重组激活基因

本文概述了能诱导可变、多样与连接片段重组又称ＶＤＪ重组的两个重组激活基因－ＲＡＧ－１和ＲＡＧ－２的研究现状,主要介绍了ＲＡＧｓ的发现过程、结构特征、功能以及激活ＶＤＪ重组的可能机制。     

重组玉米获准田间试验

美国BioTechnica公司由美国农业部获准基因重组玉米的田间试验.试验已在美国衣阿华州Lisbon近郊开始.玉米是被认为是难以进行基因重组的植物,该公司没有发表重组玉米的培育方法.这次进行试验的玉米是只导入标记基因的,目的是获得其在野外生长方面的数据和为今后试验有关的环境数据.研究者正在试验将高产赖氨酸的基因导入玉     

冠状病毒的基因重组

冠状病毒的基因组约有高达25％的重组频率。已经证明在病毒基因组之间以及缺损性干扰（DI）RNA与病毒RNA之间可以发生重组,这为病毒RNA及DI RNA提供了一种进化的工具,并可用来解释冠状病毒基因组的多样性,冠状病毒能进行重组的特性可能与其mRNA的转录机制有关,其RNA的合成是不连续的,产生了病毒聚合酶的非持续性,重组还被用作病毒基因组RNA突变的一种工具。     

基因重组改良水稻

日本《农业技术》,１９９９年５４卷６期第４４３页报道：日本三重县农技中心向基因导入难的水稻品种“越光”导入外来基因取得成功,概率高达２０％以上。所用的载体是由来于通常使用的ＰＢ１０１的Ｐ１Ｇ１２１Ｈｍ（具有匀霉素抗性、内含子ＧＵＳ基因）。其要点是在短时期（约３周间）诱导分裂旺盛的细胞,感染土壤杆菌。获得的基因重组水稻生长健壮,结实正常,自殖的第１代种子也能向导入性质的后代遗传。利用这种方法,导入绿色萤光蛋白质（ＧＦＰ：ＧｒｅｅｎＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ）基因,照射近紫外线时,无论水稻…     

基因重组合的新途径

一.有性生殖的共同点从单細胞藻类例如衣藻到多細胞的植物、动物和人类的有性生殖有什么基本相似的地方呢? 第一,細胞的結合。这一般是两个在性貭上有所差异的生殖細胞(精子和卵子)的結合。精子和卵子的染色体都是单元体(1n)。人的精子和卵子照例都各含有23个染色体(1956年以前普遍认为是24个染色体),这是1n=23。第二,細胞核的結合。这就是精子的核和卵子的     

代谢调节与基因重组

<正> 近代生物化学的发展,使工业微生物发酵正处在一个巨大变革的时期。这一时期的主要特征表现在传统的发酵被代谢控制发酵取代;经典的随机筛选产生菌的方法被基因重组的各种技术所改观。在这两个领域的研究中,尽管还有许多基础理论问题尚待解决,但具有经济效益的实用方法已经问世。其研究对象也逐步由实验室中的非实用菌种转向了具有工业生产意义的菌种。     

代谢调节与基因重组

<正> 近代生物化学的发展,使工业微生物发酵正处在一个巨大变革的时期。这一时期的主要特征表现在传统的发酵被代谢控制发酵取代;经典的随机筛选产生菌的方法被基因重组的各种技术所改观。在这两个领域的研究中,尽管还有许多基础理论问题尚待解决,但具有经济效益的实用方法已经问世。其研究对象也逐步由实验室中的非实用菌种转向了具有工业生产意义的菌种。     

大型家畜的基因重组

日本农林水产省决定1990～1992年实施的海外委托型最尖端头脑结集培养研究"关于转基因大型家畜的开发的基础研究"已委托给美国依阿华州立大学.1990年预算为1500万日元.农林水产省委托海外研究还是第一次.研究内容有,以猪、羊等家畜为     

