沉默BCAT1对肺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的:研究BCAT1在肺癌细胞A549的增殖、迁移及侵袭能力中的作用。方法:通过小干扰RNA(si RNA)沉默A549细胞中BCAT1的表达,细胞分为对照组(Con)、BCAT1基因沉默组(si RNA-BCAT1)和si RNA阴性对照组(si RNA-NC)。利用Western blot检测si RNA对BCAT1的沉默效果;划痕愈合实验检测沉默BCAT1后A549细胞迁移能力的改变;Transwell小室侵袭实验检测沉默BCAT1后A549细胞侵袭能力的变化;MTT实验检测沉默BCAT1对A549细胞增殖能力的影响。结果:与Con组相比,si RNA-BCAT1组的BCAT1蛋白表达明显降低(P0.05),细胞划痕愈合率明显降低(P0.05),能够穿膜的细胞数明显减少(P0.05),而Con组和si RNA-BCAT1组细胞的增殖能力比较差异无明显统计学意义(P0.05)。结论:沉默BCAT1抑制A549细胞的迁移和侵袭能力,而对其增殖能力无影响。     

丹参酮ⅡA联合CASC2对甲状腺癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响固有淋巴细胞在脂质代谢中的研究进展

为了研究丹参酮ⅡA联合长链非编码RNA(lnc RNA)癌易感性候选基因2(CASC2)对甲状腺癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响,该研究采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测CASC2在甲状腺癌组织中的表达。将甲状腺癌SW579细胞分为pc DNA3.1组(转染pc DNA3.1质粒), pc DNA3.1-CASC2组(转染pc DNA3.1-CASC2质粒), con组(用与丹参酮ⅡA等量的二甲基亚砜处理),药物-1、2、3、4组(分别用1、2、4、8μg/m L丹参酮ⅡA处理),药物-4+pc DNA3.1组(转染pc DNA3.1质粒且用8μg/m L丹参酮ⅡA处理),药物-4+pc DNA3.1-CASC2组(转染pc DNA3.1-CASC2质粒且用8μg/m L丹参酮ⅡA处理)。分别用细胞计数试剂盒(CCK-8)和平板克隆检测细胞存活与克隆形成;流式细胞术检测细胞凋亡; Transwell检测细胞迁移、侵袭;蛋白质印迹法(Western blot)检测蛋白P21、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达。结果显示,与癌旁组织相比,甲状腺癌组织中的CASC2表达量显著降低(P0.05)。过表达CASC2明显降低SW579细胞的存活率、克隆形成数、迁移细胞数、侵袭细胞数和MMP-2蛋白表达量,显著提高细胞凋亡率、P21、Caspase-3、E-cadherin蛋白表达量(P0.05)。丹参酮ⅡA明显降低SW579细胞的存活率、克隆形成数、迁移细胞数、侵袭细胞数、MMP-2蛋白水平,显著提高细胞凋亡率、P21、Caspase-3、E-cadherin蛋白表达水平,且均呈浓度依赖性(P0.05)。丹参酮ⅡA联合CASC2明显降低SW579细胞的存活率、克隆形成数、迁移细胞数、侵袭细胞数、MMP-2蛋白表达量,显著提高细胞凋亡率、P21、Caspase-3和E-cadherin蛋白水平(P0.05)。因此,丹参酮ⅡA联合CASC2可以抑制甲状腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,以及诱导细胞凋亡。     

