多重连接探针扩增技术在临床病原体检测中的应用

真菌等临床病原体的诊断、基因分型和耐药性检测对于临床诊治十分重要。多重连接探针扩增是一个可以同时定量检测多个基因序列的,简单、有效、快速的方法。其步骤包括待测DNA变性、半探针与待测DNA杂交,半探针的连接、PCR法扩增、凝胶电泳或者毛细管电泳鉴定扩增产物。MLPA已经在临床微生物诊断和研究中有了一定的应用,虽然尚处于起步阶段,但因其操作简便,反应快速,高通量,高敏感性和特异性的特点,拥有良好的应用前景。     

多聚酶链反应存在的问题与解决办法

<正>将分子诊断技术用于传染病的诊断,是以鉴定病原体DNA或RNA中的特殊标记序列(SignatureSequences)为其依据。所以,如从临床标本中检出特征性的核酸,大多表示有新近感染。尽管核酸探针已被广泛用于病原体的检查,但将之作为常规检查的实验室还相当少。其主要原因是,技术要求高,难于自动化,而且常缺乏微生物学标本所需要的敏感度。故多数病原体探针仍然是用来确证培养物,所以,尚离不开原始培养。     

科学出版社生命科学编辑部新书推介

《临床微生物学手册》(ManualofClinicalMicrobiology,7thed)(上下册)[美]默里(Murray,P.R.)等著徐建国等译2005年6月出版ISBN7-03-014011-7定价:260.00元本书英文版由国际杰出的临床微生物学家编写,美国微生物学会出版,是临床微生物学领域的经典杰作。本书在第六版的基础上新增加了9个“鉴定法则”章,这些章内容涵盖病原体的基本知识(如镜下表现、基本生化反应结果)和确定性试验程序(表型试验、分子生物学诊断试验和免疫学试验)。中文版分上、下两册,共9卷,130章。为微生物学家、实验室人员、传染病专家、临床医师、医学院教师和学生提供了病原体分离、鉴定,传染病诊断,实验室安全等方面的详尽知识,包括全面开展有效实验室诊断的所需资料。在诊断和治疗的应用方面,指导临床微生物学家对试验步骤和程序进行选择、执行和解释。内容全面、新颖,可操作性强,并且通俗易懂,具有权威性。     

DNA技术与传染病的快速诊断

<正>DNA探针在最近被常规用于微生物实验室,它可使临床诊断更迅速,此技术理论简单,故有充分时理由利用此新技术。传统方法鉴定微生物如分枝杆菌、病毒、寄生虫、肺炎衣原体和其他新的生长慢的病原体(eg,Mobiluncus Curtissii)需要几周时间。探针的产生使小实验室不仅具有鉴别较广范围传染病原的能力,且可减少向中心实验室送标本的费用,而探针最大的吸引力在于能直接且准确地从临床标本中检测病原体、精确地选择抗微生物药物以减少严重传染病的死亡。     

DNA指纹技术的应用及局限性

DNA指纹图谱是一种在一单一实验中可检测出大量DNA位点差异性的分子生物学技术。自1985年Jeffeys et al,从人的肌红蛋白位点获得第一个多位点探针并用于检查人类基回的VNTRs以来,由于各种高水平探针如微卫星探针、寡聚核苷酸探针的相继问世,使DNA指纹技术在动植物科学研究、遗传疾病的诊断、基因图谱的绘制,遗传标记的寻找及法医学等方面得到广泛应用,充分表现了此技术的优越性。当然此技术还需进一步完善。     

地中海实蝇及其近缘种基因芯片检测研究

本研究选择线粒体DNA (mtDNA) 细胞色素氧化酶Ⅰ基因（COⅠ）为分子标记基因,以双翅目实蝇科昆虫DNA序列为目标,建立了我国进境植物检疫害虫地中海实蝇Ceratitis capitata、芒果小条实蝇C. cosyra和纳塔尔小条实蝇C. rosa等生物芯片检测方法。地中海实蝇及其近缘种检测芯片由检测探针（实蝇科通用探针1条,小条实蝇属通用探针1条,地中海实蝇、芒果小条实蝇和纳塔尔小条实蝇近缘种探针2条和种特异探针4条）、质控探针（定位点探针、阳性质控、阴性质控和空白对照探针各1条）组成。芯片检测结果表明,检测探针特异性强,能实现上述3种实蝇的种类快速区分和准确鉴定; 检测方法稳定性好,地中海实蝇不同虫态（卵、幼虫、蛹和成虫）和不同地理种群检测结果完全一致。地中海实蝇生物芯片检测技术将为我国进口果蔬中检疫性实蝇快速筛查和种类鉴定提供检测方法,同时,还可应用到其他属的实蝇以及相关害虫的检疫中,为有害生物的快速鉴定提供了新方法。     

