肝癌组织中HBV核心基因启动了突变的研究

为深入了解乙肝病毒（ＨＢＶ）致癌机理,用磁式ＰＣＲ对广西１４例血清ＨＢＶ ＤＮＡ阳性的原发性肝癌患者癌组织、１０例乙型病毒性肝炎患者血清及１０例乙肝病毒无症状携带者血清ＨＢＶ核心基因启动子进行扩增,阳性者用Ｓａｎｇｅｒ氏双脱氧法做序列分析,发现肝癌组织１０例ＰＣＲ阳性,阳性率７１．４％,所有ＰＣＲ阳性标本的整合体均有乙肝病毒核心基因启动子双突变序列（ｎｔ１７６２Ａ→Ｔ,１７６４Ｇ→Ａ）,并且在其财     

肝癌组织中HBV核心基因启动子突变的研究

为深入了解乙肝病毒 (HBV)致癌机理 ,用套式PCR对广西 14例血清HBVDNA阳性的原发性肝癌患者癌组织、10例乙型病毒性肝炎患者血清及 10例乙肝病毒无症状携带者血清HBV核心基因启动子进行扩增 ,阳性者用Sanger氏双脱氧法做序列分析 ,发现肝癌组织 10例PCR阳性 ,阳性率 71.4 % ,所有PCR阳性标本的整合体均有乙肝病毒核心基因启动子双突变序列 (nt 176 2A→T ,176 4G→A) ,并且在其周围各序列都有不同部位的点突变 ,标本C14核苷酸的缺失突变高达10个。乙肝患者 6例PCR阳性 ,其中 3例乙肝病毒核心基因启动子发生双突变。无症状携带者中 4例PCR阳性 ,其中仅 1例发生双突变。结果提示乙肝病毒核心基因启动子双突变在肝癌患者中较常见 ,肝炎患者次之 ,无症状携带者居最后。     

肝癌组织中HBV核心基因启动子突变的研究

为深入了解乙肝病毒(HBV)致癌机理,用套式PCR对广西14例血清HBV DNA阳性的原发性肝癌患者癌组织、10例乙型病毒性肝炎患者血清及10例乙肝病毒无症状携带者血清HBV核心基因启动子进行扩增,阳性者用Sanger氏双脱氧法做序列分析,发现肝癌组织10例PCR阳性,阳性率71.4%,所有PCR阳性标本的整合体均有乙肝病毒核心基因启动子双突变序列(nt 1 762 A→T, 1 764 G→A),并且在其周围各序列都有不同部位的点突变,标本C14核苷酸的缺失突变高达10个.乙肝患者6例PCR阳性,其中3例乙肝病毒核心基因启动子发生双突变.无症状携带者中4例PCR阳性,其中仅1例发生双突变.结果提示乙肝病毒核心基因启动子双突变在肝癌患者中较常见,肝炎患者次之,无症状携带者居最后.     

mhbR和mhbT基因移码突变对3-羟基苯甲酸代谢的影响

Klebsiella pneumoniae M5a1菌株能以3-羟基苯甲酸作为唯一碳源和能源生长,编码分解代谢3-羟基苯甲酸的基因被克隆至-8kb的DNA片段上(pBSI质粒),含有该质粒的大肠杆菌获得了以3-羟基苯甲酸作为唯一碳源和能源生长的能力。经测序并与GenBank中的已知基因产物进行氨基酸同源性比较后,发现其中的mhbR与转录调节基因和mhbT与底物转运基因具有较高同源性,推断可能具有相应的功能。含有mhbR的移码突变子或mhbT的移码突变子的大肠杆菌在底物3-羟基苯甲酸中培养时,其生长速度和代谢速度都较野生型明显缓慢。     