红色诺卡氏菌细胞壁骨架对肺癌细胞的抗癌作用及机制

前人研究发现红色诺卡氏菌细胞壁骨架(N-CWS)具有较好的抗癌活性,然而其对肺癌的抗癌作用机制尚不清楚。本研究旨在揭示N-CWS对肺癌细胞的抗癌作用及机制。通过平板克隆形成实验测定N-CWS对人肺腺癌细胞系A549菌落形成的影响,发现N-CWS可按照浓度依赖性方式降低A549细胞的菌落形成能力(p0.05)。通过5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)法测定N-CWS对肺癌细胞增殖能力的影响,发现N-CWS可按照浓度依赖性方式降低EdU阳性细胞比例(p0.05)。通过Transwell小室和伤口愈合实验评估N-CWS对肺癌细胞侵袭和迁移能力的影响,发现N-CWS以A549浓度依赖性方式降低细胞的侵袭和迁移数量及伤口愈合百分比(p0.05)。通过qRT-PCR和Western blotting检测N-CWS对A549细胞E-cadherin、IL-6和MMP-9表达的影响,发现N-CWS以浓度依赖性方式上调了A549细胞的E-cadherin mRNA和蛋白表达(p0.05),但以浓度依赖性方式下调了IL-6和MMP-9的m RNA和蛋白表达(p0.05)。本研究证实红色诺卡氏菌细胞壁骨架可按照浓度依赖性方式降低肺癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力,其抗癌机制与上调E-cadherin和下调IL-6和MMP-9有关。     

Mirtron类microRNA6894-5p过表达促进胃癌细胞的迁移、侵袭和增殖

该文主要探讨Mirtron类micro RNA6894-5p过表达对胃癌细胞迁移、侵袭和增殖的影响。将miRNA6894-5p的模拟物分别转染进入胃癌MGC803和SGC7901细胞中,构建miRNA6894-5p过表达的细胞系;实时荧光定量PCR测miRNA6894-5p的RNA表达;Transwell实验检测细胞迁移侵袭能力;Cell Counting Kit 8实验检测细胞的增殖能力;荧光素酶报告基因实验检测miRNA6894-5p与肝配蛋白A3的靶向关系;实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法进一步检测miRNA6894-5p过表达后EFNA3的m RNA和蛋白的变化。结果显示,成功构建miRNA6894-5p过表达模型的胃癌细胞系;与相应阴性对照组相比,过表达miRNA6894-5p可提高细胞迁移侵袭能力(P0.05)和增强细胞增殖能力(P0.05);荧光素酶报告基因实验证实,miRNA6894-5p靶向作用于肝配蛋白A3,过表达miRNA6894-5p后肝配蛋白A3的m RNA及蛋白水平显著下降(P0.05)。该研究结果显示,Mirtron类miRNA6894-5p在人胃癌细胞中过表达可促进胃癌细胞的迁移、侵袭和增殖。     

Nupr1调控非小细胞肺癌细胞迁移、凋亡机制的研究

目的:探讨核蛋白1(Nupr1)调控非小细胞肺癌细胞迁移、凋亡机制的研究。方法:肿瘤抑制剂盐酸素(salinomycin)不同时间处理非小细胞肺癌细胞A549后采用Western Blot法检测非小细胞肺癌细胞A549中Cleaved Caspase-3、Nupr1的蛋白表达;Transwell小室检测Nupr1基因沉默后非小细胞肺癌细胞A549细胞体外迁移、侵袭能力的变化;Western Blot法检测Nupr1沉默后非小细胞肺癌细胞A549 MMP-2、TIMP-1的蛋白表达;流式细胞仪检测Nupr1沉默后非小细胞肺癌细胞A549的凋亡情况。结果:与未经肿瘤抑制剂salinomycin处理对照组相比较,salinomycin处理后的非小细胞肺癌细胞A549中Nupr1蛋白表达量下降,Cleaved Caspase-3蛋白表达量升高,并且随着作用时间呈依赖关系。Nupr1-siRNA转染组的迁移能力相比对照组未转染组下降(64.4±7.2)%,Nupr1-siRNA转染组的侵袭能力相比对照组下降(58.7±7.3)%。与未转染Nupr1-siRNA对照组相比较,转染后TIMP-1的表达明显上调,而MMP-2的表达则明显下调。流式细胞仪检测结果显示Nupr1沉默后非小细胞肺癌细胞A549出现大量凋亡。结论:Nupr1基因沉默后通过上调TIMP-1的表达,下调MMP-2的表达降低肺癌A549细胞的侵袭和迁移能力,进而促进非小细胞肺癌细胞凋亡。     

