白鲢MHCIα2基因克隆及序列分析

根据人和动物的ＭＨＣＩα２基因中两个半胱氨酸侧翼的保守序列设计了混合型引物,采用ＰＣＲ法从白鲢基因组ＤＮＡ中克隆了ＭＨＣＩα２。经氨基酸序列和同源性分析,Ｈｙｍｏ－ＢＸ１与人和动物的ＭＨＣ１α２存在２６．７－５０．６％同源性,并存在抗原多肽结合位点（Ｔ－１４３、Ｋ－１４６、Ｗ－１４７、Ｙ－１５９）以及α２微球蛋白结合位点（Ｑ－１１５、Ｄ－１１９、Ｇ－１２０、Ｄ－１２２）。由此认为,Ｈｙｍｏ－ＢＸ１     

葡萄扇叶病毒外壳蛋白基因的克隆,序列分析及其在大肠杆菌中…

通过ＲＴ－ＰＣＲ方法把葡萄扇叶病毒（ＧＦＬＶ）外壳蛋白基因（ＣＰ ｇｅｎｅ）分成两部分扩增,扩增产物克隆入ｐｇＥＭ－５Ｚｆ（＋）载体,并通过ＢｇｌⅡ位点连接成一完整的外壳蛋白基因,通过序列分析测得全长外壳蛋白基因为１５１２ｂｐ,编码５０４个ＡＡ＇ｓ与国外株系ＧＦＬＶ－Ｆ１３相比,核苷酸同源性为８８．４％,氨基酸同源性为９５．８％。并且这一外壳蛋白基因在大肠杆菌Ｅ． ｃｏｌｉＤＨ－５α中得到了表达。     

人乙型肝炎病毒前表面抗原preS基因的克隆与序列分析

从杭州、兰州两地各一例乙型肝炎病毒（HBV）表面抗原阳性血清中提取病毒DNA,采取PCR技术扩增出前表面抗原（preS)基因片段,重组到质粒载体上,对该基因进行了全序列测定[GenBank索取号CpreS-HZ:AF 325674;preS-LZ:325675].克隆的HBVpreS基因杭州分离物（preS－HZ）和兰州分离物（preS－LZ）全长522个核苷酸,编码174个氨基酸。preS－HZ与已发表的HBV adr亚型上海分离物、北京分离物、日本分离物、HBVadw亚型和ayw亚型preS基因的核苷酸序列同源性分别为96．7％、96．2％、97．3％、88．7％和84．1％,氨基酸序列同源性分别为96．0％、94．9％、97．1％、85．1％和85．4％;preS－LZ与相应序列的核苷酸序列同源性分别为96．4％、96．2％、96．9％、88．7％、83．7％,氨基酸序列同源性分别为94．9％、94．9％、96．0％、85．1％、84．1％,分子进化分析（ADNASTAR,1999）表明,相对于以上报道的序列二者含有四个特异的氨基酸突变位点,在免疫保护区内二者具有较好的保守性,可用于表达乙肝重组亚单位疫苗。     

三个品种家鸡催乳素基因cDNA的克隆及序列分析

从粤黄鸡、毛丝乌骨鸡及伊莎蛋鸡的垂体中快速抽提总RNA,根据国外已发表的肉用仔鸡乳素基因cDNA的序列,设计并合成了能与特定载体末端互补的1对引物,经反转录－聚合酶链式反应（RT－PCR）方法扩增获得了特异性片段。将扩增片段与线性化质粒pBSSK连接,克隆后进行序列分析,与已报道的肉用仔鸡、矮脚鸡和火鸡催乳素基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行了比较。结果表明,不同品种间核苷酸同源性介于93．97％－99．87％之间,其中丝毛乌骨鸡与矮脚鸡间的同源性最高为99．87％。推导的相应氨基酸序列的同源性在98．25％－100％之间,也是丝毛乌骨鸡与矮脚鸡间的同源性最高,为100％。在粤黄鸡、丝毛乌骨鸡和伊莎蛋鸡中,发现前两者的催乳素前体的cDNA片段推导的 氨基酸序列中信号肽裂触位点跟肉用仔鸡,矮脚鸡及火鸡的一样,为Leu-Pro-IIe-Cys,而伊莎蛋鸡的信号肽裂解位点则不一样,为Pro-Pro-IIe-Cys。此位点的差异可能导致催乳素前体翻译加工的不同,使伊莎蛋鸡无就巢性。这3个家鸡品种与国外的肉用仔鸡、矮脚鸡催乳素氨基酸序列还在以下位置出现差异：71、141、150、175。在肉用仔鸡、丝毛乌骨鸡催乳素氨基酸序列中还发现了一个肝素结合位点175－181（L－R－R－D－S－H－K）。     

