双歧杆菌的完整肽聚糖对巨噬细胞NF-kB的影响

目的从NF-kb角度探索分叉双歧杆菌的完整肽聚糖（WPG）激活巨噬细胞的信号机制.方法首先分离培养SD大鼠腹腔巨噬细胞,然后以不同浓度的WPG刺激巨噬细胞,最后采用凝胶电泳迁移分析技术检测巨噬细胞NF-kb的DNA结合活性.结果分叉双歧杆菌的WPG作用于巨噬细胞后,其NF-kB的DNA结合活性明显高于对照组（P＜0.01）.结论分叉双歧杆菌的WPG能活化巨噬细胞的NF-kb.     

双歧杆菌的完整肽聚糖对大鼠腹腔巨噬细胞TNF-α表达的影响

目的探索双歧双歧杆菌的完整肽聚糖(WPG)对大鼠腹腔巨噬细胞TNF-α的调控作用。方法以WPG刺激大鼠腹腔巨噬细胞;或以NF-κB的抑制剂NAC和ERK抑制剂PD98059分别预先孵育巨噬细胞,再用WPG刺激巨噬细胞,最后用RT-PCR检测巨噬细胞TNF-αmRNA的表达水平。结果 WPG刺激巨噬细胞后,其TNF-αmRNA的表达水平显著高于对照组(P0.01)。但经NAC和PD98059分别预先孵育巨噬细胞后,其TNF-αmRNA的表达水平均明显低于WPG刺激组(P0.01)。结论双歧双歧杆菌的WPG能上调巨噬细胞TNF-αmRNA的表达,这一过程受NF-κB和ERK的调控。     

双歧杆菌的完整肽聚糖对小鼠腹腔巨噬细胞细胞骨架的影响

目的探讨双歧双歧杆菌的完整肽聚糖（WPG）对巨噬细胞细胞骨架的影响。方法首先分离培养昆明小鼠腹腔巨噬细胞,然后以WPG刺激巨噬细胞后,用荧光标记的鬼笔环肽染液染色,最后采用激光共聚焦显微镜技术检测巨噬细胞的细胞骨架。结果和对照组相比,WPG刺激巨噬细胞后,其胞内肌动蛋白减少且排列更加紊乱,同时胞膜荧光强度减弱,胞外放射状荧光物质减少,甚至消失。结论双歧双歧杆菌的WPG在激活巨噬细胞的过程中可影响其细胞骨架。     

双歧杆菌的完整肽聚糖对巨噬细胞产生IL-18的影响

目的探讨分叉双歧杆菌的完整肽聚糖对巨噬细胞功能的调节作用.方法以完整肽聚糖注射于小鼠腹腔,用ELISA法测定小鼠腹腔巨噬细胞产生的IL-18的含量.结果完整肽聚糖注射组小鼠腹腔巨噬细胞产生的IL-18的含量显著高于对照组(P＜0.01).结论分叉双歧杆菌的完整肽聚糖能激活巨噬细胞,并使之分泌多量的IL-18.     

双歧杆菌的完整肽聚糖对小鼠腹腔巨噬细胞膜脂流动性的影响

目的探讨分叉双歧杆菌的完整肽聚糖（WPG）对巨噬细胞膜脂流动性的影响。方法首先分离培养昆明小鼠腹腔巨噬细胞,然后以WPG刺激巨噬细胞,再用细胞膜磷脂荧光探针标记细胞,最后采用激光共聚焦显微镜结合激光漂白后荧光恢复技术检测巨噬细胞的膜脂流动性。结果WPG刺激组反映小鼠腹腔巨噬细胞膜脂流动性的平均荧光恢复率明显高于对照组（P〈0.01）。结论分叉双歧杆菌的完整肽聚糖可提高巨噬细胞膜脂流动性。     

双歧杆菌的完整肽聚糖对小鼠腹腔巨噬细胞缝隙链接的影响

目的探讨双歧杆菌的完整肽聚糖（WPG）对巨噬细胞缝隙连接介导的细胞间通讯（GJIC）的影响。方法首先分离培养昆明小鼠腹腔巨噬细胞,然后以WPG刺激巨噬细胞,再用脂荧光探针标记细胞,最后采用激光共聚焦显微镜结合激光漂白后荧光恢复技术检测反映GJIC变化的荧光恢复程度。结果和对照组相比,以WPG刺激巨噬细胞后,其GJIC的平均荧光恢复率明显增加（P〈0.01）。结论双歧杆菌的WPG可提高巨噬细胞的缝隙连接介导的细胞间通讯。     