基因重组的生物检测法

静冈大学农学部助教授露无慎二等和东京大学农学部助教授荒井综一样等利用冰核细菌的冰核活性,从1 ml溶液能简单地检测出10个以下的细菌数,这项工作已在11月东京召开的日本植物病理学会秋季关东会上发表.用于基因重组生物开放系风险评价的放射性探测法是由科学技术厅委托开发的.冰核活性包括冰核细菌的溶液在-3℃放置5分钟,根据溶液的结冰情况判断.但是,要用冰核活性检测细菌,能感度低也是问题.露无等构建了在1ac Z基因的多克隆部位插入冰核基因的PUC载体,转化大肠杆菌.而且添加IPTG诱导1ac Z基因的表达,可提高检测灵敏度.在37℃下培养5～6个小时,使菌株增殖,在1克土壤中检测出5.3个大肠杆菌.实际应用时必须核对有无自然界的冰核活性的阻碍剂.     

玉米矮杆基因研究进展

玉米已成为我国种植面积最大的农作物,提高玉米的种植密度是提高玉米产量的重要技术手段。玉米的株型改良成为玉米遗传育种研究的重点之一。合理株型和抗倒伏能力是影响玉米产量的重要农艺性状,也是衡量优良玉米品种的重要指标之一。通过玉米矮化基因的分离及研究,开发相应的分子标记,培育出矮化或半矮化玉米植株,从而改善玉米株型结构,增加种植密度,提高群体光合效能,提高玉米产量。主要从玉米矮化育种的概况、玉米矮化基因遗传特点、玉米矮化基因的表型以及激素对玉米矮化的影响等方面的研究进行了总结和概述,为玉米矮化基因的开发利用及分子机制的阐明提供新的信息。     

同源重组法制备口蹄疫病毒多基因重组腺病毒

通过细菌内同源重组的方法成功构建了含有O型口蹄疫病毒P1—2A和3C蛋白酶基因和3D基因的重组腺病毒表达载体。首先将P1—2A、3C和3D基因亚克隆连接到穿梭质粒pShuttle—CMV上,再将重组穿梭质粒用PmeI线性化后电转化携带有腺病毒骨架载体pAdeasy—1的大肠杆菌BJ5183感受态菌,经细菌内同源重组产生pAdcmv—p12x3c和pAdcmy—p12x3cd重组腺病毒质粒,经序列测定证实目的基因已正确的插入到腺病毒骨架载体中。重组腺病毒质粒经PacI线性化后转染HEK293细胞,转染1w内细胞出现典型病变。取转染细胞裂解液上清连续传代至第4代时,细胞于24～48h内即病变完全,收取接毒后24h细胞进行。PCR和RT—PCR检测,表明目的基因已整合到腺病毒基因组内,且在mRNA水平上有表达。取第4、6、8和10代病毒,用蛋白酶K处理后可扩增出目的基因,证明此重组病毒可稳定存在。本研究为FMDV腺病毒活载体疫苗的研究奠定了基础。     

同源重组法制备口蹄疫病毒多基因重组腺病毒

通过细菌内同源重组的方法成功构建了含有O型口蹄疫病毒P1-2A和3C蛋白酶基因和3D基因的重组腺病毒表达载体.首先将P1-2A、3C和3D基因亚克隆连接到穿梭质粒pShuttle-CMV上,再将重组穿梭质粒用PmeI线性化后电转化携带有腺病毒骨架载体pAdeasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态菌,经细菌内同源重组产生pAdcmv-p12x3c和pAdcmv-p12x3cd重组腺病毒质粒,经序列测定证实目的基因已正确的插入到腺病毒骨架载体中.重组腺病毒质粒经PacI线性化后转染HEK293细胞,转染1w内细胞出现典型病变.取转染细胞裂解液上清连续传代至第4代时,细胞于24~48h内即病变完全,收取接毒后24h细胞进行PCR和RT-PCR检测,表明目的基因已整合到腺病毒基因组内,且在mRNA水平上有表达.取第4、6、8和10代病毒,用蛋白酶K处理后可扩增出目的基因,证明此重组病毒可稳定存在.本研究为FMDV腺病毒活载体疫苗的研究奠定了基础.     

