乌鳢组织内三种同工酶的研究

本研究对乌鳢９种组织内的ＬＤＨ、ＭＤＨ和ＡＴＰａｓｅ同工酶作了分析，结果表明，乌鳢各组织内的ＬＤＨ、ＭＤＨ有明显的组织特异性，ＬＤＨ由两个基因编码。骨骼肌中的ｓ－ＭＤＨ也有两个基因编码。ＡＴＰａｓｅ同工酶存在于乌鳢的多种组织中，其基因编码数有待进一步探讨。     

氧化修饰高密度脂蛋白对培养人动脉平滑肌细胞细胞周期蛋白D_1基因表达的影响

动脉平滑肌细胞（ｓｍ ｏｏｔｈ ｍ ｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ,ＳＭＣ）是动脉粥样硬化（ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ,ＡＳ）斑块中的主要细胞,它的增殖在ＡＳ形成过程中极其重要．利用体外培养的人主动脉ＳＭＣ,观察了天然高密度脂蛋白（ｎａｔｉｖｅ ｈｉｇｈ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ,Ｎ－ＨＤＬ）及氧化修饰ＨＤＬ（ｏｘｉｄｉｚｅｄ ＨＤＬ,ＯＸ－ＨＤＬ）对培养人主动脉ＳＭＣ ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１（细胞周期蛋白Ｄ１）基因转录表达的影响．结果表明：（１）Ｎ－ＨＤＬ对ＳＭＣｃｙｃｌｉｎ Ｄ１基因表达无影响（Ｐ＞ ０．０５）;（２）ＯＸ－ＨＤＬ使ＳＭＣｃｙｃｌｉｎ Ｄ１基因表达显著增强（Ｐ＜０．０１）,其表达量随时间（２、１２、２４ ｈ）延长而增加．上述结果表明,ＯＸ－ＨＤＬ的致ＡＳ作用可能与其刺激ＳＭＣｃｙｃｌｉｎ Ｄ１基因表达增加有关．     

脂质体化r-HBsAg的研究

用逆相蒸发技术制备带不同表面电荷的脂质体及脂质体化的重组乙肝基因工程疫苗（ｒ－ＨＢｓＡｇ）。制备的脂质体平均粒径为１５０－４５０ｎｍ,不同电荷脂质对粒径无明显影响,加入ｒ－ＨＢｓＡｇ使粒径略有增大。ｒ－ＨＢｓＡｇ包裹率为４４－５７％,不同电荷脂质体间无明显差异。荧光染料Ｃａｌｃｅｉｎ包裹率为３－７％,明显低于ｒ－ＨＢｓＡｇ的包裹率。用准弹性光散射（ｑｕａｓｉ－ｅｌａｓｔｉｃｌｉｇｈｔｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ,ＱＥＬＳ）技术测定脂质体的泳动速率,加入ｒ－ＨＢｓＡｇ及新型免疫佐剂ＡＳＤ系列后,对脂质体的泳动速率有明显影响。     

胆固醇流出调节蛋白与胆固醇逆向转运

高密度脂蛋白（ＨＤＬ）能从外周细胞摄取我余胆固醇并运输至肝脏排出,防止其在血管壁沉积。外周细胞内胆固醇流向ＨＤＬ的机制一直是人们积极探索但尚未弄清的问题。新近发表在《Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ》上的三篇论文在这个环节上取得了重大突破,他们通过对Ｔａｎｇｉｅｒ病的研究,发现由ＡＴＰ－ｂｉｎｄｉｎｇ－ｃａｓｓｅｔｔｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ １基因编码的胆固醇流出调节蛋白（ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ－     

氧化修饰高密度脂蛋白的致动脉粥样硬化作用

高密度脂蛋白（ｈｉｇｈ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ,ＨＤＬ）具有抗动脉粥样硬化（ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ,ＡＳ）作用,一旦发生氧化修饰后,即具致ＡＳ作用。氧化修饰ＨＤＬ（ｏｘｉｄｉｚｅｄ ＨＤＬ,ＯＸ－ＨＤＬ）通过减少胆固酥因管平滑肌细胞（ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ,ＳＭＣ）,内皮细胞及巨噬细胞流出,抑制胆固醇逆向转运;     

