能与P1抗原肽特异结合又能与人ICAM-1抗原特异结合的阳性克隆J-A1。对scFv进行原核表达和亲和层析后获得了高纯度的目的蛋白。竞争ELISA实验和细胞黏附抑制实验证实纯化的scFv具有良好的亲和活性和抗细胞黏附活性。文中成功利用噬菌体展示技术筛选到特异性人源抗ICAM-1 scFv,为进一步探索该抗体在炎症相关性疾病治疗中的应用奠定了基础。     

蓝细菌断裂DNA聚合酶DnaE的体内/外反式剪接分析

蓝细菌Anabaena PCC7120的DNA聚合酶DnaE由2个断裂基因dnaENI和dnaECI编码.通过纯化它们的部分基因在大肠杆菌中的表达产物DnaENI′和DnaECI′来免疫家兔获得抗体,用于对断裂的DnaE在体内和体外的反式剪接活性进行鉴定.在体外实验中,将2个断裂的DNA聚合酶DnaENI′和DnaECI′混合,进行反应,并利用它们的抗体对反应产物进行鉴定;在体内实验中,利用以上抗体对Anabaena PCC7120细胞总蛋白进行免疫杂交分析.实验结果表明,蓝细菌AnabaenaPCC7120中断裂的2个DnaE多肽在体内和体外均能进行反式剪接.体外实验中,纯化的DnaENI′和DnaECI′的混合反应产生新的蛋白产物,既有成熟的反式剪接产物DnaEN′-,又有剪切了内含肽后的副产物DnaEN′和DnaE,且DTT的存在对剪接反应具有促进作用;此外体内实验中,在Anabaena PCC7120细胞中既能检测到完整的DnaE,也能检测到未作用的DnaENI,但未能检测到DnaECI.     

南方鲇血型的初步鉴定

本研究旨在通过观察南方鲇血清与其红细胞的交叉反应以鉴定南方鲇的血型.实验结果表明:南方鲇的血清与同种其他个体的红细胞进行交叉反应时均未出现凝集现象,这表明南方鲇可能不存在血型或南方鲇具备血型但血清中相应的凝集素含量不足.以南方鲇的红细胞为抗原免疫日本种大耳白兔制备的抗血清与南方鲇的红细胞进行交叉反应,出现了不同程度的凝集反应,这表明南方鲇存在血型.据上述两个实验结果可以推断,南方鲇可能存在4种血型,分别命名为NA、NB、NAB和NO型;同时也证实,在鉴定南方鲇血型的研究中,通过制备抗血清与红细胞进行交叉反应的方法更为可靠.     

吗啡对猕猴瞳孔光反应能力的影响

光照能明显改变正常人和动物瞳孔的大小,而精神疾病及药物滥用则影响人和动物瞳孔对光的反应性.因此,瞳孔对光反应异常可以用作检测精神疾病和药物滥用的指标.有关药物滥用是如何影响瞳孔对光的反应性的研究还很少.为定量地测量成瘾性药物对瞳孔光反应变化的影响,该文采用猕猴为实验对象,通过在黑暗环境中测量猕猴在吗啡给予前和吗啡给予后的不同时间段,其瞳孔直径大小以及其对光反应能力的变化情况,来系统研究吗啡是如何影响这种非自主性反射系统的.研究发现,吗啡给予降低了猕猴在黑暗环境中的扩瞳反应,并且降低了瞳孔对光反应的收缩率.该文为将瞳孔对光反应特征用作鉴定吸毒者的检测手段提供了实验依据.     

免疫电镜对实验感染小鼠体内Q热立克次体的检出

近年来用免疫电镜技术发现和鉴定病毒的报道日益增多。免疫电镜技术的特点是,利用电镜高度的放大率和分辨能力,能直接看到抗原抗体之间的特异性反应和免疫复合物的形态学特征,故具有高度的敏感性和特异性。这对于发现和鉴定病毒与立克次体是十分有用的。为寻求Q热的快速和敏感的实验诊断方法,我们作了免疫电镜技术检出实验动物中Q热立克次体的初步研究,现将结果报告如下。     

对DNA与RNA区分染色实验的改进

核酸是主要的遗传物质 ,核酸的主要成分在细胞核中是 DNA,在细胞质与核仁中的是 RNA。由于 DNA与RNA在化学组成与分子结构上存在一定差别 ,因而对不同染料有不同的染色反应 ,可以根据这一原理来定性鉴定细胞中 DNA与 RNA的存在与分布。实验所采用染料为甲基绿 -焦宁 (Netyl- Green-Pyronin)染液 ,其中染液中的甲基绿能使细胞核中的DNA呈现绿色 ,而焦宁则能把细胞质与核仁中的 RNA染成红色。因此可以根据细胞中不同部位呈现颜色的不同来进行定性鉴定。1　材料与方法为了使实验方法快速简易而效果清晰准确 ,我们从染液的配方、材料…     

细菌、霉菌玻片标本的制作技巧

为了研究微生物的形态特征和鉴别不同类群的微生物,微生物的形态结构观察与鉴定实验是微生物学实验中十分重要的基本技术。而微生物的玻片标本的制作是做好微生物形态观察和分类鉴定等丁作的前提,标本的制作方法在微生物学实验指导书上均有介绍,但笔者在教学实践中发现有较多的学生在制作     