环状探针技术在农业上的应用潜力

ID Biomedical公司开发了一种扩增方法。用此法可快速廉价地检测出那些需要专门鉴定的任何病原体。这一环状探针技术(CPT)是利用靶核酸片段催化探针裂解反应,使生物专一性探针转化成可检测片段。公司声称,该技术集中了其它扩增系统如PCR的所有优点。 以往的以靶为基础的扩增系统包括PCR和连接酶链反应技术尽管非常灵敏,但费用昂贵,而且在靶DNA量的定量分析,自动化检测以及防止试验携带污染等方面都存在问题。转录扩增系统如基于核酸序列的扩增系统可避免一些靶系统的热循环限制,但由于需使用几种酶,从而使其反应更为复杂化,难以实     

DNA微阵列芯片在皮肤分枝杆菌感染中的早期诊断价值

目的研究DNA微阵列芯片在皮肤分枝杆菌感染早期诊断中的临床应用价值。方法应用传统方法(包括病理学以及培养和测序鉴定)和DNA微阵列芯片技术对6例临床疑似皮肤分枝杆菌感染患者的皮肤组织进行检测。结果 6例患者的发病诱因多有海鲜接触史或外伤史,表现为单发或是呈淋巴管样排列模式;传统的细菌培养有5例患者阳性,经过测序鉴定分别为海分枝杆菌4例、龟分枝杆菌1例;DNA微阵列芯片技术检测6例患者均为阳性,其中海分枝杆菌5例,龟分枝杆菌1例;DNA微阵列芯片技术阳性率(6/6)高于传统的培养技术(5/6),此外检测时间也远低于传统培养技术。结论DNA微阵列芯片技术具有简便、快速、高敏感等特点,可鉴定皮肤分枝杆菌感染的致病菌种,为临床做出早期诊断和治疗提供依据。     

Smart Amp快速检测技术及其应用

SmartAmp是一种新的DNA等温扩增技术,具有操作简单、快速、成本低、灵敏度高、特异性强、背景低等优点。目前已在临床基因多态性检测、感染性疾病诊断等方面初步应用,为临床快速诊断提供了帮助,在食品和环境中病原体检测领域也显示了极大的应用发展潜力。我们简要概述SmartAmp技术原理、特点及其应用前景。     

通用PCR反向斑点杂交快速检测及鉴定致病性酵母菌

建立PCR结合寡核苷酸探针反向斑点杂交技术,快速检测及鉴定致病性酵母菌.将待检酵母菌种特异性寡核苷酸探针固定在尼龙膜上,然后用生物素标记的真菌通用引物扩增的各真菌DNA片段,与固定在膜上的探针杂交.结果表明所用的真菌通用引物可扩增临床常见的真菌DNA,9种特异性探针具有高度的特异性.该方法检测35例临床分离菌株,结果与常规鉴定方法一致.该技术检测时间短、操作简单、不需要特殊设备,能部分满足临床检测的通量要求.具有很好的临床应用前景.     

生殖支原体快速检测的研究进展

生殖支原体是泌尿生殖道感染疾病的重要病原体,本文阐述筛选生殖支原体的多种快速诊断方法,高敏感性和特异性的分子生物学方法有助于生殖支原体的快速诊断,这些方法包括免疫荧光显微技术、免疫印迹法、DNA探针、聚合酶链反应等。     

联合使用放射检测和核酸探针方法快速检出和鉴定致病性分枝杆菌

<正>由于与AIDS病流行有关的结核分枝杆菌和复合鸟型分枝杆菌感染的发病率骤然增加以及市政收容所中无家可归人群中结核病的大量发生,放射检测和探钟技术在分枝杆菌实验室中的应用恰好适应了这种势头。出于临床和流行病学的考虑,快速诊断和迅速投入治疗在这两类病人中是极端重要的。 最先描述分枝杆菌的放射检测技术是在1971年。使用含确~(14)C标记的棕榈酸盐液体培养基自动检出痰液中分枝杆菌报导于1977年,使用BACTEC放射检测方法从临床标本中快速检由分枝杆菌,通过大量研究已经证实。 近年来,DNA杂交技术己应用于分枝杆菌的检测与鉴定,包括特异性探针对结核分枝杆菌,鸟型分枝杆菌和细胞内分枝杆菌培养物的鉴定。 本研究讨论了两个大医院的实验室对不同病人联合使用放射检测和DNA探针分析,以求迅速检出和鉴定分枝杆菌。     

纳米孔测序技术在病毒性传染病检测及研究中的应用

快速、准确鉴定出病原体是临床感染性疾病诊断和传染病预防控制的基础。高通量测序基因检测技术突破了传统检测手段的时效性、灵敏度等的局限，为病原体检测和研究提供了便捷、高效的途径。本综述以高通量测序技术发展过程为基础，回顾纳米孔三代测序技术，及其在病毒性传染病检测鉴定及研究中的应用，并对该技术的应用前景及可能存在的问题进行阐述，期望它能在病毒性传染病的防控方面发挥更大的作用。     