仙居鸡抑制素α亚基成熟区的cDNA克隆及其在卵泡中表达的研究

根据发表的鸡抑制素α亚基序列设计引物,用RT－PCR技术从仙居鸡卵泡的颗粒细胞总RNA中扩增出了抑制素α亚基成熟区序列,并进行了克隆和测序,结果显示,仙居鸡成熟α亚基是由113个氨基酸(aa)残基组成的蛋白质,具有1个糖基化位点和7个半胱氨酸残基,与发表的鸡和哺乳类相应序列对比,其核苷酸序列的同源性分别为98％和61．4％－68．7％,其预测氨基酸序列的同源性分别为97．3％和64．6％－69％,且所测鸡α亚基成熟区的糖基化位点及半胱氨酸殖基的数目和位置与发表的鸡和乳类相似,说明该亚基的序列及结构在不同物咱间具有高度保守性,提示其可能具重要的生理功能,鸡各级卵泡中α亚基mRNA表达丰度的定量分析显示,从SYF到F1中,随着卵泡的成熟α亚基的表达量降低,其在SYF和F6－8中表达量最高,在LWF中表达量很低,说明α亚基在卵泡的吸收,选择及优势化过程中起重要调节作用。     

TNFa-308基因启动子多态性与新疆维吾尔族人乙型肝炎易感性的相关性研究

目的：研究TNF-α基因单核苷酸多态性（SNP）308G—A位点与新疆地区维吾尔族人乙型肝炎之间的关系。方法：以聚合酶链式反应－限制性内切酶长度多态性（PCR-RFLP）技术,对120例乙肝患者和120例正常对照者TNF—α基因SNP308多态性位点进行基因分型。结果：SNP308多态性位点G／G基因型和G／A基因型频率在病例组为77％和23％,正常对照组为88％和12％,2组基因型和等位基因频率分布差异有显著性（p〈0．05）。结论：TNF—α基因启动子308多态性位点与新疆维吾尔族人乙肝有明显相关性。     

猪CACNA1S基因部分序列的克隆、测序及SNP检测

CACNA1S是钙离子通道主效亚基α1亚单位的编码基因,该基因突变会导致人（Homo sapiens）低钾性周期性麻痹和恶性高温综合征．目前CACNAIS基因的研究主要集中在人和模式动物上,而在家畜中的研究少见报道．本研究以金华猪（115头）、皮特兰猪（30头）、金华猪与皮特兰猪杂交产生的金皮F2代杂种猪（126头）、大约克猪（23头）为研究对象,根据人CACNA1S基因序列设计引物,对猪基因组DNA进行PCR扩增、克隆测序,并与人相应序列作同源性比较,然后采用PCR-SSCP技术检测序列中可能存在的单核苷酸多态（single nucleotide polymorphism,SNP）位点,并对有合适内切酶存在的突变点应用PCR-RFLP技术进行验证．结果表明：（i）用6对引物对猪基因组DNA进行扩增,共克隆得到猪CACNAIS基因约5211bp的DNA序列,其中外显子区域,猪与人同源性为82．6％,序列已递交GeneBank收录（登录号DQ767693）;（ii）在克隆得到的DNA序列中,共检测到57个单核苷酸突变点,其中外显子区域存在24个;（iii）突变位点的PCR-RFLP验证与PCR-SSCP检测结果一致,经与GenBank公布的猪CACNAIS基因EST小片段（Bx914582,Bx666997）比较,相应长度核酸序列内本实验检测到的11个SNP位点中,有8个位点的碱基突变与2个EST片段间存在的碱基差异相同．     