用显微切割技术和催化信号扩增法检测何杰金病瘤细胞（H／RS）中的 …

为明确何杰金病（Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ,ＨＤ）瘤细胞中是否存在人巨细胞病毒（ｈｕｍａｎ ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ,ＨＣＭＶ）感染,采用显微切割技术结合ＰＣＲ方法检测ＨＤ组织及其瘤细胞Ｈｏｄｇｋｉｎ／Ｒｅｅｄ－Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ（Ｈ／ＲＳ）中的ＨＣＭＶ核酸;采用免疫组织化学催化信号扩增（ｃａｔａｌｙｓｅｄ ｓｉｇｎａｌ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ,ＣＳＡ）法检测ＨＤ中ＨＣＭＶ的立即     

转甜菜碱醛脱氢酶基因豆瓣菜的耐盐性

将山菠菜甜苹碱醛脱氢酶（ＢＡＤＨ）基因经根癌土壤杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ （Ｓｍｉｔｈ ｅｔ Ｔｏｗｎｓｅｎｄ）Ｃｏｎｎ）ＡＧＬ１介导转入豆瓣菜（Ｎａｓｔｕｒｔｉｕｍ ｎｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ Ｒ,Ｂｒ．）ＰＣＲ、Ｓｏｕｔｈｅｒｊ ｂｌｏｔｉｎｇ检测呈阳性的再生植株有４６株,对６株再生植株的ＢＡＤＨ活性和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｉｎｇ检测发现,有５株ＢＡＤＨ酶活性明     

卵磷脂胆固醇酰基转移酶的结构研究

胆固醇在血液循环中的转运及其在外周组织中的清除都依赖于卵磷脂胆固醇酰基转移酶 (ｌｅｃｉｔｈｉｎ :ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌａｃｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ,ＬＣＡＴ)的活性。低密度脂蛋白 (ＬＤＬ)将胆固醇从肝脏运送到外周组织 ,而高密度脂蛋白 (ＨＤＬ)则将外周组织中多余的胆固醇运送回肝脏 ,在这里胆固醇或以胆酸盐的形式排出体外或用于类固醇激素的合成。这个被称为胆固醇逆转运的过程与血浆中ＬＣＡＴ的作用密切相关。在血中 ,ＬＣＡＴ结合到其体内的最适底物ＨＤＬ上 ,被ＨＤＬ中的主要载脂蛋白ａｐｏＡＩ激活 ,催化胆固醇和卵…     

凝血酶激活的单链尿激酶型纤溶酶原激活剂的构建、表达、纯化和性质研究

用Ｋｕｎｋｅｌ突变法,将单链尿激酶型纤溶酶原激活剂（ｓｃｕ－ＰＡ）ｃＤＮＡ基因中编码Ｐｒｏ１５５—Ｌｙｓ１５８的片段定点突变,并将此突变的ｓｃｕ－ＰＡ（ｔｓｃｕ－ＰＡ）的ｃＤＮＡ克隆到表达载体ｐＣＭ－β－ｎｅｏ中,与ｐＣＭ－ｄｈｆｒ共转染ＣＨＯ／ＤＨＦＲ－细胞．获得的稳定表达株在无血清培养基中２４ｈ的表达量为６２０ＩＵ／１０６细胞．经锌离子螯合Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ亲和层析得到ｔｓｃｕ－ＰＡ纯品．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示ｔｓｃｕ－ＰＡ分子量为５３ｋＤ左右,与预期的结果相符．ｔｓｃｕ－ＰＡ是由凝血酶激活而不是由纤溶酶激活,但激活后也能转变为双链分子（ｔｃｕ－ＰＡ）．ｔｓｃｕ－ＰＡ仍保持了ｓｃｕ－ＰＡ的血纤维蛋白亲和性．酶动力学研究表明,激活后的ｔｓｃｕ－ＰＡ水解Ｓ２４４４的Ｋｍ和Ｋｃａｔ值与高分子量尿激酶（ＨＵＫ）相似．体外溶栓实验结果表明,ｔｓｃｕ－ＰＡ可以选择性地溶解富含凝血酶的血凝块,对贫凝血酶的血凝块作用不大     