长双歧杆菌完整肽聚糖对小鼠免疫功能的影响

目的比较长双歧杆菌及其完整肽聚糖的免疫调节作用。方法通过研究长双歧杆菌完整肽聚糖对植瘤小鼠淋巴细胞的转化、抑瘤率、生命延长期以及对细胞Bcl-2和Bax表达的影响来探讨它们对小鼠细胞免疫的调节作用。结果与对照组相比,完整肽聚糖使淋巴细胞转化增加、抑瘤率提高、延长生命期增加、Bcl-2阳性表达率减小而Bax基因表达增加。结论长双歧杆菌与其完整肽聚糖均有抑制S180肿瘤的作用,但完整肽聚糖的效果优于长双歧杆菌。     

双歧杆菌的完整肽聚糖对实验性大肠癌凋亡控制基因表达的影响

为探讨双歧杆菌的完整肽聚糖的抑瘤途径及机制,本文以大肠癌裸鼠移植瘤为动物模型,采用免疫组化ＳＰ法检测了４０只裸鼠移植瘤ｂｃｌ－２及ｂａｘ基因的蛋白表达率及表达强度,结果显示肽聚糖注射组大肠癌移植瘤ｂｃｌ－２蛋白表达率及阳性细胞密度低于肿瘤对照组,ｂｃｘ基因的表达情况则相反。提示双歧杆菌的完整肽聚糖可使大肠癌裸鼠移植瘤的ｂｃｌ－２基因表达下调,ｂａｘ基因表达强,最终诱导肿瘤细胞凋亡,实现其抗瘤目的。     

双歧杆菌的完整肽聚糖对实验性大肠癌凋亡调控基因表达的影响

为探讨双歧杆菌的完整肽聚糖的抑瘤途径及机制,本文以大肠癌裸鼠移植瘤为动物模型,采用免疫组化ＳＰ法检测了４０只裸鼠移植瘤ｂｃｌ－２及ｂａｘ基因的蛋白表达率及表达强度。结果显示完整肽聚糖注射组大肠癌移植瘤ｂｃｌ－２蛋白表达率及阳性细胞密度均低于肿瘤对照组,ｂａｘ基因的表达情况则相反。提示双歧杆菌的完整肽聚糖可使大肠癌裸鼠移植瘤的ｂｃｌ－２基因表达下调,ｂａｘ基因表达增强,最终诱导肿瘤细胞凋亡,实现其抗瘤目的。     

双歧杆菌的完整肽聚糖对实验性大肠癌诱导型一氧化氮合酶表达的影响

建立大肠癌裸鼠移植瘤模型,以免疫组化法观察大肠癌移植瘤一氧化氮合酶（iNOS）基因的蛋白表达水平,结果显示完整肽聚糖（Whole peptidoglycan,WPG）注射组大肠癌移植瘤iNOS蛋白的表达率、表达强度以及阳性细胞密度均明显高于肿瘤对照组（P＜0.01）,提示分叉双歧杆菌的WPG能增强大肠癌移植瘤细胞iNOS基因的蛋白表达,这可能是其抑瘤机制之一。     

