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以对硝基苯糖苷基为底物,测定了慈菇的12种糖苷酶,其中α-甘露糖苷酶、α-和β-半乳糖苷酶活力较高;经硫酸铵分级沉淀,SephadexG-150分子筛层析,ConASepharose4B亲和层析,DEAE-SepharoseCL-6B离子交换层析,从慈菇抽提液纯化了α-半乳糖苷酶。纯化酶的比活提高1072倍,活力回收15.6%,在圆盘聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS-PAGE上均显示1条蛋白质带,在α-半乳糖苷酶浓度为150mU/ml的溶液中测不到其他糖苷酶的活力。慈菇α-半乳糖苷酶的分子量用SephadexG-100凝胶过滤柱测定或在SDS-PAGE上测定均为60kD,酶反应的最适pH在5.8附近,最适温度为60℃。该酶分解对硝基苯基-α-半乳糖苷的K_m值为3.7×10 ̄(-4)mol/L,V_m值为2.1×10 ̄(-4)mol/L。银离子、汞离子显著抑制酶活力,D-半乳糖和密二糖均竞争性地抑制该酶水解对硝基苯基α-D-半乳糖苷的活力,根据Dixon作图求得其K_i值分别为0.92×10 ̄(-3)mol/L和1.98×10 ̄(-3)mol/L。2-脱氧-D-半乳糖和L-岩藻糖为酶活力的非竞争性抑制剂。化学修饰 相似文献
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牛生长激素释放因子的融合表达及其产物的化学加工 总被引:2,自引:0,他引:2
通过寡核苷酸引导的定位突变,在人工全合成的第27位为Ile的牛生长激素释放因子[Ile27]bGRF(1-44)OH基因的5'端ATG后插入Trp密码子序列,并分别了构建了Pl promoter控制下、以β-半乳糖苷酶和protein A结合IgG domainB、C为载体蛋白的融合型基因表达质粒pBLE310和pBLPAE2D,在大肠杆菌中得到高效表达。经SDS-PAGE分析,表达产物β-Gal 相似文献
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慈菇(Sagittaria safittifolia)α—半乳糖苷酶的纯化与性质 总被引:1,自引:0,他引:1
以对硝基苯糖苷基为底物,测定了慈菇的12种糖苷酶,其中α-甘露糖苷酶,α-和β-半乳糖苷酶活力较高,经硫酸铵分级沉淀,SephadexG-150分子筛层析,ConA-Sepharose4B亲和层析,DEAE-SepharoseCL-6B离子交换层析,从慈菇抽提液纯化了α-半乳糖苷酶,纯化酶的比活提高1072倍,活力回收15.6%,在圆盘聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS-PAGE上均显示了1条蛋白质带,在 相似文献
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中国林蛙乳酸脱氢酶多基因系统及基因间连锁关系的研究 总被引:4,自引:0,他引:4
(1)用聚丙烯酰胺凝胶电泳对山西产中国林蛙4个地理群的333只林蛙进行了分析,结果表明:中国林蛙的LDH由LDH-A,LDH-B和LDH-C3个基因决定。LDH-A是单态座位,LDH-B和LDH-C均为多态座位,每个多态座位均有两个等位基因。LDH-B与LDH-C呈紧密连锁关系。认为LDH-C是LDH-B的重复产物。(2)热稳定性、尿素处理稳定性及组织特异性研究表明:LDH对温度和尿素处理稳定性顺序为A4>B’4>B4>C4。A4在骨骼肌和肝脏等组织中活力最大,B4在心肌和卵巢中活力最强,LDH-C主要在眼球和卵巢中表达。(3)Ldh-b和Ldh-b'在不同地理群间呈差异分布,随着纬度的增高,Ldh-b在种群中的频率增大。 相似文献
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番茄叶片胞外β-N-乙酰氨基己糖苷酶的部分性质研究 总被引:1,自引:0,他引:1
用从系统感染TMV(tobacco m osaic virus)的番茄叶胞外蛋白提取液中纯化的β-N-乙酰氨基己糖苷酶为材料,研究了该酶的部分性质。以p-硝基苯基-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(pNP-β-D-GlcNAc)或p-硝基苯基-N-乙酰-β-D-氨基半乳糖苷(pNP-β-D-GalNAc)为底物,该酶的最适pH在4.8—5.0 之间,最适温度在44—47℃之间。对酶的热稳定性研究表明,温度对酶的热变性作用表现为两相变性曲线,Km 值分别为0.36 m m ol/L (pNP-β-D-GlcNAc为底物)和0.67 m m ol/L (pNP-β-D-GalNAc 为底物),N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)和N-乙酰氨基半乳糖(GalNAc)是酶活性的竞争性抑制剂,Ag+ 和Hg2+ 是酶活性的强抑制剂,金属离子Fe2+ 、Fe3+ 和Cu2+ 也抑制酶活性。 相似文献
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白色念珠菌CRK1基因的敲除及其功能研究 总被引:8,自引:4,他引:4
在筛选白色念珠菌促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)相关蛋白激酶基因的过程中,得到了CRK1(CDC2-related protein kinase 1)基因。利用同源重组原理,敲除了CRK1双拷贝基因片段,构建了CRK1纯合缺失株,发现CRK1基因的缺失影响到白色念珠菌的生长速度,絮凝生长和形态发生。 相似文献
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单纯疱疹病毒I型扩增子系列载体的构建 总被引:3,自引:0,他引:3
我们先前已报道了构建成一种能在HSV tsK株辅助下进行复制和包装,并表达β-半乳糖苷酶基因lacZ的HSV-1扩增子质粒pHSL,以及它的应用。该质料中依次含有HSV-1复制起点oriS序列及IE68启动子、lacZ基因、SV40polyA、HSV-1包装信号‘a’序列和大肠杆菌质粒骨架。然而,该质粒中的报告基因lacZ无法用简单的酶切方法卸载下来,继而装入目的基因。本研究在此基础上,新构建了一 相似文献
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用PCR方法取得乳酸克鲁维酵母CBS141和LAC4基因从-661到=21bp区段与大肠杆菌lacZ基因融合构建成表达载体YFD114并转化K.lactisY167。通过半乳糖,乳糖,山梨醇或IPTG诱导,我们研究了所克隆的ALC4启动子的功能。 相似文献
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从单纯疱疹病毒I型HSV-1基因组中分离出其包装信号序列,与含HSV-1复制起点及IE-68基因启动子的DNA序列、β半乳糖苷酶基因和大肠杆菌质粒骨架,构建了一种HSV-1扩增子质粒载体pHSL,其中LacZ基因置于IE-68基因启动子控制下。将此质粒转染已感染了HSV-1温度敏感株tsK株的Vero细胞,pHSL可在HSV-1tsK的辅助下包装成假病毒颗粒,这样就可得到同时含有假病毒和HSV-1 相似文献