产二十二碳六烯酸等多不饱和脂肪酸真菌的筛选

从土壤中筛选出一株产二十二碳六烯酸（ＤＨＡ）的丝状真菌,菌丝含油２１．２３％,ＤＨＡ占总脂肪酸２．５１％;同时含二十碳五烯酸（ＥＰＡ０,占总脂肪酸的０．４１％;不饱和脂肪占总脂肪酸的８０％。经鉴定为头孢霉属（Ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｕｍ ｓｐ．）真菌。同时发现两株菌含ＥＰＡ,经鉴定为小克银汉霉（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ ｓｐ．）和毛霉（Ｍｕｃｏｒ ｓｐ．）。在这几个属中发现ＤＨＡ和ＥＰＡ尚属首     

HSP_(70)基因表达对高粱育性的影响(英文)

高粱细胞质雄性不育系３１９７Ａ（３Ａ）在常温条件下是不育的（Ｆｉｇｓ．１１＆２）,经热激（４５℃）诱导不同程度地恢复了育性（Ｆｉｇｓ．１３＆４）,为研究其不育机理提供了线索。热激２ｈ后,３Ａ中即可产生一类线粒体热激蛋白（ＨＳＰｓ）。其中,分子量为７０ｋＤ的ＨＳＰ７０含量最高,也最为稳定。不过,３Ａ中ＨＳＰｓ的稳定性弱于保持系３１９７Ｂ（３Ｂ）（Ｆｉｇ．２,Ｐａｎｅｌｓ１～４）。放线菌素Ｄ抑制ＨＳＰｓ的合成,而氯霉素无此作用（Ｆｉｇ．２,Ｐａｎｅｌｓ５＆６）,表明：ＨＳＰｓ是由核基因编码、在细胞质中合成、再跨膜转运到线粒体中的。３Ａ幼穗经热激后,线粒体的总蛋白量猛增了２．７倍（Ｆｉｇ．３）,达到３Ｂ的水平,育性亦变为可育的。Ｆｉｇ．４表明：ＨＳＰ７０反义链ｃＤＮＡ（Ｒ１）能进入到３Ｂ花药细胞中,并与靶ＲＮＡ（ＨＳＣ７０ｍＲＮＡ）结合,而对照、正义链ｃＤＮＡ（Ｄ）链无此反应。由此、再增加一个通用保守序列的反义链ｃＤＮＡ（Ｒ２）、共两个探针（Ｒ１、Ｒ２）,可以检测到：３Ａ在常温下没有能力合成ＨＳＣ７０ｍＲＮＡ（Ｆｉｇ．５）,而在热激条件下,转变为有能力（Ｆｉｇ．６）。启示：３Ａ在热激条件下由不育转变为可育     

环腺苷一磷酸对人Ⅰ型17β羟类固醇脱氢酶在绒癌细胞系中表达的调节作用

由Ｈ ＳＤ１７Ｂ１基因编码的人Ⅰ型１７β－羟类固醇脱氢酶（１７β－ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｔｙｐｅ１简称Ⅰ型１７ＨＳＤ）催化雌酮与雌二醇之间的转化。本文研究环腺苷一磷酸简化（ｃＡＭＰ）对该酶在培养的绒癌胞系（ＪＡＲ和ＪＥＧ－３）中表达的调节作用。用８－ｂｒｏｍｏ－ｃＡＭＰ处理两种绒癌细胞后,观察到在伴随１．３ｋｂⅠ型１７ＨＳＤｍＲＮＡ表达的同时,Ｉ型１７ＨＳＤ蛋白浓度     

