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相似文献
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1.
细胞调亡一般都伴随着有DNA片段化,活性氧含量增加,并能被过量的Bcl-2所抑制。以BA/F3β细胞为模型,利用MTT检测、Hochest染色以及透射电镜检测等技术却发现,镉离子虽然可以诱导该细胞调亡,但是这种调亡没有DNA片段化,也没有活性氧含量增加。此外,过量Bcl-2对这种凋亡也没有保护作用。因此,可以确认镉离子诱导BA/F3β细胞发生了奇特的细胞调亡。  相似文献   

2.
细胞凋亡过程中bcl-2基因的甲基化   总被引:6,自引:0,他引:6  
为探讨凋亡过程中,bcl-2基因下调与该基因甲基化状态的关系,用5-氟尿嘧啶(5-Fu)诱导小鼠成纤维细胞NC3H10,TC3H10及人乳腺癌细胞MCF-7的凋亡,分别检测了这三种细胞凋亡过程中bcl-2的表达变化,与其调控区及编码区的甲基化状况.我们曾观察到5-Fu作用24~48h出现细胞存活率下降,DNA梯状断裂及细胞周期凋亡峰显现等典型凋亡现象.Northern杂交显示,在5-Fu作用12h时bcl-2mRNA水平已明显降低.由此,我们用小鼠bcl-2(mbcl-2)及人bcl-2(hbcl-2)基因调控区PCR扩增片段及bcl-2编码区(cDNA)片段作为探针,与5-Fu作用12h的细胞DNA的MspⅠ/HpaⅡ酶切产物进行Southern杂交,以未作用的细胞DNA同样酶切杂交为对照.通过杂交带谱的变化,分析bcl-2基因的甲基化状况.结果显示:mbcl-2及hbcl-2在5-Fu作用12h后调控区甲基化水平增高,但其编码区甲基化状态皆未出现可检出的变化.上述结果提示:bcl-2基因调控区甲基化水平升高可能与该基因下调有关  相似文献   

3.
以药物敏感型细胞株K562/S和耐药型细胞株K562/A02为对象.观察原癌基因Bcl-2的表达量在两种细胞中的差异,以及神经酰胺作为一个新的脂质第二信使诱导细胞凋亡的能力,并利用酪氨酸激酶抑制剂genistein,酪氨酸磷酸酯酶抑制剂vanadate,观察酪氨酸可逆磷酸化与细胞凋亡间的关系.结果显示:在K562/A02中Bcl-2的表达量明显高于K562/S;外源性神经酰胺能成功地诱导K562/S,K562/A02细胞凋亡,凋亡细胞具有典型的形态学改变和DNA“Ladder”形成,FCM检测出现凋亡细胞峰,但在同样的诱导条件下,K562/S细胞凋亡明显高于K562/A02细胞.FCM检测genistein能显著改变这两种细胞生长周期,但细胞阻滞于G2/M期,便对神经酰胺诱导的细胞凋亡无明显作用,vanadate单独对细胞地明显作用,但与神经酰胺共同作用能明显提高细胞凋亡率.以上结果表明在药物诱导的细胞调亡中Bcl-2基因起重要作用,神经酰胺能诱导K562/S和K562/A02细胞调亡.  相似文献   

4.
研究证明:许多化学药物的治疗都是以诱导细胞凋亡的方式杀伤癌细胞的。有关细胞凋亡的研究已成为肿瘤生物学研究中的一个新焦点。IgYricinA为本实验室新研制的一种免疫毒。与其它种类的免疫毒一样,它能够特异性地杀伤靶细胞。推测:免疫毒IgYricinA也是以诱导细胞凋亡的方式杀死癌细胞的。我们已经研究了免疫毒对靶细胞的杀伤能力和效果,本文则着重对细胞的杀伤机理进行探讨。本实验以胃癌细胞MGC803为靶细胞,HeLa细胞为非特异识别细胞,二倍体2BS细胞为正常对照细胞,进行IgYricinA处理,观察其诱导细胞凋亡的可能性。同时进行IgY和ricin处理,以期探明引起细胞凋亡的有效成分。OlympusBX荧光显微镜下观察到(Fig2,5&6):在细胞培养液中加入IgYricinA后,MGC803细胞表现出典型的凋亡形态变化,即染色质浓缩、细胞皱缩并放出凋亡小体。细胞凋亡时DNA被降解成寡核体长度的片段,在琼脂凝胶电泳上形成DNA梯带,成为药物处理后确定细胞凋亡过程中细胞降解的一种生化指标。Fig3表明,用IgYricinA处理MGC803细胞24小时、用ricin处理MGC803和HeLa  相似文献   