肝癌组织中CyclinD1及其相关基因研究的进展

细胞周期调控异常会导致肿瘤的发生和发展，CyclinD1是细胞周期的重要调控元件之一，与肝癌发生、进展及预后关系密切。本文就CyclinD1的结构、功能、作用机制、肝癌组织中CyclinD1及其相关基因研究的进展情况予以综述。     

人类珠蛋白相关基因上游开放阅读框的变异分析

β-地中海贫血症是一种珠蛋白生成障碍的常染色体隐性遗传病。而γ珠蛋白基因的开放表达和胎儿血红蛋白的合成,是缓解β地中海贫血病人临床表型的一个重要因素。本研究针对202个血红蛋白相关调控基因或miRNA,对1802个β-地中海贫血症患者进行了目标区域捕获测序。通过生物信息学的分析,检测出了所有捕获区域内的突变。进一步对位于5′端非编码区(5′untranslated region, 5′UTR)的突变进行系统扫描,共计寻找到41个影响uORF(upstream open reading frame, uORF)有或无的功能性突变。从中选取了CHTOP基因(chr1:153606541 C>T)和TGFB1基因(chr19:41859418 G>A)的两个突变,通过定点诱变和双荧光素酶报告实验,在体外证实这两个突变均可显著地改变下游基因的表达。该研究结果为β-地中海贫血症临床表型的精确诊断提供了潜在的筛查靶点。     

人U_1和U_2snRNA基因定位缺失和取代突变

 用寡聚核苷酸诱导的定位突变法,将人U_1和U_2snRNA基因的5'-端调控区域的一段能与SV_(40)T抗原相结合的DNA删去,造成缺失突变,改变这段DNA核苷酸的排列顺序,造成取代突变。突变株用原位杂交法筛选,由限制性内切酶电泳图谱分析和DNA顺序测定得到证实。突变率约为5％。     

肝癌中高表达基因fup1的克隆及其功能

原发性肝细胞癌是我国高发的恶性肿瘤之一，开展肝癌相关基因的研究具有重要的意义。从已经获得的在肝癌和正常肝对照中表达量有明显差异的EST片段入手，克隆了一个功能未报道的而可能与肝癌相关的基因。暂命名为fup1，该基因编码区全长1233bp，其产物的分子量约为46kD，等电点为5.48,可能是一个核蛋白。Northern 迹结果表明该基因在人类除心脏以外的多种正常组织中表达量很小，说明其分布具有一定的组织特异性，将整合有该基因的真核表达载体转染NIH3T3细胞后，MTT检测结果证明该基因的产物可能对细胞的增殖具有促进作用。     

mhbR和mhbT基因移码突变对3-羟基苯甲酸代谢的影响*

Klebsiellapneumoniae M5a1菌株能以 3 羟基苯甲酸作为唯一碳源和能源生长 ,编码分解代谢 3 羟基苯甲酸的基因被克隆至一 8kb的DNA片段上 (pBSI质粒 ) ,含有该质粒的大肠杆菌获得了以 3 羟基苯甲酸作为唯一碳源和能源生长的能力。经测序并与GenBank中的已知基因产物进行氨基酸同源性比较后 ,发现其中的mhbR与转录调节基因和mhbT与底物转运基因具有较高同源性 ,推断可能具有相应的功能。含有mhbR的移码突变子或     

Mutation in the Human HPRT1 Gene and the Lesch-Nyhan Syndrome

Lesch-Nyhan syndrome (LNS) is a rare X-linked inherited neurogenetic disorder of purine metabolism in which the enzyme, hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase (HGprt) is defective. The authors report a novel mutation which led to HGprt-related neurological dysfunction (HND) in two brothers from the same family with a missense mutation in exon 6 of the coding region of the HPRT1 gene: c.437T>C, p.L146S. Molecular diagnosis discloses the genetic heterogeneity of the HPRT1 gene responsible for HGprt deficiency. It allows fast, accurate carrier detection and genetic counseling.     

