L,D-转肽酶LdtMt2-厄他培南加合物的新状态I-plus结构（英文）

具有多重耐药性和广泛耐药性的结核分枝杆菌菌株正在全球范围内传播,因此迫切需要新的抗结核药物.结核分枝杆菌的L,D-转肽酶LdtMt2直接参与肽聚糖的形成、细菌毒性和β-内酰胺抗性.该酶是潜在的抗结核靶标,可以被碳青霉烯类抗生素抑制,碳青霉烯类抗生素是FDA批准的用于治疗肺结核的药物.据报道,LdtMt2与碳青霉烯类抗生素(如厄他培南、亚胺培南和美洛培南)相互作用时,存在两种不同的中间状态,即状态Ⅰ和Ⅱ.状态Ⅰ被认为是初始加合物形成状态,而状态Ⅱ被认为是稳定的蛋白质-配体相互作用状态,并伴有碳青霉烯类抗生素和蛋白质的局部构象排列.本文报告了一个LdMt2-ertapenem新中间状态Ⅰ-plus,具有与状态Ⅱ相同的碳青霉烯类抗生素构象和与状态Ⅰ相似的局部蛋白质构象.该新状态是从状态Ⅰ转变为状态Ⅱ的中间状态,构象变化发生在厄他培南分子而不是蛋白质.我们的工作有助于阐明碳青霉烯类抗生素对LdtMt2作用后发生的变化,并与其他报道的中间状态一起揭示L,D-转肽酶如何与碳青霉烯类抗生素相互作用.     

厄他培南与人血清清蛋白体外相互作用的理化特性

研究新型碳青霉烯类抗菌素厄他培南（ertapenem, ERT）与人血清清蛋白（human serum albumin,HSA）的体外相互作用的物理化学特性。模拟生理条件下,计算机模拟技术结合荧光光谱和紫外光谱,研究ERT与HSA相互作用机制,荧光光谱实验中,Kq 值远大于2.0×1010 L·(mol·s)-1,ERT对HSA荧光猝灭的Stern-Volmer 曲线有良好的线性关系,表明ERT与HSA的相互作用表现为静态结合过程。HSA的最大发射波长发生轻微红移,说明HSA的微环境发生了改变。ERT与HSA的分子结合距离r值较小,说明发生能量转移现象。同步荧光技术解析出ERT对HSA的结构域微区构象产生影响,使色氨酸残基周围的微区构象及结合位域的疏水性发生改变。荧光相图技术解析出ERT与HSA相互反应呈线性,说明HSA构象型态的变迁为“二态”模型。HSA与ERT相互作用的热力学参数及分子模拟技术建立ERT-HSA结合模型,表明ERT与HSA的相互作用力主要是疏水作用力,兼有氢键作用力的存在。荧光偏振定量证明,HSA与ERT相互作用过程中生成了非共价复合物。光谱实验与计算机模拟结果基本一致,其结果可为研究ERT与HSA相互作用本质提供一定参考。     

玉米果糖-6-磷酸,2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酶基因的结构与表达分析

通过RT-PCR,结合RACE技术,得到了玉米(Zea mays L.)果糖-6-磷酸,2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酶的全长cDNA克隆,命名为mF2KP.氨基酸序列同源性比较发现,mF2KP蛋白可以分为两个部分:C端包含高度保守的催化功能区,N端为植物中特有的多肽.将mF2KP基因中一段包含完整催化功能区的片段在大肠杆菌(Escherichia coli)中表达,融合蛋白具有果糖-6-磷酸,2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酶活性.Northern杂交证明在种子活力不同的幼苗中,mF2KP的转录水平存在明显差异.种子活力越高,幼苗中mF2KP的转录水平越低.