(GTG)5探针产生的DNA指纹图在近交系小鼠遗传检测中的应用

目的探讨用非放射性标记的寡聚核苷酸探针(GTG)5进行近交系小鼠的DNA指纹分析。方法用非放射性标记的寡聚核苷酸探针(GTG)5制作BALB/c、C57BL/6J、DBA/2、C3H近交系小鼠的DNA指纹图,对这四个品系的小鼠进行遗传检测,分析各品系内和品系间的遗传变异性。结果(GTG)5探针可产生具有良好多态性的DNA指纹图,平均图带数为8~12条。各品系内的DNA指纹图平均相似系数(-x)在0.96~1.00的范围内,具有相同指纹图的概率(P)均在3.1×10-1以上,极显著地高于品系间的相似系数(0.22~0.39)和相同指纹图的概率(P<1.07×10-4)。结论(GTG)5可用于制作近交系小鼠的DNA指纹图以对其进行遗传检测。     

DNA探针体外标记及其应用

本文介绍了DNA探针在体外标记的几种方法,主要包括同位素标记法和非同位素标记法两大类。并介绍了标记的DNA探针在细胞原位杂交、Southern转印杂交、分子克隆筛选、核酸的分离和鉴定以及遗传性疾病的分析和诊断等方面的应用。     

肽核酸探针技术及其在微生物检测中的应用

肽核酸(Peptide Nucleic Acid,PNA)是近十几年发展起来的以中性酰胺键为骨架的脱氧核糖核酸 (Deoxyribonucleic Acid,DNA)类似物,它能够与DNA和RNA特异性地结合从而可以制备PNA探针.与 DNA探针相比,其杂交的稳定性和特异性增加且能在低盐浓度下进行杂交.因此它能够大大提高微生物学检测和医疗诊断的效率和灵敏度.PNA独特的生化属性已逐渐为世人所瞩目,PNA探针技术也得到了迅速发展,尤其是其在微生物检测领域中的应用.     

DNA探针技术在肠道细菌检定中的应用

<正>随着生物化学和分子生物学的发展,DNA探针技术应运而生。它作为一个有效的检测手段,已广泛应用于分子生物学和遗传工程中的基因检测等工作中。近年来,医学微生物工作者已将探针技术应用于致病性细菌鉴定、分类和流行病学调查等工作。本文拟就DNA探针技术在肠道细菌检定中的应用情况作一综述。     

寡核苷酸芯片在微生物检测中的应用

近几年来发展起来的基因组研究技术———基因芯片技术为微生物检测提供了一种强有力的手段。目前国内外已广泛地开展了利用寡核苷酸芯片对多种微生物 (主要是病毒和细菌 ,少量有真菌 )进行相关检测的研究 ,并在对微生物病原体检测、种类鉴定、功能基因检测、基因分型、突变检测、基因组监测等方面获得了成功。由于寡核苷酸探针具有可根据研究需要任意设计、特异性高等特点 ,寡核苷酸芯片在微生物检测中有着巨大的应用价值 ,具有广阔的应用前景。     

10月开始HCV检测用DNA探针诊断药的临床试验

第一化学药品公司从10月开始与美国 Chiron 公司共同开发的丙型肝炎病毒(HCV)检测用 DNA 探针诊断药的临床试验。HCV 检测 DNA 探针诊断药进入临床试验还是首次。进入临床的 DNA 探针诊断药采用 Chiron 公司和第一化学药品公司开发的分歧 DNA 技术。这种技术     

寡聚核苷酸探针在近交系小鼠遗传检测中的应用

用两个非放射性标记的寡聚核苷酸探针(GGAT)4和(GTG)5制作BALB/c、C57BL/6J、DBA/2、C3H等4种近交系小鼠的DNA指纹图,比较了两种探针在近交系小鼠遗传检测应用中的重复性和稳定性。结果表明,两种探针对上述4种近交系小鼠产生的DNA指纹图的图带数均为8～12条,具有良好的多态性。品系内的平均DNA指纹图相似系数(-x)在0·92～1·00的范围内,具有相同指纹图的概率(P)均在0·31以上,极显著地高于品系间的相似系数(0·22～0·39)和相同指纹图的概率(P<1·07×10-4)。说明(GGAT)4和(GTG)5两种寡聚核苷酸探针均可用于制作近交系小鼠的DNA指纹图,以对其进行遗传检测。用两种不同的探针进行DNA指纹分析,可以检出基因组中更多的个体特异性信息,结果更加可靠。