PCR及其衍生技术在基因突变检测中的应用

许多人类遗传性疾病及某些抗艾滋病药物的抗性乃至细菌对某些抗生素的抗药性通常源于基因突变。本文对近年来在基因突变检测中应用日益广泛的各种PCR 衍生技术作一综述;重点介绍了错配PCR技术,以及我们实验室近期报道的一种快速检测喹诺酮类药物耐药大肠杆菌的错配PCR方案。 Abstract:Many inherited diseases and drug resistance have been attributed to mutations in corresponding genes.In this paper,several techniques based on PCR used in diagnosis were concluded.The development and research progress of Mismatch PCR were discussed in details.Some information about an assay that we developed for detection of antimicrobial resistance to quinolones was also described.     

Lis1 and doublecortin function with dynein to mediate coupling of the nucleus to the centrosome in neuronal migration

Humans with mutations in either DCX or LIS1 display nearly identical neuronal migration defects, known as lissencephaly. To define subcellular mechanisms, we have combined in vitro neuronal migration assays with retroviral transduction. Overexpression of wild-type Dcx or Lis1, but not patient-related mutant versions, increased migration rates. Dcx overexpression rescued the migration defect in Lis1+/- neurons. Lis1 localized predominantly to the centrosome, and after disruption of microtubules, redistributed to the perinuclear region. Dcx outlined microtubules extending from the perinuclear "cage" to the centrosome. Lis1+/- neurons displayed increased and more variable separation between the nucleus and the preceding centrosome during migration. Dynein inhibition resulted in similar defects in both nucleus-centrosome (N-C) coupling and neuronal migration. These N-C coupling defects were rescued by Dcx overexpression, and Dcx was found to complex with dynein. These data indicate Lis1 and Dcx function with dynein to mediate N-C coupling during migration, and suggest defects in this coupling may contribute to migration defects in lissencephaly.     

EML-ALK突变阳性的肺癌患者EGFR突变检测及其临床特征

目的：检测表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor, EGFR）在间变性淋巴瘤激酶（anaplastic lymphoma kinase, ALK）融合基因突变的原发性肺癌（primary lung cancer）人群中的突变率,并分析其与病人临床病理特征间的关系。方法：入选的 106例病例均为中国西北五省人群,且经ALK 融合基因检测为阳性。将106 例患者的组织标本采用ARMS 方法检测EGFR基因 18-21 外显子的突变情况,统计分析双突变患者的临床病理特征。结果：106 例ALK 融合基因突变阳性的原发性肺癌患者的组织 标本,有7 例（6.6 %）同时存在EGFR突变,其中19 外显子缺失突变（19-del）的3 例（42.9 %）,L858R突变的2 例（28.5 %）,L861Q 和G719X 突变的各1 例（14.3 %）;7 例ALK 和双突变的患者中ALK 融合基因的突变均为EML4-ALK突变亚型1 （variant 1, V1）。7 例双阳性的患者中,6 例患者的年龄小于总体患者的中位年龄（53 岁),占85.7 %;男性患者4 例,占57.1 %;不吸 烟患者7 例,占100 %;腺癌患者4 例,占57.1 %,其中女性3例;肉瘤样癌2例,占28.6 %;粘液表皮样癌1例,占14.3 %。结论： EML4-ALK融合基因和EGFR突变能够共存,在EML4-ALK阳性的肺癌患者中,EGFR的突变率为6.6 %,双突变的患者大多年 轻且均无吸烟史,且双突变的女性患者均为腺癌。     

利用定点突变分析白念珠菌依赖铁基因FRP1启动子元件

通过对白念珠菌高铁还原酶基因FRP1启动子进行突变分析, 确认启动子中特殊调控元件。我们通过分析FRP1起始密码子上游1000 bp序列发现在-160 和-650处有2个推测的Rim101p结合位点, 对其分别进行定点突变, 然后构建启动子与报告基因LacZ融合质粒, 转化整合到白念珠菌rim101-/-株和野生株中, 检测不同缺铁条件下b-半乳糖苷酶活性。结果发现碱性条件, Rim101p能够正向调控FRP1的表达; 启动子-160处突变对启动子功能影响较弱, 而-650突变使启动子活性大大降低, 此结果和双突变的结果相同, 表明Rim101p主要通过与启动子-650处结合位点相互作用来调控FRP1的表达。     