5.
转染了P75NGFR的R2神经细胞系R2L1在去血清的培养时可以诱导细胞凋亡的发生.此凋亡可以被RNA合成抑制剂放线菌素D和蛋白质合成抑制剂环己酰胺所抑制.利用DDRT-PCR技术比较了去血清培养的发生凋亡的R2L1细胞与有血清培养的不发生凋亡的R2L1细胞以及去血清培养的不发生凋亡的R2P细胞基因表达的差异.克隆了数个特异或差异表达的短cDNA片段,经Northern杂交证实其中两个片段LIAREST-1和LIAREST-2表达量在凋亡细胞中显著高于不发生凋亡的细胞中,GenBank检索表明此二片段为新的cDNA序列并给予登录号U47315和U47316.另有一个cDNA片段LIARCD-3在凋亡细胞中受到了明显的抑制,经检索为一已知的与前强啡肽原上游调控区结合的DNA结合蛋白cDNA编码区的一部分,首次被证实它与P75NGFR诱导的神经细胞凋亡调控关联  相似文献   

6.
细胞色素c能诱导植物细胞编程性死亡   总被引:24,自引:1,他引:23  
以悬浮培养的胡萝卜(DaucuscarotaL.)与烟草(NicotianatabacumL.cv.BY2)细胞原生质体为材料,加入一定浓度的细胞色素c和dATP。不同取样时间的DAPI荧光染色与电镜超薄切片观察的结果显示染色质发生凝集、趋边化,最终形成凋亡小体。核酸电泳显示DNA发生特异降解并形成电泳“阶梯”(DNAladder)。用末端脱氧核糖核酸转移酶介导的dUTP切口末端标记方法(TUNEL)检测发现DNA的3'OH断端被原位特异标记。以上结果说明:细胞色素c能诱导植物细胞发生典型的凋亡。  相似文献   

7.
植物细胞凋亡的ELISA检测(英文)   总被引:1,自引:0,他引:1  
本文利用TUNEL方法在单个细胞水平上对苯胺灵诱导的玉米根尖细胞死亡进行了检测。结果表明,一定浓度的苯胺灵能诱导玉米根尖细胞发生主动性的细胞凋亡,具有细胞凋亡典型的形态和生化特征即细胞核浓缩并形成核碎片、染色质边缘化及DNA特异片段化等(Fig.1)。首次利用ELISA方法在群体水平上对这种细胞凋亡进行了进一步检测。结果表明:动物细胞研究常用的ELISA方法同样也适合用于植物细胞凋亡的检测。在凋亡前期,随着凋亡过程的进行,细胞质中的OD值逐渐上井(Fig.2)。剂量实验表明,0.2mg/mL苯胺灵最适合于诱导细胞凋亡(Fig.3)。  相似文献   

8.
Bcl—2的抗细胞凋亡机制   总被引:3,自引:0,他引:3  
Bcl-2的抗细胞凋亡机制@郑英如@陈竹钦¥第三军医大学附属大坪医院Bcl2的抗细胞凋亡机制郑英如陈竹钦(第三军医大学附属大坪医院,重庆630042)bcl2为一原癌基因,通过其所编码蛋白Bcl2而发挥其抑制细胞凋亡的功能。在生理情况下,Bcl2在...  相似文献   

9.
将抗癌胚抗原(CEA)单链抗体基因插入家蚕杆状病毒转移载体pBacPAKHis, 与修饰的家蚕核型多角体病毒BmBacPAKDNA共转染家蚕细胞, 经同源重组得到含有在多角体蛋白基因启动子控制下的抗CEAScFv 基因的重组病毒BmBacScFv。用重组病毒分别感染家蚕细胞和幼虫, 在两者中均得到了高效表达, 产物分子量为28kD, 前者占细胞总蛋白的6 % , 后者为0 .3 mg/ 蚕。目的基因在家蚕细胞和幼虫中表达产物经Ni2+IDASepharose6B亲和柱纯化, 前者纯度可达90% 以上, 后者纯度较低; 纯化后的融合蛋白具有CEA 结合活力, 其亲和常数分别为5 .4×108/mol·L- 1 和2.3 ×108/mol·L-1 , 略低于其亲本单抗E7B10 2.7 ×109/mol·L- 1 。  相似文献   

10.
氧化诱导K_(562)细胞凋亡机制的初步探讨   总被引:7,自引:0,他引:7  
以过氧化氢(H2O2)诱导人慢性髓细胞白血病(K562)细胞为凋亡模型,采用流式细胞仪(flowcytometry,FCM)和激光共聚焦扫描显微镜(laserconfocalscanningmicroscopy,LCSM)研究细胞凋亡,形态观察出现核固缩,核碎裂及凋亡小体等典型凋亡特征.DNA电泳图谱出现“Ladder”.FCM检测在G0/G1峰前出现一低DNA含量的凋亡峰.LCSM显示凋亡细胞c-Fos.c-Jun和NFκB表达量均有不同程度的增加.该结果提示上述三种转录因子可能参与氧化诱导凋亡过程中基因的调控作用.  相似文献   