双歧杆菌完整肽聚糖对脐血来源树突状细胞分化成熟的影响

目的研究两歧双歧杆菌完整肽聚糖（WPG）对脐血来源树突状细胞（DC）形态及分泌细胞因子的影响,了解双歧杆菌WPG对DC分化、成熟及免疫调节功能的作用;并为益生菌及其生物活性成分的进一步开发提供依据。方法分离正常孕妇脐血单个核细胞诱导生成未成熟树突状细胞（Dendritic cells,DCs）,实验组在培养的第7天分别加入两歧双歧杆菌WPG（5μg／ml）、两歧双歧杆菌全菌（100μg/ml）,阳性对照组加入脂多糖（LPS）,阴性对照组仅加入培养基。倒置显微镜在培养各期形态学观察,流式细胞术检测表面标志物CD83及CD1a的表达,NLR检测DCs刺激同种异体T淋巴细胞能力,ELISA法测定DCs培养上清中IL-12p70、IL-10的分泌。结果脐血单核细胞在双歧杆菌WPG与GM-CSF、IL-4协同诱导作用下,能成为形态上具有典型树突状突起的DCs;诱导后的CB-MDDCs刺激同种异体T细胞的增殖能力及分泌IL-12：p70、IL-10的水平显著高于阴性对照组（P〈0．01）且细胞表面标志物CD83及CD1a的表达增加。结论（1）双歧杆菌WPG能影响CB-MDDCs的成熟状态。（2）双歧杆菌WPG对CB-MDDCs成熟程度及分泌细胞因子水平的影响强于双歧杆菌全菌,说明WPG是双歧杆菌主要免疫活性成分。     

双歧杆菌及其完整肽聚糖对脐血来源树突状细胞分泌IL-12的影响

目的探讨两歧双歧杆菌和不同剂量双歧杆菌的完整肽聚糖（WPG）对脐血来源树突状细胞（DC）分泌IL-12的影响。方法以双歧杆菌全菌（量）和不同剂量双歧杆菌WPG（1-8μg/ml）与脐血来源树突状细胞共培养,用ELISA的方法测定培养上清中IL-12的量。结果双歧杆菌和其WPG（1-6μg/ml）与树突状细胞共培养后,树突状细胞分泌的IL-12的量显著高于阴性对照组（P〈0.01）,当WPG量为1-5μg/ml时树突状细胞分泌的IL-12的量呈剂量依赖性,其中WPG量为5μg/ml时作用最为显著,WPG量为6μg/ml时分泌IL-12量减少,WPG量为8μg/ml时,分泌的IL-12量与阴性对照组差异无显著性（P〉0.05）。结论两歧双歧杆菌及其WPG能够刺激脐血来源的树突状细胞IL-12分泌;双歧杆菌WPG的免疫刺激作用呈一定的量效关系     

双歧杆菌WPG对正常和哮喘模型小鼠骨髓来源树突状细胞分泌细胞因子的影响

目的研究双歧杆菌完整肽聚糖(WPG)对正常和哮喘模型小鼠骨髓来源树突状细胞(DC)分泌细胞因子的影响,探讨双歧杆菌WPG在防治过敏性疾病中的免疫调节作用。方法分离正常及哮喘模型小鼠骨髓单个核细胞,诱导生成未成熟DC,在培养的第7天将细胞分为WPG组、阳性组,其中WPG组每毫升培养液中加入双歧杆菌WPG 5μg,阳性组每毫升培养液中加入脂多糖(LPS)1μg,ELISA法检测DC培养上清中IL-12及IL-10的水平。结果正常小鼠WPG组DC分泌的IL-12、IL-10的量低于阳性组,哮喘小鼠WPG组DC分泌IL-12、IL-10的量高于阳性组,差异均具有统计学意义(P0.05);哮喘小鼠WPG组、阳性组DC分泌IL-12、IL-10的量分别低于正常小鼠WPG组、阳性组,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论双歧杆菌WPG对具有功能缺陷的哮喘小鼠DC功能有一定调节作用,但其调节作用有一定限度,不能使细胞功能完全恢复到正常时的水平。     

双歧杆菌完整肽聚糖对小鼠骨髓来源树突状细胞分泌IL-12的影响

目的探讨相同剂量双歧杆菌完整肽聚糖（WPG）在不同时间对小鼠骨髓来源树突状细胞分泌IL-12的影响。方法将双歧杆菌WPG与小鼠骨髓来源树突状细胞共培养,分别在加入WPG后0、12、24、36、48和60h收集培养上清液,用ELISA法测定不同时间点上清液中IL-12的量。结果双歧杆菌WPG与树突状细胞共培养后,上清液中IL-12的量在24h内逐渐升高,至24h达高峰,24h后呈下降趋势;同0h组比较,12、24和36h组IL-12分泌量明显增加（P〈0.05）,而48、60h组同0h组比较差异无显著性（P〉0.05）。结论双歧杆菌WPG能够刺激小鼠骨髓来源的树突状细胞分泌IL-12;双歧杆菌WPG对树突状细胞的免疫刺激存在时间效应关系。