高浓度葡萄糖诱导人晶状体上皮细胞发生EMT

目的:观察高浓度葡萄糖诱导人晶状体上皮细胞发生上皮-间质转分化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)。方法:将人晶状体上皮细胞HLE-B3系分别培养在正常葡萄糖浓度(5.5 mmol/L)DMEM培养基和高浓度葡萄糖(35.5 mmol/L)的DMEM培养基中24小时,于培养的0 h、3 h、6 h、12 h、24 h在倒置显微镜下观察细胞形态学变化,采用免疫荧光染色检测晶状体上皮细胞中EMT相关蛋白E-cadherin及α-SMA的表达变化。结果:与正常糖浓度组相比,随着时间的延长高糖组细胞逐渐丢失上皮细胞形态,细胞变细、变长,向纤维细胞的形态转变;同时随着时间的延长,高糖组晶状体上皮细胞中E-cadherin染色的荧光强度在各时间点均低于正常糖浓度组,而α-SMA的荧光强度却明显高于正常糖浓度组,在6 h和12 h时差异显著,有统计学意义(P0.01)。结论:高浓度葡萄糖诱导人晶状体上皮细胞发生上皮-间质转分化。     

葛根素对腹膜透析液诱导人腹膜间皮细胞分泌TGF-β1的影响

目的:了解葛根素对腹膜透析液干预下的体外培养人腹膜间皮细胞分泌转化生长因子β1(TGF-β1)的影响.方法:体外培养的人腹膜间皮细胞,分对照组、PDS组、A组(葛根素终浓度为50μg/mL)、B组(葛根素终浓度为100μg/mL)、C组(葛根素终浓度为200μg/mL)五组观察.检测各组上清液中TGF-β1的含量并比较.结果:腹膜间皮细胞在PDS干预下,TGF-β1分泌显著增加,添加葛根素再干预的A、B、C组TGF-β1分泌与PDS组比较有显著下降.结论:葛根素对腹膜透析液诱导的腹膜间皮细胞分泌致纤维化因子TGF-β1具有抑制作用.     

高糖环境对啄鼠膀胱ICCs细胞形态及电生理的影响

目的:研究高糖环境下豚鼠膀胱Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)形态及细胞内钙离子荧光的改变,探讨糖尿病膀胱(diabetic cystopathy,DCP)的发病机制.方法:采用酶消化法原代培养,激光共聚焦技术观察5、10、15mol/L葡萄糖浓度下培养24、72h的ICCs,每浓度/时间取30个细胞测量其长度,再从中随机选10个细胞,以200ms/张图片的速度进行扫描,获得每个时间点细胞內钙离子荧光强度值.结果:糖浓度增高培养时间延长,ICCs内钙离子荧光值升高(P=0.00),只有15mol/L/24h降低(p=0.00);ICCs细胞长度缩短(P=0.00),只有10mol/L/72h细胞长度增长(P=0.00).结论:高糖环境对豚鼠膀胱ICCs形态学及电生理学造成显著影响,这种改变可能是造成DCP发病的重要原因之一.     

全反式维甲酸对SD大鼠系膜细胞株增殖和Ⅳ型胶原的影响

目的:观察全反式维甲酸(ATRA)对高糖环境大鼠肾小球系膜细胞(MCs)增殖及Ⅳ型胶原的影响.方法:以高糖(葡萄糖浓度为25mmol.1-1)刺激体外培养的大鼠MCs增殖,然后根据实验分组加入不同浓度的ATRA:对照组:5.6mmol.1-1葡萄糖+2%FBS DMEM培养基;实验组:25 mmol.1-1葡萄糖+2%FBS DMEM培养基+不同浓度的ATRA(分别为0 mol.1-1、10-8 mol.1-1、10-7mol.1-1、10-6mol.1-1,采用MTT比色法观察12、24、48h系膜细胞的增殖情况;Elisa法测定12、24、48h细胞上清液中Ⅳ型胶原的含量.结果:ATRA有抑制高糖所致的MCs增殖、减少细胞外基质(ECM)的作用,并呈剂量时间依赖性.结论:ATRA对高糖所致MCs增殖具有抑制作用,且呈剂量依赖性.     