纳米金在基因突变检测及SNP分析中的应用

对特异核苷酸序列的高选择性检测在生物医学研究和临床检测中日趋重要. 纳米金特殊的光学性质、电学性质、化学性质、以及良好的生物相容性,使之成为检测生物大分子的首选工具.本文介绍了几种典型的基因突变检测及单核苷酸多态性(SNP)分析系统：基因芯片、生物传感器和光学检测系统.综述了多种颇有新意的检测方法和原理,详细阐明了它们的检测机制和研究进展,分析并比较了纳米金不同的作用方式,为纳米金在突变检测上的进一步研究提供了一定思路和参考.     

基于纳米颗粒的基因突变检测方法研究进展

基因突变是指在分子结构上发生碱基对的组成或排列顺序的改变.它与人类疾病的发生息息相关,一直以来备受关注,开发准确可靠的检测方法,进一步探索核酸功能调控以及相关疾病的早期发现和治疗是研究人员不断努力的方向.近年来,纳米颗粒因其优异的光学、电学和生物相容性,在生物医学领域得到广泛应用.首次系统地论述基于纳米颗粒在基因突变检...     

基于核酸侵入反应的基因突变检测方法研究进展

肿瘤靶向药物治疗需要检测特异性的基因突变。尽管已开发出多种基于模板扩增的基因突变检测方法,但由于存在扩增产物交叉污 染的风险,其应用受到极大限制。基于信号扩增的核酸侵入反应,由于不存在扩增产物污染的风险,并且具有良好的单碱基识别特异性, 非常适用于基因突变的检测。因此,一系列基于核酸侵入反应的基因突变检测方法应运而生。综述若干基于核酸侵入反应的基因突变检测 方法原理与应用研究。     

基于焦磷酸测序技术的 基因突变检测在精准医疗中的应用研究进展

基因突变检测在肿瘤等疾病的早期诊断、个体化给药指导、疾病治疗进程与耐药监控等方面具有极其重要的意义。随着测序技术的 不断发展,DNA 突变的检测与分析已为病毒感染、血液病和实体瘤等疾病的个体化诊治提供重要参考。焦磷酸测序技术是一种基于生物发 光法测定焦磷酸盐的实时 DNA 测序技术,其用于 DNA 序列分析时不需电泳和荧光标记,定量性能好,结果准确,易于实现自动化,在基 因突变检测分析与肿瘤等疾病诊治中发挥巨大作用。综述基于焦磷酸测序技术的基因突变检测在分子靶向个体化治疗和疾病诊断中的应用 研究进展。     

Mutation detection in the breast cancer gene BRCA1 using the protein truncation test

About 400 distinct mutations have been defined in the BRCA1 gene, and these are spread fairly evenly through the 5592 bp of coding DNA. This circumstance presents a formidable challenge for mutation screening. Apart from total direct sequencing, the preferred screening method has been single-strand conformation polymorphism (SSCP) gels, with a smaller input from constant denaturant gradient electrophoresis (CDGE), heteroduplex (HD) analysis, and mismatch cleavage. The protein truncation test (PTT) was used early in BRCA1 mutation screening but has not been widely adopted, perhaps because a straightforward analysis of the whole BRCA1 gene requires working with RNA and all its perceived problems. The present work was undertaken to assess the practicality of using the PTT under routine conditions for the screening of long genes such as BRCA1 that are not highly expressed in lymphocytes. We conclude that, provided RNA preparation is carried out effectively and consistently, the PTT approach has significant advantages over other methodologies such as SSCP gels.