一种具有抑制糜蛋白酶活性的血清DNA结合蛋白质的纯化和理化特性

 本文采用离子交换层析,DNA亲和层析和硫酸铵盐析三步从人血清中分离纯化了一种肿瘤相关DNA结合蛋白质(64DP)。本方法较简便,产率提高。经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫电泳鉴定纯度符合要求。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定分子量为64,000。等电聚焦电泳测得等电点在4.2左右。醋酸纤维膜电泳和转移电泳表明其为一种α_1球蛋白。过碘酸西夫氏糖蛋白染色呈阳性反应。氨基酸分析和酶抑制试验证实64DP与α_1抗縻蛋白酶很相似。     

DNA与蛋白质结合的荧光测定

构建了插入λ阻抑蛋白（Ｒｅｐ）的操纵基因（ＯＲ）和ＢｇｌⅡ识别位点的ＰＢＲ３２２重组质粒。阻抑蛋白与该质粒的相互作用可用ＢｇｌⅡ对它的水解作用引起的ＥＢ荧光变化来研究。在Ｅ．ｃｏｌｉ中表达的Ｒｅｐ表现了与该重组质粒结合的活力。核苷酸序列具精确二重对称性的ＯＲ（ＯＲｃｏｎｓ）对Ｒｅｐ的亲和力比天然的ＯＲ１小。     

dsDNA芯片的DNA结合蛋白质计算机模拟系统

dsDNA芯片(double-stranded DNA microarray)是用于DNA结合蛋白质表达研究的新技术,应用一种新的dsDNA芯片制作方法,研究了dsDNA探针设计,开发了相应的计算机模拟系统—DBP软件。可实现芯片上dsDNA探针的选取以及DNA结合蛋白质检测的实验过程模拟,功能包括模拟酶切、模拟电泳、模拟杂交等实验环节。DBP系统包括了可以不断完善的DNA结合蛋白质数据库。对研究dsDNA芯片,检测和分析在生物 体中DNA结合蛋白质的表达谱,揭示细胞的分化和凋亡、信号转导、DNA转录调控的分子机制有重要意义。     

体内甲醛交联及染色质免疫沉淀--研究DNA和蛋白质作用的新方法

甲醛交联及染色质免疫沉淀作用研究体内DNA和蛋白质相互作用的一种新方法,在染色质结构研究中获得了广泛的应用。该方法利用甲醛固定活细胞中的DNA与蛋白质,通过免疫沉淀分离复合物,从而分析蛋白质及其体内的DNA结合序列。     

不同方法检测血清HBV DNA的比较研究

采用夹心斑点杂交法、PCR-EB定性及Amp-lisensor定量法对HBsAg与抗-HBs同时阳性、HBsAg阳性、抗-HBs阳性和HBsAg与抗-HBs均阴性的乙型肝炎病毒(HBV)感染者检测血清HBV DNA.结果三种方法的阳性率分别为29.1%、47.7%和80.2%;各组HBV DNA含量分别是106.13±1.86、106.08±1.82、104.12±1.40和105.07±1.21(拷贝/ml).结论是Amplisensor法检测HBV DNA具有更高的敏感性;抗-HBs阳性的HBV感染者血清中仍可检出HBV DNA.     

反平行β－折叠──蛋白质与DNA结合的新模式

反平行β－折叠──蛋白质与ＤＮＡ结合的新模式史永昶（扬州大学农学院生化教研室,扬州２２５００９）关键词蛋白质－ＤＮＡ结合模式,反平行β－折叠,阻遏蛋白,ＨＵ蛋白蛋白质与ＤＮＡ的相互作用涉及发生在细胞中的许多基本过程,尤其与基因表达和细胞分化密切相关。...     

DNA及其蛋白质复合体的电镜观察及研究应用

对生物大分子形状的正确了解有助于对其功能的解析。事实上,借助于电子显微镜观察法,使我们在对构成细胞各组分功能的探讨和研究方面收益匪浅。自从生物这家们认识到ＤＮＡ在细胞行使其功能中的重要性以来,电子显微镜便成为一种最重要的技术手段而被用于分析ＤＮＡ的结构,研究ＤＮＡ的复制、重组和转录机制。近年来,这一领域的研究技术又有了非常大的改进,使人们已经能够借助于电子显微镜,观察介入ＤＮＡ复制、重组和转录等过程中的ＤＮＡ－蛋白质复合体的活体状态。今后,在对生物大分子的活体行为进行探讨时,电子显微镜技术将发挥越来越重要的作用。     

《癌症患者血清DNA结合蛋白质总量的改变》

<正> 血清中有一小部分蛋白质在体外能与DNA结合,被称为血清DNA结合蛋白质(以下简称DBP),其组成与生物学意义目前尚未完至明了。1975年Hoch等人报道肿瘤患者有一种血清DBP的含量增高,引起人们注意。此后就血清DBP与肿瘤的关系作了进一步探讨,发现若干种血清DBP的水平在肿瘤中有变化。其表现虽不一致,但似乎与肿瘤的类别无明显关系。这种现象在本实验室对患癌小鼠的血清DBP的研究中也得到了证实。 关于肿瘤患者血清DBP总量的变化,目前尚未见到报道。本文报道了恶性肿瘤患者和正常人血清DBP总量的测定及其比较。     

妊娠过程中血清蛋白的动态变化

利用聚丙烯酰胺凝胶(PAG)电泳分离技术对266份不同孕期的正常孕妇和妊娠高血压综合征病人的血清蛋白电泳图谱进行了分析。在266份图谱中发现41个染色深度有变化的组分,代表血清蛋白含量的变化。在正常中期妊娠电泳图谱中少数呈1个或2个“V”形异常成分位于P区或O段、M段,其意义尚难肯定。在妊娠高血压综合征病例中没有发现特异性异常蛋白,但血清前白蛋白、白蛋白减少与T-77组分增多和同期正常孕妇相比有显著差异(p<0.05)。     

A PHASE RULE STUDY OF THE PROTEINS OF THE BLOOD SERUM: A COMPARISON OF THE PROTEINS OF HUMAN,RAT, AND HORSE SERUM

There are four different kinds of protein in blood serum as shown by the solubility curves. They must be either single proteins, several continuous series of compounds, or solid solutions. The solid protein phases are hydrated. There are definite sex and species differences.     