生物钟基因PER2在人口腔鳞癌细胞中具有重要的抑癌作用

探讨生物钟基因PER2对人口腔鳞癌SCC9细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响和机理。利用RNA干扰技术沉默SCC9细胞中PER2基因,应用实时荧光定量PCR检测Ki-67、MDM2、P53、Bcl-2、Bax、C-myc、MMP-2、Timp-2和VEGFm RNA的表达改变;流式细胞仪检测沉默后细胞的增殖和凋亡水平,平板克隆形成实验检测细胞的克隆形成率,Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力的改变。沉默PER2基因后,SCC9细胞凋亡指数显著降低(p0.05),细胞增殖指数、细胞迁移和侵袭能力显著升高(均p0.05)。PER2沉默后Ki-67、MDM2、Bcl-2、C-myc、MMP-2和VEGF m RNA的表达水平显著升高(均p0.05),p53、Bax和Timp-2 m RNA的表达水平显著降低(均p0.05)。研究表明,生物钟基因PER2通过调控Ki-67、MDM2、P53、Bcl-2、Bax、C-myc、MMP-2、Timp-2和VEGF影响癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭。因此,对PER2的深入研究有可能为癌症的治疗提供新的有效分子靶点。     

沙棘总黄酮抑制肺癌A549增殖和迁移作用及机理

为探究三种沙棘总黄酮(TFH)对非小细胞肺癌A549细胞增殖及迁移的影响,并探讨其分子作用机制,选择不同浓度的西藏沙棘(Hippophae tibetana Schlecht)、中国沙棘(H.rhamnoides L.subsp.sinensis Rousi)、肋果沙棘(H.neurocarpa)总黄酮作用于A549细胞。通过MTT检测细胞相对活力,平板克隆形成实验及软琼脂克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡比例。选择效果最佳的西藏沙棘总黄酮应用细胞划痕实验及Transwell实验分析该化合物对肺癌细胞迁移侵袭能力的影响。Western blot检测MMP9、E-cadherin等侵袭迁移相关蛋白表达。敲低E-cadherin基因检测沙棘总黄酮对细胞迁移能力的影响。结果显示,三种沙棘总黄酮均对A549细胞系具有增殖抑制作用,抑制作用依次为:西藏沙棘中国沙棘肋果沙棘。西藏沙棘总黄酮可显著性抑制非小细胞肺癌A549细胞侵袭迁移能力(P0.05)。实验组中MMP9、MMP2、TGF-β、N-cadherin表达水平显著降低,E-cadherin表达水平上调。我们发现在A549细胞中敲低E-cadherin,西藏沙棘总黄酮可逆转迁移增加。以上研究表明西藏沙棘总黄酮对肺癌A549增殖抑制作用具有明显的优势,且西藏沙棘总黄酮可明显抑制肺癌A549细胞的侵袭迁移能力,并可能与下调细胞中的TGF-β抑制MMP9表达并阻止肺癌EMT有关。     

枸杞多糖抑制SMMC-7721肝癌细胞的VEGF表达、迁移与侵袭

目的研究枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharide,LBP)对SMMC-7721肝癌细胞迁移、侵袭影响的机制。方法运用MTT法检肝癌细胞SMMC-7721的增殖率,Transwell检测细胞的迁移力和侵袭力,应用血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)小分子干扰RNA沉默VEGF表达,转染pcDNA 3.1-VEGF过表达VEGF,Western blot和qRT-PCR检测VEGF、MMP-2和MMP-9表达。结果 LBP(100、200、400μg/ml)处理可抑制SMMC-7721细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制MMP-2、MMP-9和VEGF表达;沉默VEGF可降低SMMC-7721细胞迁移、侵袭相关蛋白MMP-2和MMP-9水平,过表达VEGF可逆转LBP对SMMC-7721细胞迁移和侵袭相关蛋白MMP-2和MMP-9水平的抑制作用。结论枸杞多糖可抑制肝癌细胞的迁移和侵袭,其机制可能与直接抑制VEGF有关。     