熊猫等动物犬瘟热病毒附着蛋白基因的遗传多样性

为了研究犬瘟热病毒（ｃａｎｉｎｅ ｄｉｓｔｅｍｐｅｒ ｖｉｒｕｓ,ＣＤＶ）大熊猫株、小熊猫株和长春犬株附着蛋白（Ｈ）基因的遗传这异,对Ｈ基因进行了序列测定。上述３个ＣＤＶ毒株的Ｈ基因全长均为１９４６ｂｐ,开放阅读框架（ＯＲＦ）始于２１－２３位的ＡＴＧ,终止于１８４２－１８４４位的ＴＧＡ,编码６０７个氨基酸。与ＧｅｎＢａｎｋ中１５个ＣＤＶ株推导的Ｈ蛋白氨基酸序列比较发现,１６个野毒株潜在的Ｈ－联糖基     

氧化修饰HDL刺激培养人主动脉平滑肌细胞增殖

平滑肌细胞（ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ,ＳＭＣ）增殖在动脉粥样硬化（ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ,ＡＳ）形成中起着重要作用。氧化修饰ＨＤＬ（ｏｘｉｄｉｘｅｄ ＨＤＬ,ＯＸ－ＨＤＬ）可刺激＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入培养人动脉ＳＭＣ的ＤＮＡ,促进ＳＭＣ增殖。以四甲工偶氮唑盐９ＭＴＴ）法直接观察ＯＸ－ＨＤＬ对培养人动脉ＳＭＣ增殖细胞数的影响。结果显示,天然ＨＤＬ（ｎａｔｉｖｅ ＨＤＬ Ｎ－ＨＤＬ）对     

组蛋白脱乙酰化酶—1保守氨基酸中组氨酸定点突变的建立

为了研究蛋白脱乙酰化酶－１（ＨＤＡＣ１）保守氨基酸中组氨酸的定点突变对其功能的影响,需要建立ＨＤＡＣ１保守组氨酸定点突变的突变子。在克隆野生型ＨＤＡＣ１ｃＤＮＡ的基础上,利用Ａｌ－ｔｅｒｅｄ ＳｉｔｅⅡ体外突变系统对ＨＤＡＣ１保守氨基酸中的３个组氨酸位点进行突变,并用全自动测序鉴定。结果分别获得了ＨＤＡＣ１的Ｈ１４０Ｆ、Ｈ１７８Ｆ、Ｈ１７９Ｆ的定点突变子,为进一步研究ＨＤＡＣ１保守氨基酸定点突变对     

马铃薯Y病毒普通系外壳蛋白基因在大肠杆菌中的表达

将马铃薯Ｙ病毒普通系（ＰＶＹ０）的外壳蛋白基因克隆到表达质粒ｐＭＡＬｃ２中,构建这一基因在大肠杆菌中的表达载体ｐＭＡＬｃ２ＰＶＹ０ＣＰ。ＳＤＳＰＡＧＥ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ检测结果表明,这一表达栽体在Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α中经ＩＰＴＧ诱导可表达分子量为７１．８ｋＤａ的特异性融合蛋白。以ａｍｙｌｏｓｅｒｅｓｉｎ亲合柱层析纯化这一融合蛋白为抗原,免疫家兔制备了效价为１∶１０２４的特异性抗血清。用该抗血清可通过对流免疫电泳、免疫双扩散及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ对ＰＶＹ进行检测     

乌梢蛇LDH同工酶谱系的研究

乳酸脱氢酶 (ＬＤＨ)是一种重要的与能量代谢有关的糖酵解酶 ,广泛存在于动物组织中。由于构成ＬＤＨ分子的Ａ和Ｂ亚基在不同组织中比例不同 ,出现了ＬＤＨ同工酶分布的组织特异性[1] 。本文采用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳对乌梢蛇的心肌等 7种组织的ＬＤＨ同工酶进行了初步的研究 ,为蛇类生化遗传学的研究提供了基本资料。1　材料和方法乌梢蛇 (Ｚａｏｃｙｓｄｈｕｍｎａｄｅｓ) 2条 (♂ )采自浙江金华郊区。临实验前断头处死动物 ,取出心肌、肝、肺、肾、骨骼肌、脑、胃等组织 ,用生理盐水洗去血污 ,按 1∶2 0 (ｇ/ｍｌ)的比例在 0 2ｍ…     

