用膨化柱填料的方法从红藻中规模分离纯化R-藻红蛋白(英)

以Phenyl_sepharose作为柱填料 ,用streamline柱层析技术从红藻 (Palmariapalmata (Lannaeus)Kuntze)中规模分离捕光色素蛋白———R_藻红蛋白。由于不是传统的从层析柱上方进样 ,而是用泵将样品从streamline层析柱的下方加样 (从下至上 ) ,因而解决了用一般层析柱分离R_藻红蛋白时海藻抽提液中大量的粘性多糖堵塞层析柱的难题。用P .palmata粗提液上样后 ,分别用 0 .2mol/L、0 .1mol/L和 0 .0 5mol/L的 (NH4) 2 SO4溶液从相反的方向 (即从上到下 )洗脱层析柱 ,发现这些洗脱液中的藻红蛋白纯度已经较高。然后将洗脱液透析去盐 ,用阴离子交换柱层析 (Q_sepharose)进一步纯化。经过这两次柱层析后 ,R_藻红蛋白的纯度 (OD565/OD2 80 )超过 3.5 ,高于一般认可的R_藻红蛋白的纯度标准 3.2 ;产率为每克冷冻P .palmata可纯化 0 .12 2mg高纯度的R_藻红蛋白 ,比使用一般分离方法的产率要高 10倍。这些结果表明 ,使用本文报道的方法纯化藻红蛋白 ,将会使作为生化检测试剂的藻红蛋白市场价格大幅度下降。     

用膨化柱填料的方法从红藻中规模分离纯化R—藻红蛋白

以Phenyl-sepharose作为柱填料,用streamline柱层析技术从红藻（Palmaria palmata(Lannaeus)Kuntze）中规模分离捕光色素蛋白-R-藻红蛋白。由于不是传统的从层析柱上方进样,而是用泵将样品从streamline层析柱的下方加样（从下至上）,因而解决了用一般层析柱分离R-藻红蛋白时海藻抽提液中大量的粘性多糖堵塞层析柱的难题。用P.palmata粗提液上样后,分别用0.2mol/L、0.1mol/L和0.05mol/L的（NH4）2SO4溶液从相反的方向（即从上到下）洗脱层析柱,发现这些洗脱液中的藻红蛋白纯度已经较高。然后将洗脱液透析去盐,用阴离子交换柱层析（Q-sepharose）进一步纯化。经过这两次柱层析后,R-藻红蛋白的纯度（OD565/OD280）超过3.5,高于一般认可的R-藻红蛋白的纯度标准3.2;产率为每克冷冻P.palmata可纯化0.122mg高纯度的R-藻红蛋白,比使用一般分离方法的产率要高10倍,这些结果表明,使用本报道的方法纯化藻红蛋白,将会使作为生化检测试剂的藻红蛋白市场价格大幅度下降。     

Rhodosorus mairinus中藻红蛋白的纯化及其性质的研究

从Ｒｈｏｄｏｓｏｒｕｓ ｍａｒｉｎｕｓ中提取了藻红蛋白,通过改进纯化方法,得到了三种电泳纯的藻红蛋白：Ｂ－型藻红蛋白１,Ｂ－型藻红蛋白２和ｂ－型藻红蛋白（以下简称Ｂ－ＰＥ１,Ｂ－ＰＥ２和ｂ－ＰＥ）。分别测定这三种藻红蛋白聚合体和亚单位的分子量。测定了它们的可见光的吸收光谱和荧光光谱。两种Ｂ－ＰＥ的可见光的吸收光谱比ｂ－ＰＥ的多一个４９８ｎｍ的吸收峰,三种藻红蛋白的氨基酸组成以酸性氨基酸和疏水性氨基     