miR-670-5p对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的: 探讨miR-670-5p对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,分析其调控WW结构域氧化还原酶基因(WWOX)的机制。方法: 收集2016年1月至2017年10月收治的28例肺癌组织和对应癌旁组织,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测肺癌组织、癌旁组织中miR-670-5p的表达水平。将肺癌细胞A549分为anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-670-5p组(转染anti-miR-670-5p)、anti-miR-670-5p+si-NC组(转染anti-miR-670-5p与si-NC)、anti-miR-670-5p+si-WWOX组(转染anti-miR-670-5p与si-WWOX)。转染48 h后,RT-qPCR或蛋白质印记(Western blot)检测转染效果。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot检测P21、上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白的表达水平。双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-670-5p和WWOX的靶向关系。结果: 肺癌组织中miR-670-5p的表达水平较癌旁组织显著升高(P＜0.05)。抑制miR-670-5p可抑制MMP-2蛋白表达(P＜0.05),促进P21和E-cadherin表达(P＜0.05),抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭(P＜0.05)。WWOX是miR-670-5p的靶基因,miR-670-5p负调控WWOX表达。抑制WWOX可部分逆转anti-miR-670-5p对A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响(P＜0.05)。结论: miR-670-5p通过靶向WWOX能够促进肺癌细胞增殖、迁移、侵袭。     

circ＿0015756通过调控miR-515-5p/HMGB3轴影响肺癌细胞增殖、凋亡和迁移

为探讨环状RNA 0015756(circ_0015756)对肺癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响和潜在机制,该研究采用实时定量PCR(RT-qPCR)分析肺癌组织和癌旁组织中circ_0015756和微小RNA(miR)-515-5p的表达水平。同时,将circ_0015756小干扰RNA(si-circ_0015756)、miR-515-5p模拟物、si-circ_0015756+miR-515-5p抑制物分别转染肺癌细胞A549,采用四甲基偶氮唑蓝实验、平板克隆实验检测A549细胞的增殖能力,采用流式细胞术分析A549细胞的凋亡率,采用划痕愈合实验和Transwell实验检测A549细胞的迁移能力。蛋白质印迹法测定高迁移率族蛋白3(HMGB3)的表达水平。双荧光素酶分析circ_0015756与miR-515-5p、miR-515-5p与HMGB3的靶向关系。结果显示,肺癌组织中circ_0015756的相对水平显著高于癌旁组织(P0.05),miR-515-5p的相对水平显著低于癌旁组织(P0.05)。干扰circ_0015756表达后A549细胞增殖抑制率、凋亡率、miR-515-5p的相对水平显著升高(P0.05),集落形成数、迁移距离、迁移细胞数、HMGB3蛋白的相对水平显著降低(P0.05)。过表达miR-515-5p后A549细胞增殖抑制率、凋亡率显著升高(P0.05),集落形成数、迁移距离、迁移细胞数、HMGB3蛋白的相对水平显著降低(P0.05)。抑制miR-515-5p表达明显减弱干扰circ_0015756表达对A549细胞增殖、集落形成、迁移以及HMGB3蛋白表达的影响(P0.05)。circ_0015756与miR-515-5p直接结合,miR-515-5p与HMGB3直接结合。总之,干扰circ_0015756通过靶向上调miR-515-5p/HMGB3轴抑制肺癌细胞增殖和迁移,诱导细胞凋亡。     

Kin17在非小细胞肺癌侵袭转移中的作用及其机制研究

目的:探究核蛋白17(Kin17)在非小细胞肺癌侵袭转移中的作用及其机制研究。方法:采用核糖核苷酸测序(RNA-seq)技术比较A549-KD组细胞与A549-NC组细胞中的信使RNA(mRNA)表达谱,从中筛选出表达差异较大的基因。采用蛋白免疫印迹(Western blot)方法对A549-NC组、A549-KD组和A549-KD+信号转导与转录激活因子3(STAT3)组细胞中Kin17、STAT3、磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、碱性螺旋-环-螺旋转录因子(Twist)和转录因子(Snail)表达水平进行检测,采用划痕实验检测细胞侵袭能力,采用Transwell实验检测细胞迁移能力,采用免疫荧光实验检测Kin17和STAT3蛋白在细胞中的定位情况。结果:与A549-NC组相比,A549-KD组的STAT3表达水平下降(P0.05)。A549-KD组E-cadherin表达水平高于A549-NC组和A549-KD+STAT3组,而Vimentin、Twist和Snail表达水平低于A549-NC组和A549-KD+STAT3组(P0.05)。A549-KD组划痕愈合率、细胞迁移率低于A549-NC组和A549-KD+STAT3组(P0.05)。Kin17和STAT3蛋白共定位于细胞核中。结论:在非小细胞肺癌中Kin17可能通过促进STAT3表达水平以促进非小细胞肺癌细胞上皮-间质转化(EMT)、侵袭和转移,Kin17及STAT3在非小细胞肺癌患者诊断和治疗中具有一定临床价值。     