高浓度葡萄糖对小鼠囊胚Caspase-8表达的影响

目的:探讨高浓度葡萄糖对小鼠囊胚Caspase-8表达的影响.方法:通过促超排卵,获取妊娠3.5d小鼠囊胚,随机分成三组,即对照组(空白)、低糖组(葡萄糖浓度为7.5mmol/L)和高糖组(葡萄糖浓度为28.0mmol/L),分别培养在含0、7.5mmol/L和28.0mmol/L葡萄糖的M199培养基中,培养24h后,然后再吸出囊胚.每组随机吸取30个囊胚用免疫组织化学S-P法.检测不同浓度葡萄糖对小鼠囊胚Caspase-8表达状况,利用HPIAS-1000图像分析系统测定Caspase-8在以上三组中表达的平均光密度和平均阳性面积率.结果:Caspase-8表达结果:空白组中囊胚细胞胞浆中可见少量浅棕黄色颗粒,Caspase-8表达呈弱阳性.低糖组中囊胚细胞胞浆未见着色,Caspase-8表达呈阴性.高糖组囊胚细胞胞浆中可见较多的棕黄色颗粒,Caspase-8表达呈强阳性.空白组与低糖组囊胚Caspase-8表达的阳性面积率及平均光密度无显著性差异(P>0.05),高糖组与空白组和低糖组相比均存在显著性差异(P<0.01).结论:高浓度葡萄糖可诱导Caspase-8的过度表达,导致囊胚细胞数目过度减少,从而影响囊胚的正常发育和着床.     

自噬对高糖诱导的人冠状动脉内皮细胞凋亡的保护作用

目的:研究自噬对高糖诱导的人冠状动脉内皮细胞凋亡的影响。方法:将人冠状动脉内皮细胞,分别用常规培养基(正常对照组)、含30 mmol/L D-葡萄糖的高糖培养基(高糖组)、高糖培养基合并雷帕霉素(Rapamycin,RAPA;100 nmol/L)干预(RAPA组)和高糖培养基合并3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA,5 mmol/L)干预(3-MA组)培养。利用CCK-8法检测细胞生长活力,使用流式细胞术检测细胞凋亡水平,western blot检测细胞自噬标记蛋白(Beclin1)的表达水平。结果:(1)高糖溶液刺激内皮细胞24 h后,细胞生长活力为正常组的55.0%(P0.01),自噬标记蛋白Beclin1的表达水平明显增加,凋亡水平为正常组的2.0倍;(2)与高糖组相比,RAPA组细胞生长活力明显增加,Beclin1的表达明显升高(P0.01),凋亡水平为高糖组的70.1%;(3)与高糖组相比,3-MA组细胞生长活力明显减少,Beclin1的表达明显降低(P0.01),凋亡水平为高糖组的1.42倍。结论:细胞自噬可能对高糖诱导的人冠状动脉内皮细胞具有凋亡保护作用。     