基因重组与基因合成实验设计软件系统的建立

本文报导了用于基因重组与基因合成实验设计的软件系统的建立.此系统由30个功能模块组成,为研究者提供了包括在DNA分子上寻找限制性内切酶位点、核酸分子片段之间同源性比较,基因化学合成的实验设计、特定顺序分析引物及核酸杂交探针的设计、阅读框的查找等功能.此外,本系统可以对外来数据库的资料进行援引和进一步分析,为分子生物学的研究提供有价值的信息.     

基因诱变、重组、克隆

950826引人大受多个寡囊棱苷酸介导的插人物的快速方法[英]/Warrilow,D.…,BioTechnique$.一1992,13(1).·42～45[译自DBA,1992,11(17),92-095373 新方法可将4个彼此分开的25bp的插入物导入小鼠Moloney白血病病毒原病毒的一个525bp的片段。可通用于制造大型多个插入物。引物经退火与单链模板连接,并进行突变链的合成。产物经限制酶酶切后进行电泳,以区分载体的、异源双链的以及插入的DNA。接着将突变异源双链DN。A克隘到抑铡甲基化的双链载体,以防甲基导致的错配修复。用限制酶分析来筛选克隆。通过双链定序确认所需的序列。因为合成…     

基因诱变、重组、克隆

922825使用诬式亲和融合法从大肠杆菌中经蛋白水解得到的盆组蛋白的祖定性〔英〕/Murby,M.…,Bi-oteehnol.Appl.Bioehe。一二1991,14(3)一336~346〔译自DBA,1992,11(s),92一0122‘]一31一本技术包括:构建一些融合基因,‘已们编码一些目标蛋白,如人的原胰岛素(Pl)、大鼠蛋白-二硫化物异构酶(PDI)硫氧还蛋白同源区1等 (即蛋白A的IgG一结合蛋白(22)和蛋白G的白蛋白结合区(BB)间的融合),在IgG一Sephar-ose上纯化。对ZZPI(质粒pRIT37)和ZZPIBB (质粒pRIT38)进行SDS一PAGE和Western印迹揭示,产生的Pl在体内是稳定的。从大肠杆…     

基因诱变、重组、克隆

923552甲醇利用型嗜甲基菌属耐热菌株的高效电激转化[英]/Haider,M.Z.…/Acta Biotechn01.一1991,21(4)一295~301[译自DBA,1902,11 (7),92一03606〕 采用pUC19、pBR322、pCMi、pUC/CAT以及由pSAS片段与pUC19的重组质粒(P USM4、pUSFio、pUSMZo)作为载体。分别用感受态、原生质体和电激三种转化法转化万eth好。夕瓜-105属菌株KISRI一5112(NCIB 12138)、KISRI一512(NCIB 12137和KISRI一6.1(NCIBiZi36)。在25产F、3 kV、1 .5一5 kV/cm电激条件下成功地转化了质粒(P UCM20的转化率达180万转化子/拼9 DNA),并稳定…     

基因诱变、重组、克隆

920055特异于沙门氏菌的ONA杂交探针的分离〔英1/0 lsen,J.E。…尹APMIS。一1901,99(2)一114~120〔译自DBA,1091,10(9),。1-04831〕 从建于大肠杆菌HB101中的鼠伤寒沙门氏菌 (sa乙仍。:ezza切尹h‘,。,‘。仍)LTz染色体基因库中分离到一个特异于沙门氏菌的DNA片段 (JEO4oZ一1,2.3kb)。将JEO4oZ一i作为探针用于菌落杂交,分析185个分属89个不同血清型的沙门氏菌及63个革兰氏阴性菌。探针与所有沙门氏菌菌株杂交,但不与其它菌株杂交。以牛、猪、家禽的粪样以及饲料为材料进行杂交,也显示出特异性。在两项分析中,56个样品中有45个呈…