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鸡减蛋综合征病毒(EDSV—76)基因组E1区结构特点分析 总被引:1,自引:0,他引:1
EDSV-76病毒中国株AA-2经常规方法提取其病毒DNA后,建立了限制性内切酶PstI水解片段的全基因文库。对其中PstI-G片段和PstI-A片段的正反链进行序列测定,获得EDSV E1区(0-8.8m.u)的核苷酸序列。经分析,EDSV E1区具有与其他腺病毒E1区类似的结构。以大于60个氨基酸残基为标准,EDSV E1区共有7个开放读码框架(ORF),其中R1、R2、ElbsT和E1b1T 相似文献
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通过培养的人主动脉平滑肌细胞(hASMC)及脐静脉内皮细胞(hUVEC),应用3H-TdR参入、Northernblot分析、逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)、放射免疫分析(RIA)、和紫外比色法等技术观察了人主动脉中硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)对hASMC和hUVECDNA合成的作用及对血小板源生长因子(PDGF)、PDGF受体、转化生长因子β(TGF-β)、内皮素-1(ET-1)或碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因表达和肾素-血管紧张系统(RAS)的影响,结果显示,HSPG明显抑制培养的hASMC基础的DNA合成(cpm值为:10385±3263vs,25541±6421,P<0.01)及外源性PDGF诱导的DNA合成(cpm值为:9878±1947vs.13481±44l0,P<0.05);抑制PDGFA链、TGF-Bp和ET-1mRNA表达,提高PDGFa和β受体mRNA的表达;显著降低hASMC培养液中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的浓度和血管紧张素转换酶(ACE)的活性,推测HSPG抑制PDGFA链、TGF-β及ET-1mRNA表达,降低ACE活性及AngⅡ浓度是其抑制hASMC增殖的重要机 相似文献
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人神经生长抑制因子β结构域的高效表达及性质研究 总被引:1,自引:0,他引:1
神经生长抑制因子( G I F)是一种特异存在于哺乳动物脑中的金属硫蛋白(m etallothionein, M T)类似物,又称 M T Ⅲ.它与 M T 有相同的结合 Zn(Ⅱ), Cd(Ⅱ), Cu(Ⅰ)等金属的能力,但与 M T 不同的是它能够抑制神经细胞的生长,并发现在患 Alzheim er disease( A D 症)病人的大脑中 G I F蛋白量和m R N A 的量均显著下降,研究证明 G I F对神经细胞的抑制活性主要存在于其 β结构域中.为进一步研究 β结构域结构和功能的关系,将 β结构域的 c D N A 克隆入融合表达载体p G E X 4 T 1 中, I P T G 诱导并高效表达了 β结构域蛋白,通过氨基酸组成和质谱的测定,证明得到了目的蛋白.利用金属重组的方法,分别得到了结合 Cd 和 Zn 的 G I F 的 β结构域,并测定了其巯基和金属含量对蛋白量的比值,证明所得 G I F β与 M T β在结合金属能力上十分相似.用紫外光谱学的研究表明, Cd M T 的 β结构域在250 nm 处比 Cd G I F 的 β结构域有一明显肩峰,从而表明二者的金属—巯基结合簇的结构有明显不同,而这种结构上的差异有可能导致二者在功能上的不同. 相似文献
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利用同源模建方法预测了t-PAK1区的三维结构。通过结构叠合确定了t-PAK1、K2区,纤溶酶原K1、K4区及UK K区的Lysine结合口袋。静电势计算及疏水性分析表明,在t-PA K2C A2区以及纤溶酶原K1、K4区与纤维蛋白裸露的Lysine之间在明显的的静电势互补和疏水面契合。确定了Kringle区结合口袋与Lysine亲和重要所基酸,分析了t-PAK1区,UK K区不能结合Lysine 相似文献