SIgA分泌片分离、纯化研究

为研究SIgA分泌片（Secretory component,SC)分离,纯化及鉴定方法,以SC存在游离和结合两种形式,本研究应用凝胶过滤和盐析法直接从初乳中分离纯化游离SC,并进行鉴定。分离纯化获得蛋白溶液12.4ml,蛋白含量0.85mg/ml,免疫双扩仅与抗SC多克隆抗体（PcAb)反应,分子量约75kD,免疫印迹实验与抗SC单克隆抗体（McAb)和PcAb特异反应,表明纯化蛋白为SC。该SC的分离纯化和鉴定处于不断完善之中,其方法的改进有利于获得更纯的SC,值得粘膜免疫研究者借鉴。     

糙皮侧耳担孢子交配型的鉴定

以3个糙皮侧耳菌株为材料,用核迁移试验和OWE-SOJ技术对担孢子的4种交配型进行了鉴定。核迁移试验表明,核迁移仅出现于A=B≠交配反应而不出现于A≠B=反应中。而在OWE-SOJ试验中,发生核迁移的A=B≠交配反应形成无锁状联合的绒毛状菌落,而不发生核迁移的A≠B=反应形成无锁状联合的栅栏型菌落,两种菌落可以清楚地区别开来。核迁移试验的结果与OWE-SOJ试验的结果是一致的,可以相互印证。因此,将两者用于糙皮侧耳交配型的准确鉴定是可行的。     

高中生物学实验中的显色原理

高中生物学新课程实验中涉及到相当多的物质检测与鉴定的显色方法。其原理多样,既有利用氧化还原反应原理,也有利用络合物的特性,还有利用有机染色剂染色的和酸碱指示剂变色特性的。作为学习者来说知其所以然有利于知识的构建。     

吊钟花属的植物化学分类

本实验分析鉴定了吊钟花属(Enkianthus)叶中的黄酮类化合物,包括提取、层析和显色反应等步骤。其结果证明:吊钟花属可以划分为三个组;并且其演化顺序可能是通过伞形花序组中的过渡类型种——毛脉吊钟花,演化到总状花序组,随后再经过花少、简化而成单花组的。     

酵母双杂交相关方法的改良及应用

对酵母双杂交实验过程中较为耗时的阳性克隆鉴定过程进行改进,以期建立一种快速有效的鉴定方法。分别采用液氮冻融法、超声破碎法、渗透压破壁法以及煮沸裂解法裂解酵母细胞,获得质粒作为PCR模板,直接测序鉴定筛选到的相互作用蛋白。以液氮冻融法和超声破碎法裂解细胞获得的质粒为模板进行PCR,得到特异的产物,测序鉴定结果明确,与经典的鉴定方法相比效果相当,但更加经济快捷;而渗透压破壁法和煮沸裂解法则效果不好。说明前两种方法可代替常规方法用于阳性克隆的鉴定,从而加快酵母双杂交实验中大量阳性克隆的筛查工作。     

影响ABO血型鉴定的因素及处理方法

通过实验鉴定自己血型,既能引起学生的浓厚兴趣,又能加深学生对血型和凝集反应的理解。目前不仅高等院校甚至一些中学亦自行增开了此实验。血型鉴定在技术及实验条件上并不复杂,但影响血型鉴定的客观和主观因素较多。稍不注意即可引起定型错误,在学生心理易产生似是而...     

分子生物学技术在双歧杆菌研究应用中的进展

双歧杆菌对人体健康作用越来越受到人们的关注,国内外含有双歧杆菌的药品和保健食品也越来越多,建立简便、快速、准确的检测鉴定方法和研制出新的基因工程菌已成为当前的重要课题。菌种的选择需要微生物在肠道定植、无致病性和无副作用。在以往的实验中,通过细菌培养、生化反应特征是重要的鉴定方法,如细菌壁成分分析和发酵产物的鉴定,以及遗传特征如DNA的碱基比例和DNA的同源性分析来完成。     

关于“还原糖鉴定实验”的探究

针对还原糖鉴定实验存在的一些观点,从有颜色的实验材料是否会干扰实验结果,还原糖含量与反应颜色变化的关系,还原糖含量不同的情况下水浴加热与酒精灯直接加热的区别,不同p H的还原糖溶液是否影响实验结果等方面进行探究,为生物学教学提供参考。     

含油脂废水中一株栗褐芽胞杆菌的筛选和鉴定

目的从含油脂废水中筛选鉴定出油脂降解菌。方法从含油脂废水中取样,通过分离、培养,筛选出以油脂为唯一碳源和能源并能分解油脂的菌株,对其基因组16S DNA测序,在核酸数据库中进行BLAST比对,并进行生化反应,进行菌种的鉴定。结果从含油脂废水中筛选出8株微生物,最终筛选出1株油脂降解菌,鉴定为栗褐芽胞杆菌。结论从含油脂废水中筛选出1株栗褐芽胞杆菌,为下一步实验证实其分解油脂的作用和机制奠定了基础。