猪圆环病毒2型分离毒株全基因组的克隆及序列分析

根据GenBank中猪圆环病毒2型（PCV－2）基因序列,设计两对特异性引物,用PCR方法从接种疑似PMWS仔猪病料的细胞中分段扩增2个分离毒株全基因组。将扩增片段克隆入pGEM-T easy载体,筛选获得含有相应片段的阳性重组质粒。对质粒中的插入片段进行测序拼接,获得2株均为1768bp的全基因组序列。应用DNA star序列分析软件,对所测PCV－2序列与GenBank中的国内外PCV毒株进行同源性比较,并绘制系统发生树,结果发现：所测两毒株之间的核苷酸序列同源性极高,可达99．8％,亲缘关系密切;与PCV－2参考毒株的同源性介于95．3％－99．7％之间,其中与美国的一株PCV－2同源性最高,分别为99．5％和99．7％,亲缘关系很近;与国内两分离株同源性分别为96．4％和98．8％－98．9％;与PCV－1参考毒株同源性仅为77．1％－77．5％。     

人类基因组中可变和组成性剪接位点的预测

根据剪接位点的核酸序列保守特征,以及邻近位点的碱基组成和关联特性,结合一对可变剪接位点之间的距离参数和受体端剪接位点前30位碱基的GC和TC含量,利用结合多样性指标的二次判别方法（IDQD）,预测了人类基因组中可变和组成性内含子的供体端和受体端的剪接位点,对可变的供体端和受体端剪接位点,阈值ξ选择－2时,总的预测精度分别为87．9％和89．9％,对组成性的供体端和受体端剪接位点,阈值ξ选择－1,总的预测精度分别为92．8％和94.3％．     

斑点热群立克次体中国分离株rOmpA基因片段的克隆和序列分析

用Rr190.70p-602n引物扩增了斑点热群立克次体（spottedfevergrouprickettsiae,SFGR）中国分离株（BJ－90株、Ha－91株和HLJ－054株）及SFGR国际标准株西伯利亚立克次体（Rickettsiasibiricu）246株和派克立克次体（R.parkeri）的rOmpA基因片段,将PCR产物克隆入pGEM－T载体中,用双脱氧法进行序列测定,并与SFGR的rOmpA基因已知序列进行了比较。结果表明,SFGR国际标准株间rOmpA基因片段的核苷酸同源性为90.06%～96.62%,推定氨基酸的同源性为83.05％～94.35％,中国分离株与国际标准株及参考株rOmpA基因片段比较的结果发现：BJ－90株及Ha－91株与西伯利亚立克次体标准株的核苷酸同源性分别为99．06％和98．31％,推定氨基酸的同源性则为98.87％和96.61％,HL－93株和HLJ-054株与日本立克次体（R.japonica）核苷酸同源性较高,分别为96.62％和95.68％,推定氨基酸的同源性为92．09％和89．27％。在中国分离株内,BJ-90株和Ha－91株的核昔酸同源性高达99．2…     

四个烙铁头蛇毒凝集素样蛋白基因的克隆与序列分析

从烙铁头蛇（Trimeresurus mucrosquamatus)的毒腺中提取mRNA,利用RT－PCR进行体外扩增,获得凝集素样蛋白基因,克隆至PMD18－T载体中,筛选出4种凝集素样蛋白基因（命名为TML-1、MTL－2、TML－3和TML－4）。由基因序列推导出的氨基酸序列表明：TML－1,2,3,4序列中均有CRD结构。序列同源性比较和Cys位点分析推测：TML－1和TML－2可能分别是类似于flavocetin-A的蛇毒凝集素样蛋白的α亚基和β亚基;TML－3可能类似于GPIb-bp的蛇毒凝集素样蛋白的α亚基,TML－4则可能是类似于Ⅸ/Ⅹ-bp的蛇毒凝集素样蛋白的β亚基。     