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EB病毒(EBV)是一种与地区性伯基特氏淋巴瘤、鼻咽癌、何杰金氏病等多种人体肿瘤有关的疱疹病毒.已往的研究表明,潜伏膜蛋白(LMP)基因是EBV最可能的致瘤基因.为制备LMP基因转基因小鼠,探讨LMP的体内致瘤作用,首先构建了含鼠金属硫蛋白-1(MT-1)基因调控区和LMP基因编码区的pBR322-MT-LMP质粒,并用电击法将该质粒与pKJ1-Neo质粒共转染人胃癌细胞株MGC,对MT-LMP基因在转染细胞中的整合、转录情况及重金属镉和镍对该融合基因的转录调控进行了研究.结果表明:(1)两质粒共转染效率为86.7%;(2)PCR和Southern杂交分析显示,完整的MT-LMP基因已整合入转染的MGC细胞基因组,且在不同的转染细胞克隆中,MT-LMP基因整合的方式及拷贝数不同,拷贝数从1到19不等;(3)RT-PCR和Northern杂交分析证实,MT-LMP基因不仅在转染的MGC中能够转录,而且在10μmol/L镉诱导下,MT-LMP基因转录增强,平均增高约1.4倍.结果说明,在MT-1基因调控区指导下,LMP基因不但有mRNA水平的表达,而且其表达受重金属镉的调控,上述结果为制备MT-LMP转基因小鼠 相似文献
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hEGF和hTGF—αN结构域与C结构域的功能差异 总被引:4,自引:0,他引:4
用PCR的方法将人表皮生长因子和人转化生长因子-α(hTGF-α)的N结构域和C结构域互换,构造了两个嵌合分子E-TGF(EGF1-32-TGF-α34-50)和T-EGF(TGF-α1-33-EGF33-53)。野生型和嵌合分子基因在大肠杆菌phoA系统表达并纯化定量。各重组体的受体竞争结合活性大小为hEGF〉hTGF-α和E-TGF〉T0-EGF,它们的促细胞生长活性的大小为hTGF-α和E- 相似文献
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蛋白激酶C对鼻咽癌细胞P21~(ras)表达的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
使用蛋白激酶C(PKC)抑制剂与抗P21H-ras单抗,通过免疫细胞化学,双参数流式细胞仪等方法,探讨鼻咽癌细胞CNE-2Z中PKC与H-ras表达的关系。结果:1)P21ras蛋白在CNE-2Z细胞主要在胞膜(27%)与胞浆(93.7%)表达。作用于PKC调节区的抑制剂sphingosine(SS)(2×10-5mol/L)与作用于催化区的staurosporine(ST)(2×10-6mol/L)在明显抑制细胞生长的浓度使P21ras表达程度均减弱,胞膜阳性率明显降低,分别为5.6%与1.6%。2)蛋白质-DNA双参数流式细胞法测定发现在G1期细胞群Ras蛋白表达差异较大,提示Ras蛋白主要在G1期合成逐渐增多;经PKC抑制剂SS与ST处理后,G1期细胞表达的差异减小,说明PKC抑制剂抑制了G1期Ras蛋白合成。本研究结果提示:PKC对Ras蛋白向发挥作用的部位胞膜的转移具有一定的调控作用。Ras蛋白的表达可能与CNE-2Z细胞G1/S期的过渡有关。 相似文献
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用电泳迁移分析方法研究了21nt脱氧寡核苷酸G3TG2TGT2G5TG2TGT(CP1)与129bp的乙肝病毒(HBV)核衣壳启动子(Cp)片段内一位点结合形成的三链DNA的特异性及稳定性.在克隆有HBV基因组的质粒pCP10的酶切产物中,CP1仅与含Cp的129bp片段结合.在20mmol/LMg2+溶液中其解离常数(Kd)为1.4×10-7mol/L.不同离子稳定三链DNA的效果依次为sp4+(精胺)>Mg2+>Zn2+>Na+>K+,离子之间存在相互竞争作用.比CP1多一误配碱基的脱氧寡核苷酸G2TG2TGTG3TG2TG2TG2T(CP2)在20mmol/LMg2+溶液中与Cp结合的Kd值约为CP1的1/7,而在60mmol/LK+或5mmol/LZn2+溶液中检测不到它与Cp的结合,这进一步显示了三链DNA形成的特异性.细胞的生理离子浓度被认为是:Sp4+1mmol/L,Mg2+10mmol/L,K+140mmol/L,因此,CP1在细胞内将能特异地与Cp结合并具有较好的稳定性. 相似文献
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种子引发提高小麦抗渗透胁迫能力的效应 总被引:4,自引:1,他引:4