地高辛通过下调AEG-1表达抑制人胃癌MKN45细胞迁移和侵袭

本研究旨在观察地高辛对人胃癌MKN45细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨其分子机制。取人胃癌MKN45细胞作为研究对象,采用Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,通过脂质体转染法将星形细胞上调基因-1(astrocyte elevated gene-1,AEG-1)sh RNA干扰质粒转染MKN45细胞以构建低表达AEG-1的细胞株,利用Western blot法检测基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、E-钙粘蛋白(E-cadherin)和AEG-1等蛋白的表达变化。结果显示,地高辛可使MKN45细胞迁移率和侵袭率均显著下降(P0.05),下调MMP-9和AEG-1蛋白表达水平(P0.05)以及上调E-cadherin蛋白表达水平(P0.05),上述作用均具有剂量依赖性。经sh RNA干扰AEG-1基因表达后,MKN45细胞中AEG-1蛋白表达水平显著下降(P0.05);同时AEG-1干扰组MKN45细胞中E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P0.05),细胞迁移率、侵袭率和MMP-9蛋白表达水平均显著下降(P0.05)。上述结果提示,地高辛可在体外剂量依赖性地抑制人胃癌MKN45细胞迁移和侵袭,这可能与地高辛抑制AEG-1蛋白表达,继而下调MMP-9蛋白表达和上调E-cadherin蛋白表达有关。     

过表达P185可抑制EMT并促进胃癌细胞侵袭和迁移

为探究过表达P185基因对胃癌SGC7901细胞侵袭、迁移的影响以及可能作用机制,本研究通过脂质体将携带P185基因的过表达pcDNA3.1-P185质粒,转染至胃癌SGC7901细胞中;本研究采用qRT-PCR和免疫印迹试验(Western blotting)检测P185 mRNA的转录水平和蛋白水平,Western blotting检测钙黏蛋白E(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶-2 (matrix metalloprotease, MMP-2)表达;以Transwell小室法检测细胞的侵袭、迁移能力的变化。研究结果表明:胃癌细胞转染过表达pcDNA3.1-P185质粒能显著上调P185 mRNA和蛋白质的表达(p0.05);SGC7901细胞转染重组质粒pcDNA3.1-P185后,细胞的侵袭、迁移能力较对照组显著增强(p0.05),细胞中E-cadherin蛋白水平显著下调(p0.05),Vimentin、MMP-2蛋白水平显著增加(p0.05)。本研究显示P185可能通过抑制EMT,促进细胞外基质的降解、促进胃癌细胞的侵袭、迁移。     

长链非编码RNA SPRY4-IT1对髓母细胞瘤增殖及侵袭转移的影响

目的：探讨长链非编码RNA SPRY4-IT1（LncRNA）对髓母细胞瘤增殖及侵袭转移的影响。方法：髓母细胞瘤Daoy细胞分为对照组和si-SPRY4-IT1组,分别利用脂质体Lipofectamine 2000将阴性对照荧光序列和SPRY4-IT1-siRNA转入细胞中,采用Real-time PCR检测转染后各组细胞中SPRY4-IT1的表达情况,CCK-8实验及平板克隆形成实验检测细胞增殖能力的变化,以细胞体外侵袭、迁移实验分别检测细胞侵袭、迁移能力的变化,Western blot检测SPRY4-IT1对基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMP-9蛋白的影响。结果：si-SPRY4-IT1组SPRY4-IT1 mRNA表达水平、细胞体外增殖能力、细胞侵袭、迁移能力、细胞MMP-2蛋白表达均较对照组明显降低（P<0.05）,而MMP-9蛋白表达未见明显变化。结论：干扰长链非编码RNA SPRY4-IT1在髓母细胞瘤Daoy细胞中的表达能显著抑制细胞的增殖、侵袭和迁移能力。     