乐东拟单性木兰花部挥发油的化学成分及其抑菌活性

采用GS－MS技术分析了乐东拟单性木兰花部挥发油的化学组成,共鉴定了57种成分的化学结构与相对含量,占总含量地85．59％。其中,β－ 蒎烯（12．85％）、D－柠檬烯（7．78％）、石竹烯（4．89％）、十氢－4a－甲基－1－亚甲基－7－（1－甲基乙烯基）－萘（4．70％）为主要成分。此外,醇类中α-杜松醇（3．61％）、1氢－[1,3]环戊并[1,2]环戊并[1,2]环丙并－苯（3．52％）、倍半萜含氧衍生物石竹烯氧化物（3．33％）和α－蒎烯（3．22％）也占有较大比例。体外对4种供试病原菌的抑菌实验表明,该挥发油对大肠杆菌和伤寒杆菌有一定的抑制或杀灭能力。     

短裙竹荪多糖Dd-S3P的分离纯化及其性质研究

短裙竹荪子实体经2％Na2CO3溶液提取,用蛋白酶法和Sevag法相结合除去蛋白,乙醇分级沉淀,级分3经DEAE－SephadexA－25柱层析纯化得到短裙竹蒸蒸荪多糖DdS3P．经测定该多糖为均一组分,分子量约为3．8×105,红外光谱呈现出典型的多糖吸收峰,含有α-型糖苷连接键,紫外扫描无核酸和蛋白质的特征吸收峰．纸层析和气相层析分析得知Dd－S3P含有D-葡萄糖（D－Glc）、D-甘露糖（D－Man）和D-木糖（D－Xyl）,其摩尔比为1．83：1．00：1．21．经动物试验表明此多糖对小鼠S-180有一定的抑制作用,抑瘤率约31．3％．     

HNF1α对人FXR 启动子的调控作用

为探讨肝细胞核因子1α（HNF1α）对人胆汁酸受体（FXR）转录激活的作用及机制,将含HNF1α的真核表达载体（pcDNA3.1(+)HNF1α）和含有FXR启动子的荧光素酶报告基因载体共转染人肝癌细胞系HepG2,检测转染细胞中荧光素酶活性并用半定量RT-PCR、免疫印迹法检测FXR的表达.QuikChange法对FXR启动子HNF1α可能结合位点进行突变,将包含突变点的重组荧光素酶报告质粒单独或与pcDNA3.1(+)共同转染HepG2细胞,检测各组荧光素酶活性.根据凝胶电泳迁移率变化,分析HNF1α与FXR启动子区域的结合.结果发现,转染pcDNA 3.1(+)HNF1α可以上调FXR在HepG2细胞中的表达,并增强FXR启动子活性且具有剂量依赖性;－65～－48区域的点突变,导致FXR启动子活性明显降低,共转染pcDNA3.1(+)HNF1α也不具有增强作用.结果提示,转录因子HNF1α能调控FXR基因表达,其机制为：HNF1α与FXR启动子区域－65～－48区域的反向半位点结合,发挥其反式激活作用.     

东北虎促卵泡激素和促黄体激素基因的克隆及其序列分析

本研究首次从东北虎（Panthea tigris altaica)脑垂体提取总RNA,利用RT－PCR技术扩增出东北虎垂体促性腺激素α亚基,促卵泡激素（FSH）β亚基和促黄体激素（LH）β亚基的编码区序列,并进行克隆,测序和比较分析。结果表明,其α亚基,FSHβ亚基,LHβ亚基基因的开放阅读框分别为363bp,390bp和420bp,分别编码120,129和142氨基酸的前体蛋白。与已发表的人,牛,绵羊,猪,大鼠,小鼠等物种相应序列比较,无论在核苷酸水平,还是在氨基酸水平都显示出较高的同源性（64．7％－96．6％）,其中与猪的同源性最高（86％－96．6％）。东北虎的基因序列还具有其明显的特异性,首次发现LHβ亚基cDNA编码的前体蛋白在信号肽部分比其它物种相应序列多一个亮氨酸残基（Leu)。     