种子经渗透势-0.8MPa或-1.2MPaPEG-6000处理后,抗旱性不同小麦(TriticumaestivumL.)“晋麦33”和“84G6”种子萌发率均有提高,种子电解质外渗率明显降低,种子萌发适应渗透胁迫能力提高,种子可溶蛋白质含量、PAL和POD活性显著增加,“晋麦33”种子CAT活性增加,两品种幼苗PAL、POD和CAT活性也均有提高,但“84G6”种子CAT活性下降。 相似文献
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天花粉蛋白的定点聚乙二醇修饰 总被引:3,自引:0,他引:3
用一种定点修饰天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)的方法,将聚乙二醇(PEG)偶联到预先选定的位点.利用nTCS无半胱氨酸(Cys)残基这一特点,通过定点突变将一个Cys残基引入TCS以取代第7位的丝氨酸(Ser)残基.然后,与巯基反应的PEG-m aleim ide 即可偶联到新引入的Cys 残基上.经纯化得到均一的PEG-TCS复合物,在SDS-PAGE上显示一条区带,表观分子量为38 kD.复合物的体外致核糖体失活活性降低了6倍,但其体内引产活性与nTCS相同.定点PEG修饰方法为改造TCS提供了新途径. 相似文献
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狂犬病毒aG株糖蛋白在pET原核系统中的表达及纯化 总被引:6,自引:0,他引:6
在狂犬病的临床诊断和基础研究中都迫切需要大量纯度高且价廉的狂犬病毒糖蛋白抗原。本文应用带有His6尾的pET原核表达系统对狂犬病毒(RV)aG株的糖蛋白(GP)进行表达和纯化。构建的融合表达载体pET-aG1和pET-aG2(-57bp)分别含有RVaG株GP基因的全序列及删除了为GP信号肽编码的58个碱基的序列。用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫印迹、间接ELISA检测都证明表达产物为RVGP,且位于菌体中的包涵体内。经固定化金属螯合层析(IMAC)提纯,pET-aG1表达产物有较高的特异性和纯度,可用作测定RVGP抗体的免疫诊断试剂。 相似文献
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牛磺酸调节缺氧性肺、脑血管反应的机理研究 总被引:9,自引:0,他引:9
本实验从磷脂酶A_2(PLA_2)、前列腺素(PGs)、白三烯(LTs)和过氧化脂质(LPO)方面探讨了牛磺酸调节肺、脑血管对急、慢性缺氧反应的机制。急性缺氧时狗出肺与出脑血中LPO增加,PLA,活性有升高趋势,但出脑与出肺(入脑)血相比无显著性差异。出肺与出脑血中LTC_4、TXB_2、6-Keto-PGF_(1a)及TXB_2/6-Keto-PGF_(1a)比值均升高。慢性缺氧大鼠肺、脑组织中PLA_2活性均升高。牛磺酸增加缺氧时6-Keto-PGF_(1a),减弱其它变化。提示牛磺酸对缺氧性肺缩血管反应的调节作用可能与降低缺氧时PLA_2活性,抑制脂质过氧化和LTC_4、TXA_2生成,降低TXA_2/PGI_2比值有关;而牛磺酸减弱缺氧性脑舒血管反应不是直接通过上述变化起作用的。 相似文献
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本工作采用分离培养家兔肺内小动脉平滑肌细胞(PASMCs),观察了外源性血小板活化因子(plateletactivatingfactor,PAF)、BN52021(PAF受体拮抗剂)、吲哚美辛、维拉帕米对PASMCs产生血栓素A_2(TxA_2)、前列环素(PGI_2)及对细胞膜Ca~(2+)-ATPase活力的影响。结果表明:(1)基础状态下PASMCs存在花生四烯酸(AA)代谢。(2)外源性PAF通过受体后途径激活环加氧酶促进AA代谢致TXA_2及PGI-2增加,TXA_2/PGI_2比值无明显变化。(3)外源性PAF能直接抑制Ca~(2+)-ATPase活力。(4)维拉帕米可逆转PAF抑制PASMCs膜Ca~(2+)-ATPase活力的效应。 相似文献
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从大鼠的肝脏克隆胰岛素受体底物1(IRS-1)的PH结构域基因并进行谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合表达,研究该结构域与蛋白激酶C(PKC)的结合情况,并为进一步寻找其新配基打下基础,研究采用一步法从大鼠新鲜肝组织中提取总RNA,以RT-PCR的方法扩增目的基因片段,测序证明序列正确,再将正确的目的基因片段定向克隆到表达载体pGEX-4T-1中,以IPTG在26℃下诱导,获得与GST的融合表达,表 相似文献