黄鳝性别的自然反转现象与血清蛋白关系的初步研究

实验采用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法,对49条黄鳝的血清蛋白进行了分析,实验结果表明雌、雄黄鳝随着性腺的发育,血清蛋白组分有所增加,雌鱼性腺Ⅲ—Ⅳ期为10—11条区带。雄鱼性腺Ⅰ到Ⅳ期为11—14条区带。性别反转的黄鳝血清蛋白的区带数明显增加,分析结果为20条区带,经CS-910薄层色谱扫描具有较多的吸收峰,极为有趣的是性别反转的黄鳝血清蛋白在凝胶负极一端的大分子脂蛋白和中等分子的球蛋白组分发生了很大的变化。而正极分子较小的白蛋白组分仍保持着雌鱼血清蛋白的吸收峰,因此作者认为黄鳝性别反转作用可能与血清蛋白中较大分子组分的增加有关。     

人和猴T淋巴细胞表面TRBC受体和E受体的比较研究

TRBC受体不同于已知的全T细胞表面分化抗原CD2,CD3/TCR复合物,CD5,CD6和CD7。CD2分子不参与TRBC玫瑰花结的形成,也不是介导E花结的唯一分子。至少有两个或两个以上蛋白质与TRBC玫瑰花结和E花结的形成有关,其中有的分子为E受体和TRBC受体所共有。因此,很可能有不同于CD2的分子参与了TRBC玫瑰花结的形成。     

雌核发育银鲫和两性生殖彩鲫精子蛋白组份的比较研究

对雌核发育银鲫和两性融合彩鲫精子蛋白组份进行了比较分析。通过分级抽提得到精子的不同组份精浆、精头的膜、鞭毛和脱膜精头等,然后经不同的凝胶电泳系统,比较分析了银鲫精子和其两性亲缘种彩鲫精子相应组份可溶性蛋白成份的差异。研究表明,经分级抽提的银鲫精子和彩鲫精子的各个组份都含有其特定的蛋白谱带。精浆蛋白在两种鱼之间和两种鱼的不同个体之间都存在一定差异。精头膜、鞭毛和脱膜精头的可溶性蛋白在同种鱼不同个体间高度一致,但在两种鱼之间表现出差异。两种鱼精头膜的可溶性蛋白在SDS－PAGE电泳图谱上基本一致,而在非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱上则具有各自的特征性谱带。鞭毛可溶性蛋白的SDS－PAGE分析在雌核发育银鲫中揭示出一条特异的蛋白带。脱膜精头的可溶性蛋白在SDS－PAGE电泳图谱上差异明显,存在几条特征性蛋白带,并经Acid-Urea PAGE系统分析,证实这些特征性蛋白为碱性蛋白。这些发现为进一步鉴定雌核发育银鲫雄鱼精子的特异性蛋白和揭示其分子机制打下了基础。     

小鼠胚胎组织、成体组织和胚胎癌细胞酯酶同功酶谱的比较研究

本文比较了129品系小鼠几种胚胎组织及其相应的成体组织的酯酶同功酶谱。几种胚胎组织都可检测到共同的具有相同迁移率的C区酶带和E区酶带。在这些胚胎组织的功能发育过程中,C区酶带被其它区带所取代;E区酶带在成体组织中有的活性降低,有的完全消失。从这些比较分析中可以观察到酯酶同功酶从“胚胎型”向“成体型”的转变。与这些结果相对应,F9-1和B7-2胚胎癌细胞克隆株及来源于早期胚胎细胞的细胞系细胞也都具有酯酶C和E的活性。     

不同籼稻品种的矮生性与内源ABA水平及其结合蛋白的关系

试验研究了内源脱落酸及其结合蛋白与含有不同矮秆主基因的籼稻矮生性状的关系。结果表明：籼稻的矮生性也受内源ＡＢＡ及其结合蛋白协同调控。矮秆品种幼苗内源ＡＢＡ及其幼芽膜上ＡＢＡ结合蛋白水平显著高于离秆品种,且含有强矮化效应的ｓｄ－ｇ基因的新桂矮、双矮的内源ＡＢＡ及其结合蛋白水平又明显高于含ｓｄ－１半矮秆基因的广场矮。外源ＡＢＡ能显著抑制籼稻幼苗伸长,苗高下降率与ＡＢＡ结合蛋白水平有一定的关系,且矮秆品     

人正常软骨和软骨肉瘤蛋白多糖的比较研究

取三例一般型一级的软骨肉瘤及不同年令正常人股骨头关节软骨,经4mol/L盐酸胍提取和氯化铯平衡等密度梯度离心,分析蛋白多糖组份的化学组成,并用Sepharose CL-2B层析分析蛋白多糖分子大小。初步结果,两例软骨肉瘤蛋白多糖的化学组成和分子大小与新生儿接近,另一例软骨肉瘤蛋白多糖的化学组成和分子大小与成年人相似。此结果说明软骨肉瘤生物学行为的多变性及其蛋白多糖的异质性。