高糖腹透液通过神经酰胺经JNK/SAPK通路介导腹膜间皮细胞凋亡

目的观察葡萄糖腹膜透析液(peritoneal dialysis solution,PDS)对人腹膜间皮细胞(peritoneal mesothelium cells,PMCs)凋亡的影响,探讨神经酰胺在高糖PDS诱导的PMCs凋亡中的作用机制。方法 PMCs分别在正常对照、1.5%PDS、4.25%PDS条件下培养,以4.25%甘露醇作为高渗对照。高压液相串联质谱法(LC/MS/MS)检测细胞内神经酰胺的变化,TUNEL检测细胞凋亡,Western blot检测p-JNK、p-c-Jun、Bax、Bcl-2蛋白水平。结果 PDS呈浓度、时间依赖性上调PMCs细胞内神经酰胺,正常对照组、高渗对照组细胞内神经酰胺无明显变化;相比1.5%PDS组,4.25%PDS可诱导PMCs细胞凋亡,促进JNK及其下游c-Jun磷酸化,而酸性鞘磷脂酶抑制剂地昔帕明可显著抑制高糖PDS的此类作用;JNK阻断剂SP600125可明显抑制高糖PDS诱导的JNK和c-Jun活化、进而抑制Bax的上调和Bcl-2的下调。结论细胞内神经酰胺增加可能经JNK/SAPK通路参与高糖PDS诱导的PMCs凋亡。     

高糖诱导腹膜间皮细胞发生上皮间质转化中microRNA的异常变化

目的:定腹膜间皮细胞在高糖引起上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程中microRNA的表达差异。方法:常规培养PMC细胞,利用高糖培养液刺激诱导腹膜间皮细胞发生EMT,倒置显微镜观察各组细胞形态学变化,实时定量PCR检测EMT标志基因变化,以此确定高糖诱导EMT的发生。利用特异茎环结构的引物合成microRNA的cDNA,实时定量PCR检测重要microRNA的表达变化。结果:高糖培养液培养腹膜间皮细胞48hr后,细胞形态呈梭形改变,同时EMT标记基因E-cadherin表达明显减低(P0.01),Vimentin表达显著升高(P0.01),说明高糖诱导腹膜间皮细胞发生了EMT。利用microRNA特异的茎环结构引物,实时定量PCR检测结果发现高糖刺激后miR-193a的表达明显上调(P0.01);miR-15a和let-7e的表达明显降低(P0.01);miR-16和miR-21的表达无明显变化(P0.05),同时检测发现高糖刺激后miR-193a的表达水平随刺激时间表达升高。结论:异常变化的microRNA可能对高糖诱导的腹膜间皮细胞EMT具有重要调控作用。     

葡萄糖对ICR小鼠胚胎体外发育的影响

研究葡萄糖在小鼠早期胚胎体外发育中的作用。实验1将6—8周龄的ICR雌鼠超数排卵后与公鼠交配,收集1-细胞放入含0(对照组)、0.5、1、3、5、10mmol/L葡萄糖的CZB中培养;实验2将从超排的ICR雌鼠输卵管内收集的1-细胞放入无糖CZB中培养,分别于1细胞、2细胞、4细胞、桑椹胚阶段移入含3.0mmol/L葡萄糖(最适浓度)的CZB中,培养24h后又移回到无糖CZB中(桑椹胚阶段除外)继续培养以及整个胚胎培养过程均在含糖CZB中,对照组胚胎培养全程均在无糖CZB中。每组胚胎于37℃、5%CO2培养箱中培养120h,每24h在倒置显微镜下观察胚胎发育情况,分别计算2-细胞率、4-细胞率、桑椹胚率、囊胚率和孵化率,并进行囊胚细胞计数。结果显示,小鼠胚胎在含糖CZB中与在无糖CZB中4-细胞发育率无差异;含糖CZB中囊胚率显著高于对照组;3.0mmol/L浓度组囊胚细胞数显著高于其余组;2-细胞至4-细胞、4-细胞至桑椹胚前添加葡萄糖囊胚率显著高于对照组,1-细胞至2-细胞、桑椹胚及其以后阶段添加葡萄糖囊胚率与对照组无差异。实验证实,在ICR小鼠胚胎体外培养中加入葡萄糖不会导致2-细胞阻滞;葡萄糖浓度增至10mmol/L对ICR小鼠胚胎无毒性作用;ICR小鼠胚胎体外培养的最适葡萄糖浓度为3.0mmol/L;2-细胞至4-细胞、4-细胞至桑椹胚前添加葡萄糖是必要的。     