R-藻红蛋白的结构、功能及其应用

R-藻红蛋白是最重要类型的藻红蛋白,为许多藻类的前级捕光色素蛋白,在光的激发下,能发出桔红色荧光。现对R-藻红蛋白的三维结构与功能的关系、R-藻红蛋白离体的光学活性在肿瘤光动力学治疗(PDT)中作为光敏剂和荧光免疫检测等领域作为荧光探针分子的应用进行综述。     

两种不同红藻的R—藻红蛋白激发强度相关的皮秒（10^…

本文研究了分别从红藻多管藻和条斑紫菜中提取的两种不同光谱类型的Ｒ－藻红蛋白Ｒ－ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ激发强度相关的皮秒（１０＾－１２秒）荧光衰减动力学过程。结果发现：随激光强增大,单重态－单重态激子湮灭发生（其衰减过程约为６０－８０皮秒）,并引起荧光量子产率下降。这两种Ｒ－藻红蛋白在相同光强激发下,表现出不同的单重态－单重态激子湮灭过程,主要因它们处于激发态的发色团数目不同所致。     

几种海洋红藻中的R—藻红蛋白对胰鸟素抗体的免疫反…

本文利用点免疫结合测定法研究了条斑紫菜,红毛菜,多管藻,海萝和江蓠中两种不同分子量的Ｒ－和ｒ－藻红蛋白（ＰＥ）对胰岛素抗体的免疫反应性。这５种红藻中的Ｒ－藻红蛋白都可用蔗糖密度线性梯度超速离心法,得到分子量不同的两种Ｒ－ＰＥ。它们与胰岛素抗体都发生免疫结合反应,但用反射扫描色谱测定,在抗原量相同的比较实验中,反映它们免疫结合反应的棕色斑点的扫描峰面积有所不同。即它们与胰岛素抗体的结合率不同,其中海     

珊瑚藻R-藻红蛋白γ亚基基因的克隆

根据珊瑚藻(Corallina afficinalis L.)R-藻红蛋白γ亚基N末端部分氨基酸序列(P83592)设计简并引物,结合RACE方法,扩增获得g亚基的全长cDNA序列.结果表明,序列全长为2 308 bp(AY209894),5'非编码区长1 203bp,3'非编码区长145 bp,编码区长960 bp,编码320个氨基酸组成的前体,包含71个氨基酸构成的信号肽和249个氨基酸组成的成熟蛋白.成熟蛋白序列内部存在重复序列与前人的报道一致.珊瑚藻亚基cDNA序列不同克隆子的测序结果表明,g亚基cDNA序列存在不同的3'末端,说明该基因可能存在多个拷贝或存在转录后加工.此外,扩增获得g亚基DNA序列(AY308999),比较表明编码区内部没有内含子存在.本文是对珊瑚藻R-藻红蛋白g亚基基因序列的首次报道.     

海洋红藻多管藻R—藻红蛋白的体外聚集特性

将海洋红藻R 藻红蛋白 (R PE)吸附到刚揭开的高定向石墨 (HOPG)表面上 ,然后用扫描隧道显微镜 (STM)在纳米尺度上进行直接观察 ,发现纯化的R 藻红蛋白在体外自然聚集时 ,能够“面对面”的聚集在一起 ,形成非常规则的类似藻胆体的杆状结构。将R PE溶于 2 %酒精 /水的混合液中 ,然后滴加于空气 /水界面上 ,具有很好的成膜性能。STM观察结果表明 ,R PE的分子在Langmuir Blodgett膜中的排列方式与其在自然状态下的聚集方式类似 ,圆盘状的R PE分子面对面的聚集在一起形成类似藻胆体的杆状结构 ,这些“杆”状结构进一步聚集在一起形成膜。以上结果表明 ,藻胆蛋白分子在体内以藻胆体的形式存在 ,除了连接肽的作用之外 ,藻胆蛋白自身的结构特性而导致的分子与分子之间的相互作用 ,在藻胆体的组装过程中也起着重要的作用     