Sprouty-2对胃癌细胞上皮间质转化及侵袭转移的影响

目的:研究Sprouty2(SPRY2)基因在胃癌肿瘤细胞上皮间质转化(EMT)和侵袭转移的影响。方法:体外培养人胃癌细胞(BGC-823),采用慢病毒介导的sh RNA沉默SPRY2基因,并用实时定量PCR与Western blot检测其SPRY2、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)的表达,采用细胞划痕实验、Transwell实验检测SPRY2基因沉默后的胃癌细胞侵袭转移能力变化。结果:在慢病毒介导sh RNA沉默SPRY2基因的人胃癌BGC-823细胞中,SPRY2的m RNA和蛋白表达明显降低(P0.05),SPRY2沉默后人胃癌细胞E-cadherin的蛋白表达增多(P0.05),vimentin的蛋白表达减少(P0.05)。此外,SPRY2沉默后,胃癌细胞迁移能力和侵袭能力明显减弱(P值均P0.05)。结论:Sprouty-2基因通过调节E-cadherin与vimentin的表达参与胃癌细胞的上皮-间质转化,进而促进胃癌细胞的迁移与侵袭。     

TAR RNA结合蛋白在HIV-1感染中的作用

TARRNA结合蛋白是细胞中双链RNA结合蛋白家族成员之一.它可以结合HIV-1TARRNA,并与Tat协同作用激活LTR表达,进而促进病毒的转录与翻译.TRBP也是将干扰素抗病毒通路与RNA干扰免疫通路相连的一种细胞蛋白.在干扰素诱生的PKR反应中,TRBP通过直接抑制PKR的自磷酸化、与PKR竞争通用的RNA底物或与PACT形成异源二聚体等机制抑制细胞内的PKR反应,从而降低了PKR介导的对病毒表达的抑制作用.TRBP与Dicer和Ago2等组成的RNA诱导沉默复合体,在RNA干扰中发挥着关键作用并调控随后的序列特异性降解.在HIV-1感染中,TRBP更倾向于促进病毒的表达与复制,因此TRBP也成为控制HIV-1感染的新靶点.     

转录因子WSTF对肺癌细胞增殖和侵袭的实验研究

目的:研究转录因子WSTF对肺癌细胞增殖和侵袭作用的影响。方法:采用慢病毒介导的基因转染方法建立A549细胞WSTF高表达细胞系A549-WSTF和空质粒对照细胞系A549-control。细胞增殖实验和克隆形成实验观察ING5过表达对肺癌A549细胞增殖能力的影响;Trans-well迁移实验和侵袭实验观察WSTF对肺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:Western blot验证A549-WSTF细胞WSTF蛋白水平显著高于对照细胞A549-control,P=0.0004。WSTF高表达明显促进了肺癌细胞的增殖能力(1-4天P值分别为0.002、0.0004、0.0002和3.21×10-5)和克隆形成能力(P=0.004);WSTF过表达还显著促进了肺癌细胞从trans-well小室迁移到下室的作用,其OD570值分别为0.626±0.013(A549-WSTF)和0.322±0.010(A549-control),P=2.37×10-5;WSTF还促进肺癌细胞穿透基质胶迁移到下室,其OD570值分别为0.600±0.027(A549-WSTF)和0.333±0.017(A549-control),P=0.0004。结论:WSTF可以促进肺癌细胞的增殖和侵袭能力而发挥促癌作用。     