5-Aza-C 对鼻咽癌细胞端粒长度及细胞增殖的影响

目的：研究去甲基化药物5-氮杂胞嘧啶核苷（5-Azacytidine,5-Aza-C）对鼻咽癌细胞端粒长度及细胞生长增殖的影响。方法： 常规培养鼻咽癌CNE,CNE1,CNE2 及5-8F细胞系,5-Aza-C 处理鼻咽癌细胞后,甲基化测序聚合酶链反应(MSP)法检测亚端粒 区D4Z4 甲基化,端粒限制性片断检测端粒长度,CCK-8 检测细胞增殖。结果：2.5 uM浓度的5-Aza-C处理后,亚端粒区D4Z4 序 列的甲基化水平明显下降,约在15-20%之间,与处理前的甲基化水平（35-48%）有明显差异,差异均有统计学意义（P < 0.05)。在1 uM和2.5 uM浓度的5-Aza-C 处理后,四种细胞的端粒长度明显缩短,长度在2-4.5kb 之间,差异具有统计学意义(P < 0.05)。5uM 的5-Aza-C处理72 h 后,CNE,CNE1,CNE2 和5-8F 的生存率分别为51.27%,50.46%,48.85%,48.83%,10 uM 的5-azaC 处理72 h 后,CNE,CNE1,CNE2 和5-8F的生存率分别为31.64%,32.34%,30.01%,32.10%,与对照组比较差异有统计学意义（P<0.01）。结 论：5-Aza-C 能缩短端粒长度,抑制鼻咽癌细胞生长增殖活性。     

Peritoneal Dialysis

Three patients with chronic uremia and one patient with glutethimide intoxication were treated by peritoneal dialysis at the Prince Edward Island Hospital, Charlottetown. The procedure was discovered to be technically simple and was carried on in one instance for five days and in another for six days without undue difficulty. The dialysis was initiated by the authors on each occasion, but was carried on by graduate nurses under supervision. It is concluded that this procedure is practical and of value for use in relatively small non-teaching hospitals, provided one or more members of the medical staff become familiar with the indications, technical details and complications of the procedure.     

Peritoneal washing cytology

Peritoneal washing cytology (PWC) is a useful indicator of ovarian surface involvement and peritoneal dissemination by ovarian tumours. It may identify subclinical peritoneal spread and thus provide valuable staging and prognostic information, particularly for non-serous ovarian tumours. The role of PWC as a prognostic indicator for endometrial carcinoma is less clear, due in part to the questionable significance of identifying endometrial tumour cells in the peritoneum. Detection of metastatic carcinoma in PWC is based on the recognition of non-mesothelial cell characteristics. However a number of conditions such as reactive mesothelial cells, endometriosis and endosalpingiosis may mimic this appearance. Cells from these conditions may have a similar presentation in PWC to that of serous borderline tumours and low-grade serous carcinoma. The presence of cilia, lack of single atypical cells, prominent cytoplasmic vacuolation, marked nuclear atypia or two distinct cell populations are features favouring a benign process. Attention to these features along with close correlation with clinical history and the results of surgical pathology should help avoid errors. Additional assistance may be provided by the use of cell blocks and special stains.     

Peritoneal dialysis solutions

Certain preventable complications in the treatment of renal failure, in part related to the composition of commercially prepared peritoneal dialysis solutions, continue to occur.Solutions are advocated which would contain sodium 132, calcium 3.5, magnesium 1.5, chloride 102 and lactate or acetate 35 mEq./1., and dextrose 1.5% or about 4.25%. Elimination of 7% dextrose solutions and a reduction of the sodium and lactate concentrations should reduce complications due to hypovolemia, hyperglycemia, hypernatremia and alkalosis. Reduction in the number of solutions should simplify the procedure and perhaps reduce costs. It is anticipated that some of the changes discussed will soon be introduced by industry.