11.
细胞凋亡过程中c-erbB-2基因的表达   总被引:5,自引:2,他引:3  
据文献报道c-erbB-2可以介导细胞凋亡,为检验这一结论是否具有普遍性,用5-氟尿嘧啶(5-Fu)诱导小鼠成纤维细胞NC3H10,TC3H10及人乳腺癌细胞MCF-7的凋亡.用Northern印迹法检测c-erbB-2的表达状况.结果显示:c-erbB-2基因表达在5-Fu作用6h开始降低,12h降低更为明显.作用24~48h出现细胞存活率下降,DNA梯状断裂及细胞周期凋亡峰等凋亡典型现象.实验结果并不支持c-erbB-2可介导细胞凋亡的观点.该基因在细胞凋亡过程中有何作用尚待探讨.  相似文献   

12.
正常机体内,红细胞生成素(EPO)诱导红系细胞分化,并阻止其凋亡,使其维持机体所需足够的数量。本文采用诱发贫血病毒(FVA)诱导BALB/c小鼠脾细胞所形成的红细胞为实验系统,研究了外界因子??地塞米松(Dex)对EPO作用的影响。取68周雌性BALB/c小鼠,尾部静脉注射含FVA的小鼠血清。15天后,断颈处死。取脾于IMDM中漂洗、剪碎、过滤、离心、制成单细胞悬液,在EPO存在下,于平皿中培养至不同的时期后,进行不同浓度、不同时间的Dex处理。取细胞进行:(1)台盼蓝染色计数死细胞数;(2)观察DNA电泳图谱;(3)电镜检察细胞学变化。Fig.1表明:随着Dex处理浓度和时间的增加,细胞死亡率也增加。Fig.2表明:10-4浓度Dex处理,即可使早(12h)、中(24h)幼期红细胞凋亡,DNA断裂成多聚核小体,产生明显DNA梯形带。Fig.3表明:高浓度Dex可以使早幼期红细胞凋亡。电镜观察表明:与对照(Fig.4)比较,Dex处理后,细胞核固缩,染色质沿核膜内面周边凝聚,核周间隙扩张,胞质内出现空泡(Fig.5);随后细胞破碎,出现大量凋亡小体(Fig.6)。Dex拮抗EPO,诱导红系细胞凋亡的现象此  相似文献   

13.
细胞色素c与细胞凋亡   总被引:9,自引:0,他引:9  
Huang JF  Fang DC  Lu R 《生理科学进展》1999,30(2):144-146
在哺乳动物细胞凋亡的发生过程中,位于线粒体内膜外侧的细胞色素c被释放进入胞质,作为辅助因子参与死亡蛋白酶-3的激活,后者在凋亡过程中起到重要作用。Bcl-2、Bcl-XL,Bax可阻止或诱导线粒体细胞色素c释放入胞质,这可能是Bcl-2,Bcl-XL,Bax调节凋亡的机制之一。  相似文献   

14.
高粱细胞质雄性不育系3197A(3A)在常温条件下是不育的(Figs.11&2),经热激(45℃)诱导不同程度地恢复了育性(Figs.13&4),为研究其不育机理提供了线索。热激2h后,3A中即可产生一类线粒体热激蛋白(HSPs)。其中,分子量为70kD的HSP70含量最高,也最为稳定。不过,3A中HSPs的稳定性弱于保持系3197B(3B)(Fig.2,Panels1~4)。放线菌素D抑制HSPs的合成,而氯霉素无此作用(Fig.2,Panels5&6),表明:HSPs是由核基因编码、在细胞质中合成、再跨膜转运到线粒体中的。3A幼穗经热激后,线粒体的总蛋白量猛增了2.7倍(Fig.3),达到3B的水平,育性亦变为可育的。Fig.4表明:HSP70反义链cDNA(R1)能进入到3B花药细胞中,并与靶RNA(HSC70mRNA)结合,而对照、正义链cDNA(D)链无此反应。由此、再增加一个通用保守序列的反义链cDNA(R2)、共两个探针(R1、R2),可以检测到:3A在常温下没有能力合成HSC70mRNA(Fig.5),而在热激条件下,转变为有能力(Fig.6)。启示:3A在热激条件下由不育转变为可育  相似文献   