B-藻红蛋白和R-藻红蛋白γ亚基的分离、特性及其在分子中的空间位置分析

紫球藻 (Porphyridiumcruentum)B 藻红蛋白和多管藻 (Polysiphoniaurceo lata)R -藻红蛋白经蛋白酶K部分酶切消化后 ,分离得到近似天然态的γ亚基 ,并且对它的光谱特性以及在藻红蛋白分子中的空间位置进行了研究 .酶解动力学分析表明γ亚基位于R- 藻红蛋白和B -藻红蛋白六聚体 (αβ) ₆的中央空洞中 .分离的γ亚基上藻红胆素的吸收峰位于 5 89nm ,荧光发射峰位于 6 2 0nm ,与藻蓝蛋白的吸收峰重叠 ,有助于藻胆体中藻红蛋白与藻蓝蛋白分子间高效能量传递 .     

加拿大-西北大西洋地区掌形藻的种群遗传结构与动态变化

探讨古气候波动(如更新世末期冰期)对典型生物的时空分布和有效种群大小变动的影响是生物地理学和进化遗传学的重要研究课题.本文利用线粒体cox2-3序列和RAPD两种分子标记,对分布于加拿大-西北大西洋地区8个地点(共138个个体)的掌形藻(Palmaria palmata)进行谱系地理学研究,试图阐明当更新世冰期来临时掌形藻如何衍生出适应性的进化机制,并形成当前的地理分布格局.结果表明,线粒体cox2-3间区序列共检测出11个单倍型,其中1个单倍型(C3)在所有种群中都有分布,并位于星状基因谱系的中心位置,可认为是祖先单倍型.St.Lawrence湾内北部的两个种群多样性最高,与其他地理种群分化最明显,这与基于RAPD数据的STRUCTURE聚类分析结果相一致.根据掌形藻遗传多样性及其单倍型谱系结构特征,推测掌形藻在加拿大-西北大西洋沿岸存在多个冰期避难所.分子多态性分析(AMOVA)显示掌形藻的遗传变异主要来自种群内,而St.Lawrence湾和Fundy湾群组间的遗传变异较小.cox2-3序列的Bayesian skyline plots分析结果反映出掌形藻种群在加拿大-西北大西洋沿岸经历了轻微的种群扩张,时间大概在0.18-0.13百万年前.St.Lawrence湾和Fundy湾群组间的K2P遗传距离为0.2％,相应的分化时间大约在0.36百万年前.由此推测,更新世末期的冰期及间冰期是影响掌形藻种群结构及变动的重要古气候环境因子.     

The origin of red algae and cryptomonad nucleomorphs: A comparative phylogeny based on small and large subunit rRNA sequences of Palmaria palmata, Gracilaria verrucosa, and the Guillardia theta nucleomorph

The complete large subunit rRNA sequences from the red algae Palmaria palmata and Gracilaria verrucosa, and from the nucleomorph of the cryptomonad Guillardia theta, were determined in order to assess their phylogenetic relationships relative to each other and to other eukaryotes. Neighbor-joining, maximum-parsimony, and maximum-likelihood trees were constructed on the basis of small subunit rRNA, large subunit rRNA, and a combination of both molecules. Our results support the hypothesis that the cryptomonad plastid is derived from a primitive red alga, in that an ancient common ancestor of rhodophytes and cryptomonad nucleomorphs is indicated. This cluster shows some affinity with chlorobionts, which could point to a monophyletic origin of green and red plastids. However, the exact branching order of the crown eukaryotes remains uncertain and further research is required.     

Isolation and partial characterization of latex lectins from three species of the genus Euphorbia (Euphorbiaceae)

Three N-acetylgalactosamine-specific lectins were isolated from the latices of Euphorbia calcina L., Euphorbia dalberi L. and Euphorbia sp. (an undetermined species) by affinity chromatography on fetuin-agarose. They are all glycoproteins [about 12.5% (w/w) carbohydrate] of M, around 140 000 and appear to be tetrameric molecules composed of different subunits. All three lectins have similar amino acid (with high contents of asparagine/aspartic acid, giycine and leucine) and carbohydrate (with glucosamine, mannose.) fucose and xylose) compositions. In addition. they are closely related serologically.     