人γ心钠素在大肠杆菌中的高效表达

利用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术扩增人γ心钠素（γ－ｈＡＮＰ）ｃＤＮＡ编码序列,在其５′和３′端分别引入ＥｃｏＲⅠ和ＢａｍＨⅠ限制性内切酶位点,定向克隆到表达质粒载体ｐＭＳ－３１ｂ,在大肠杆菌ｐｏｐ２１３６中高效表达出人γ心钠素融合蛋白,表达产物占菌体总蛋白的３０～４０％。双向免疫扩散法测定证明表达产物与人α心钠素（α－ｈＡＮＰ）抗血清呈阳性反应,纯化的表达产物经复性处理后能引起大鼠胸主动脉条舒张．     

西南银莲花皂苷的抗肿瘤作用

目的：对西南银莲花中抑制人癌细胞生长的主要活性成分3－O－鼠李糖基（2）[葡萄糖基（4）]阿拉伯糖基－齐墩果酸（皂苷2）等进行动物体内抗癌活性试验研究。方法：用小鼠肉瘤S180实体模型观测腹腔注射和灌服两种给药途径的抑瘤率,结果:ip皂苷2为10mg/kg时抑瘤率为48．9％,po皂苷2为125,200和500mg/kg时抑瘤率分别为32．6％,39．3％和48．1％,但均不同程度地出现动物死亡,结论：不论腹腔注射[还是灌服给药,皂苷2对小鼠肉瘤S180生长均具有一定的抑制作用,但在有效剂量下已表现出一定的毒性。     

中国河南株丁型肝炎病毒全基因组的cDNA克隆和序列分析

从我国河南－抗丁型肝炎病毒抗原（ａｎｔｉ－ＨＤＡｇ）及丁型肝炎病毒（ＨＤｖ）ＲＮＡ双阳性的ＨＢｓＡｇ携带者血清中提取ＲＮＡ,采用人工合成的引物进行逆转录和聚合酶链反应（ＰＣＲ）,获得了贯穿ＨＤＶ全基因组的６个相互重叠的ｃＤＮＡ片段。经双脱氧末端终止法进行核苷酸序列分析,得到了长度为１６７４ｂｐ的我国人河南株ＨＤＶｃＤＮＡ全序列。计算机分析表明,该株与我国台湾株（ＨＤＶＩＡ型）、美国－１株（ＨＤＶＩＢ型）、日本－１株（ＨＤＶⅡ型）和秘鲁－１株（ＨＤＶⅢ型）的核苷酸同源性分别为的９４．３％、８６．８％、７５．４％和６６．３％,氨基酸序列的同源性分别为８９．７％、８５．１％、７１．９％和６４．６％,并在核苷酸和推导的ＨＤＡｇ氨基酸序列中分别发现了５个和２个集中保守的区域。这些区域均与ＨＤＶ的某些重要功能密切相关。     

香蕉束顶病毒基因克隆和序列分析

对香蕉束顶病毒（ＢＢＴＶ）中国分离株ＤＮＡ组份Ｉ（ＤＮＡ－１）、外壳蛋白（ＣＰ）和运转蛋白（ＭＰ）基因进行了克隆和序列分析。ＢＢＴＶＤＮＡ－１含有１１０３个核苷酸,与南太平洋和亚洲分离株分别有８７％－８８％ ９６．９－９８％的核苷酸序列同源性。由ＤＮＡ－１编码的复制酶含有１８６个在酸残基。与南太平洋和亚洲分离株分别有８４．４％－９５．８％和９７．６％、９８．０％的氨基酸序列同源性。外壳蛋白基因由５     

新疆维吾尔族人2型糖尿病患者AMPKα2基因多态性的分析研究

目的：研究腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase,AMPK）单核苷酸多态性（SNPs）rs2143754位点与新疆地区维吾尔族人2型糖尿病之间的关系。方法：以聚合酶链式反应-限制性内切酶长度多态性（polymerase chain reaction-restriction flagmerit length polymorphism,PCR-RFLP）技术,对150例2型糖尿病和150例正常对照者AMPK-rs2143754位点进行基因分型。结果：AMPKet2位点T／T、G／T和G／G基因型频率在病例组为（40％,51％和9％）,正常对照组为（28％,49％和29％）,两组基因型和等位基因频率分布差异有显著性（P〈0．05）。结论：AMPKα2多态性与新疆维吾尔族人2型糖尿病有明显相关性。