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雄激素受体与雄激素应答元件的相互作用 总被引:4,自引:2,他引:2
将雄激素受体(AR)的cDNA1119bp片段(1105-2224)(其中包含其DNA结合结构域到部分激素结合结构域)克隆于表达南粒pGEX中,通过IPTG诱地,在E.coli中表达GST-AR融合蛋白,经谷胱甘肽-Sepharose-4B亲和层析得以部分纯化。利用一个有雄激素应答元件(ARE)活性的C3(1)DNA片段为阳性探针,通过凝胶阻滞分析和DNase1足迹法证明此表达产物具有牧民的DNA 相似文献
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在大肠杆菌中分别表达汉滩病毒囊膜糖蛋白G1和G2 总被引:3,自引:0,他引:3
利用PCR方法扩增了汉滩病毒76-118株囊膜糖蛋白G1和G2的编码区基因,并将PCR产物克隆了T-载体中,用限制性内切酶将G1和G2的编码区基因切下,并克隆到表达载体PBV220中构建G1和G2的表达质粒,诱导表达后在SDS_PAGE凝胶中未见表达产物带,表达的G1和G2能与部分抗G1和G2的单克隆抗体发生反应,但用Western-blot方法不能检测到表达产物。用表达的G1和G2免疫小白鼠能刺 相似文献
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用^1H NMR法测定T18肽在DMSO(MS18)和50%六氟异丙醇(FP18)中的溶液构象。MS18含有Ile3 ̄Glu7和Ala12 ̄Gln16两段β-折叠链;而FP18则转变为α-螺旋结构。综合分析T14,T18和TDK三个模型肽的结构性质和稳定性,比较肽链序列和溶剂作用,提出肽链局部优势结构的概念,并据此讨论天花粉蛋白小结构域折叠起始过程。 相似文献
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以A.niger来源的果胶酶为材料,经过CM-SephadexC-50及SephadexG-100两步骤分离纯化得到电泳均一的endo-PG1及endo-PG2,其亚基分子量分别为35kD及37kD,含糖量为11.22%及8.3%,最大紫外吸收峰分别在274nm及269nm处,氨基酸组成分析结果表明Gly含量较高,Met含量较低,不含Cys,并且酸性氨基酸含量高于碱性氨基酸,圆二色谱结果表明二级结构主要为α螺旋和β折叠,其中endo-PG1含α螺旋45.1%,β折叠24.9%;endo-PG2含α螺旋39.6%,β折叠36.5%。 相似文献
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黑子南瓜甘油-3-磷酸酰基转移酶基因的克隆及序列分析 总被引:6,自引:3,他引:3
依据国外报道的南瓜甘油-3-磷酸转酰酶(GPAT)基因的cDNA序列合成相应引物,用RT-PCR技术,成功地分离了黑子南瓜(Cucurbitaficifolia)GPAT基因的cDNA片段,并亚克隆到了pGEM-T载体系统的多克隆位点上,序列分析表明黑子南瓜GPAT基因的cDNA序列及递推的氨基酸序列与南瓜(Cucurbitamoschata)相比分别具有98%和965%的同源性。在1188bp中有22个核苷酸发生变化,导致13个氨基酸的改变 相似文献
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人肝癌细胞株7721细胞的N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅲ(GnTⅢ)活性受Ser/Thr蛋白激酶的两种抑制剂quercetin和三氟吡嗪(TFP).蛋白激酶C(PKC)的两种特异性抑制剂D-鞘氨醇和staurosporine的抑制。用PMA处理细胞舌,GnTⅢ活力随膜性PKC(m-PKC)活力而平行变化,但与胞液PKC活力的变化无关。Quercetin、D-鞘氨醇和staurosporine还能够阻断PMA对GnTⅢ的激活。Quercetin、staurosporine对m-PKC和GnTⅢ的抑制作用基本上与它们的应用浓度成正比关系。当人及大鼠肾脏的粗GnT制剂分别用碱性磷酸酶切除磷酸基后,GDTⅢ的活力明显下降。这些结果表明m-PKC可能通过蛋白质的Ser/Thr残基上磷酸化和去磷酸化作用直接或间接地调节GnTⅢ。 相似文献