发菜藻蓝蛋白分离纯化的研究

以发菜为材料,比较了提取液类型和饱和硫酸铵浓度对藻蓝蛋白提取的影响,并对藻蓝蛋白的提取程序和部分特性进行了研究。结果表明:50 mmol/L KP缓冲液(pH值7.2)是合适的提取液,体积分数为40%~50%饱和硫酸铵盐析效果优于其它浓度。经过DEAE-Toyopeal 650 S离子交换层析和SuperdexTM200凝胶过滤层析后,藻蓝蛋白纯度达6.2,最大吸收峰位于615 nm,荧光发射峰位于649 nm,由α和β2个亚基组成,其分子质量分别为18 051.17和19 142.27 Da。因此,发菜藻蓝蛋白分离纯化较为理想的程序为:藻粉→50 mmol/L KP缓冲液(pH值7.2)浸泡→French pressure(1 500 kg/cm2)破碎细胞→40%~50%饱和硫酸铵盐析→DEAE-Toyopeal 650 S离子交换层析→SuperdexTM200凝胶过滤层析→较纯的藻蓝蛋白。     

超滤膜分离纯化珊瑚藻溴过氧化物酶

利用超滤膜对珊瑚藻中溴过氧化物酶(EC 1.11.1.18,分子质量740kDa)进行分离纯化,对膜的截留分子质量、操作压力、起始蛋白质浓度、搅拌速率、pH、离子强度等条件进行了优化。超滤分离纯化最优条件为:截留分子质量为100kDa的聚偏氟乙烯(PVDF)膜,操作压力为0.02MPa,搅拌速率为600r/min,起始蛋白质浓度为0.1g/L,pH=6.0。对粗酶液先进行热沉淀纯化,再进行超滤纯化,溴过氧化物酶被纯化了21倍,比活为212U/mg,酶活回收率为96%。     

天然茄子皮红色素分离纯化的动态吸附参数研究

运用静态吸附与解吸试验对5种大孔吸附树脂进行了筛选,通过单因素试验、正交试验确定了大孔树脂吸附茄子皮红色素的最佳操作条件.结果表明,HPD-100树脂对茄子皮红色素的吸附和解吸性能较好;最佳吸附条件为A2B2C2,即料液浓度(以吸光度计)为0.435 Abs,上柱速率为3.0 BV/h,pH值为2.53.     

地木耳多糖的提取与纯化研究

对地木耳采用水提醇沉法获得的地木耳多糖粗提取物,采用Sevage法脱蛋白质、醇沉,干燥得粗多糖,进一步用DEAE-52纤维素柱层析分离纯化,用纸色谱和琼脂糖凝胶电泳对洗脱组分进行纯度鉴定。结果表明：Sevage法脱蛋白7次可脱除94%的蛋白质,多糖得率为13.75%。DEAE-52纤维素柱层析后得到10种组分,浓缩干燥后得到白色粉末状多糖组分,每个组分经过纯度鉴定后均为单一的多糖。选择水和NaC l溶液为洗脱剂的温和条件分离纯化多糖效果较好。     

Isolation,Purification, and Resolution of the Extracellular Proteinase Complex of Aspergillus ochraceus513 with Fibrinolytic and Anticoagulant Activities

The extracellular proteinase complex of the microscopic fungus Aspergillus ochraceus513 was isolated, purified, and resolved by affinity chromatography on bacillichin-silochrom and subsequent column chromatography on DEAE-Toyopearl 650M. The extracellular enzyme of the protein C activator type had a molecular mass of 36.5 kDa and activity close to that of the Agkistrodonsnake venom protein C activator. The fibrinolytic and anticoagulant activities of the enzyme were investigated.