CDK4基因沉默对非小细胞肺癌A549 增殖和代谢的影响

目的:通过特异性小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA),使CDK4基因沉默,探讨该基因沉默对肺癌A549细胞增殖和代谢的影响及其可能的作用机制。方法:将靶向CDK4小干扰RNA(si RNA-CDK4)和阴性对照干扰片段(si RNA-control)成功转染A549细胞后,利用实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹法分别检测CDK4在m RNA和蛋白水平的变化;细胞计数法、CCK-8法和软琼脂糖克隆形成实验检测A549增殖的变化和克隆形成能力;FCM法检测A549细胞的细胞周期;18F-FDG摄取实验、乳酸检测试剂盒及海马技术检测A549细胞中葡萄糖、乳酸的量及氧耗的变化;利用RT-PCR检测CDK4基因沉默后A549细胞中糖代谢相关酶m RNA水平的变化。结果:将靶向CDK4小干扰RNA(si RNA-CDK4)转染A549细胞后,可明显抑制CDK4的m RNA和蛋白表达(P0.001,P0.01)。CDK4蛋白抑制后,细胞增殖在48、72和96 h均明显降低(P值均0.05),G1期细胞比例明显增多,S期细胞比例明显减少(P值均0.05);18F-FDG摄取量下降(42.21±1.90)%(P0.05),乳酸的生成量减少(29.39±5.35)%(P0.05),而细胞的基础耗氧量增加(67.17±3.58)%(P0.01);糖酵解相关酶PFKFB3、PKM2、LDHA在m RNA水平均明显减低(P0.001,P0.01,P0.001)。结论:抑制CDK4表达可明显降低糖酵解水平,并增加耗氧量;同时可引起细胞周期阻滞,抑制肿瘤细胞增殖。其机制可能与CDK4直接或间接调节糖酵解相关酶的表达有关。     

肿瘤相关成纤维细胞对非小细胞肺癌恶性生物学行为影响

目的:探讨肿瘤相关成纤维细胞(Tancer Associated Fibroblast,TAF)对非小细胞肺癌(Non-small Cell Lung Cancer,NSCLC)恶性生物学行为的影响。方法:选取在本院肿瘤科住院手术的非小细胞肺癌患者,收集术后肺癌标本,马松三色染色(Masson Trichrome Stain)和天狼星红染色(Sirius Red Stain)观察肺癌组织(Lung Cancer Tissue,LCT)、癌旁组织(Pericarcinomatous Tissue,PCT)和正常组织(Normal Tissue,NT)中TAF的表达情况;体外将非小细胞肺癌细胞A549与非小细胞肺癌成纤维细胞P-gp共培养,CCK-8检测共培养前后A549细胞增殖能力;细胞划痕和Trans-well实验分别检测A549细胞迁移和侵袭能力;q RT-PCR和Western blot检测A549细胞上皮间质转化(Epithelial Mesenchymal Transition,EMT)标志蛋白E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达。结果:Masson和Sirius染色结果显示:肺癌组织中纤维的表达明显高于癌旁组织;与P-gp共培养的A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力及上皮间质转化相关蛋白N-cadherin和Vimentin表达均明显高于阴性对照组(P0.05),而E-cadherin的表达明显降低(P0.05)。结论:TAF可能通过诱导非小细胞肺癌细胞EMT的发生从而促进非小细胞肺癌的增殖、迁移和侵袭等恶性生物学行为。     

基于CRISPR/Cas9-SAM系统CHD5基因过表达慢病毒载体的构建及对膀胱癌T24细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的:利用CRISPR/Cas9-SAM系统构建CHD5基因过表达慢病毒载体,并分析其对膀胱癌细胞T24增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:针对CHD5基因设计3个sgRNA (sgRNA-1、sgRNA-2、sgRNA-3),将sgRNA连入LV-sgRNA-MS2-P65-HSF1-Neo载体,经293T细胞包装后获得高滴度慢病毒颗粒。病毒以MOI=10感染膀胱癌细胞T24。RT-qPCR和Western blot分别检测感染病毒后T24细胞CHD5 mRNA和蛋白表达水平,CCK8实验、流式分析、划痕实验和Transwell实验检测CHD5过表达对T24细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。结果:成功构建CHD5过表达慢病毒载体。慢病毒感染T24细胞后,RT-qPCR和Western blot证实,T24细胞CHD5的mRNA和蛋白表达水平显著高于空白组和阴性对照组(P 0. 05),并且sgRNA-3-MS2-P65-HSF1序列的作用最为显著。CCK8及流式分析结果显示,过表达CHD5抑制T24细胞增殖,促进凋亡,与对照组相比,均有统计学意义(P 0. 001)。划痕和Transwell实验结果表明,过表达CHD5可抑制T24细胞迁移和侵袭能力(P 0. 01)。结论:成功构建CHD5过表达慢病毒。过表达CHD5能促进膀胱癌细胞T24凋亡,抑制其增殖、迁移和侵袭能力。