15.
将大鼠酰胺化酶的信号肽及前导肽编码序列引入昆虫核多角体病毒转移表达载体,构建PABChGRF(Gly)、PABCIGFI融合基因的昆虫细胞分泌表达质粒pBacPAG2、pBacPAI,并与经修饰的银纹夜蛾核多角体病毒BacPAK6线性化DNA共转染秋粘虫细胞Sf21,通过同源重组、筛选和鉴定,得到它们的重组病毒BacPAG、BacPAI。将重组病毒感染Sf21细胞,PABChGRF(Gly)和PABCIGFI均得到有效外泌表达,表达产物通过IgGSepharose柱可获得快速纯化。  相似文献   

16.
小鼠成纤维细胞凋亡过程中P53与bcl-2表达的时序性   总被引:11,自引:0,他引:11  
为探讨细胞凋亡过程中,bcl-2与P53,这两种凋亡关键性基因的相互关系,用5-氟尿嘧啶(5-Fu)诱导小鼠正常与恶性转化的成纤维细胞的凋亡,观察了这两种基因在凋亡过程中表达变化的时序.经流式细胞计检测,这两种细胞在5-Fu作用24h均出现了凋亡峰,细胞存活率随之下降,DNA电泳显现梯状断裂.Northern杂交结果显示,在5-Fu作用6h后两种细胞P53mRNA水平已明显增高,而bcl-2mRNA水平则在作用12h方明显降低.P53上调与bcl-2下调的明显时序性,说明P53具备作为bcl-2基因负调控转录因子的条件.由此,为进一步了解凋亡过程的bcl-2基因下调机理提供了线索  相似文献   

17.
抗真菌蛋白Rs—AFPs基因在大肠杆菌中的表达   总被引:3,自引:0,他引:3  
将抗真菌蛋白Rs-AFP1和Rs-AFP2全长cDNA插入表达质粒pET-22b/NcoI+SacI位点,构建成融合蛋白表达载体pRAF1和pRAF2.将不含信号肽编码序列的Rs-AFP1和Rs-AFP2cDNA分别插入pET-22b/Ncol+Sacl和pET-22b/Ndel+SacI位点,构建成不含信号肽序列的融合蛋白表达载体pRAF3、pRAF4和非融合蛋白表达载体pRAF5和pRAF6.将构建的上述各种表达载体转化E.coliBL21,挑菌落培养,IPTG诱导,使Rs-AFPs基因得到表达,并用体外抑菌试验检测表达产物的活性,结果表明,各种表达载体的表达产物均具有不同程度的抑菌活性,其中,pRAF3和pRAF4表达产物的抑菌活性较明显.  相似文献   

18.
制备CVB3结构蛋白和非结构蛋白重组质粒DNA疫苗时,采用RT-PCR从CVB感染的HeLa细胞中扩增VP1、VP2、2A和3D基因,重组入真核表达质粒pcDNA3中,构建pcDNA3/VP2、pcDNA3/VP1、pcDNA3/2A和pcDNA3/3D重组质粒,经酶切和测下实扩增的序列并将各重组质粒体外转染真核细胞COS-7,用RT-PCR检测mRNA的转录,用Western-blot检测表达产物。结果4种重组质粒酶切出相应大小的目的片段,经测序证实为CVB3相应序列,Western-blot证实能够在体外真核细胞中表达。本文成功构建CVB3结构与非结构蛋白的重组质粒DNA疫苗,为进一步研究其免疫效果奠定了基础。  相似文献   

19.
神经酰胺:细胞凋亡信号转号的第二信使分子   总被引:2,自引:0,他引:2  
神经酰胺是细胞凋亡信号调控中的一个第二信使因子,许多应激刺激能激活神经鞘磷脂循环产生神经酰胺诱导多种细胞体系发生凋亡。神经酰胺介导细胞凋亡的机理尚未完全明了,可能是通过多个下游靶分子包括CAPK,CAKK,PKC,SAPK/JNK,CPP32,Bcl-2以及Ras-RaclJNK/p38-K→GADD153信号传导链等作用于不同的信号转导途径而诱导细胞凋亡的。  相似文献   

20.
鸡贫血病毒(CAV)是一种全球性的禽传染病的病原。为环状单链DNA,大小为2.3kb,是圆环病毒科的成员。CAV基因组包含了3个部分或完全重叠的基因。CAV可通过细胞凋亡使胸腺细胞及人工培养的转化型单核细胞产生致命的细胞病变(CPE)。在转化的(鸡)细胞中,VP3基因的编码产物凋亡素可以造成凋亡,而这种效应不依赖于p53,且不受凋亡抑制蛋白Bcl-2及CrmA的抑制。令人注目的是,凋亡素能使人肿瘤  相似文献   

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