金黄色破囊壶菌发酵生产DHA的研究

顺 4,7,1 0 ,1 3 ,1 6 ,1 9 二十二碳六烯酸 (ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｅｎｏｉｃａｃｉｄ ,简称ＤＨＡ)是ω 3系列多不饱和脂肪酸。近年的研究表明 ,ＤＨＡ是组成大脑和视网膜的重要结构物质 ,如大脑灰质结构脂质中 6 0 %的脂肪酸均为ＤＨＡ[1] 。ＤＨＡ对人体健康有益的生理功能主要表现在[2 ] :调节中枢神经系统功能 ;预防和治疗心血管疾病 ;治疗气喘、关节炎等 ;预防和治疗乳腺癌、结肠癌等。由于ＤＨＡ具有上述生理功能 ,已在医药、食品、保健品等领域得到广泛应用。目前 ,商品ＤＨＡ主要来源于深海鱼油 ,如沙丁鱼、金枪鱼等鱼油 ,由于鱼…     

天然和氧化修饰型LDL、VLDL及HDL对培养人动脉平滑肌细胞原癌基因fos及myc表达的影响

动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）是动脉粥样硬化（ＡＳ）斑块中的主要细胞,它的增殖在ＡＳ形成过程中极其重要。脂蛋白和氧化修饰型脂蛋白对ＳＭＣ增殖的影响以及ＳＭＣ增殖与原癌基因异常表达的关系是当前ＡＳ发病机制研究的热点之一。我们在建立人主动脉ＳＭＣ体外培养方法的基础上,观察了ＬＤＬ,ＶＬＤＬ及ＨＤＬ和相应的氧化修饰型脂蛋白对培养人ＳＭＣｆｏｓ,ｍｙｃ,ｅｒｂ－Ｂ原癌基因转录表达的影响。结果表明：①ＨＤＬ对ＳＭＣｆｏｓ,ｍｙｃ基因表达无影响;②ＬＤＬ和ＶＬＤＬ有使这些基因表达增加的趋势,但与对照比较差异不显著（Ｐ＞０．０５）;③ＯＸ－ＶＬＤＬ,ＯＸ－ＶＬＤＬ和ＯＸ－ＨＤＬ有使ＳＭＣｆｏｓ,ｍｙｃ基因表达显著增强的作用（Ｐ＜０．０１）,且其作用较相应的天然脂蛋白大（Ｐ＜０．０１）．上述结果说明：ＬＤＬ,ＶＬＤＬ,ＯＸ－ＬＤＬ,ＯＸ－ＶＬＤＬ和０Ｘ－ＨＤＬ的致ＡＳ作用可能与刺激ＳＭＣｆｏｓ和ｍｙｃ癌基因表达增加有关。     

酶母K.cicerisporus基因组中有启动子功能的DNA片段的克隆

利用以３′－氨基糖苷磷酸转移酶基因（ＡＰＨＩ）为报道基因的一套启动子探针质粒ｐＳＫ－ｋａｎ４０１、ｐＳＫ－ｋａｎ１１０５、ｐＳＫ－ｋａｎ１２３８,从酵母Ｋｌｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｃｉｃｅｒｉｓｐｏｒｕｓ基因组中克隆到８个有较强启动功能的ＤＮＡ片段,分析出３′端ＤＮＡ序列,并在酵母Ｋｌｕｙｖｅｒｏ８ｍｙｃｅｓｅ ｌａｃｔｉｓ中通过检测报告基因与３－磷酸甘油醛脱氢酶基因（ＡＰＤＨ）的ｍＲＮＡ表达量的比