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《生物技术通报》2000,(6)
00 0 111生物信息学技术克隆人类神经髓鞘蛋白零家族基因 [中 ]/唐冬生…∥生物化学与生物物理学报 .- 2 0 0 0 ,32 (4 ) .- 36 4~36 8为克隆新的髓鞘蛋白相关基因 ,将MPZ基因编码区cDNA序列与EST数据库进行同源性比较 ,得到与MPZ显著相似的 2个EST ,构建成 80 1bp的重叠群。此重叠群与定位在 1q2 4的 12 8kbgDNA的相似性为 10 0 %。计算机分析表明 80 1bp的重叠群可能存在一个 435bp的阅读框架。在重叠群上设计两个引物与文库载体臂上的引物配对 ,扩增各种cDNA文库DNA作巢式PCR。在所得cDNA上… 相似文献
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将鼠二甲基甘氨脱氨酶样基因(imethylglycinedehydrogenase-likegene)的部分 编码序列对EST数据库进行同源性分析,得到与其显著相似的1个人EST(GenBankH28856)(330bp)。此EST与9q34上的2个gDNA的文库中载体臂上上两端的引物PCR,在所得cDNA上再设计引物与cDNA文库载体臂上引物PCR,最终在肝cDNA文库获得1个完整编码区的cDN 相似文献
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以日本血吸虫成虫RNA为模板逆转录合成cDNA链,设计合成引物,用PCR法扩增谷胱甘肽转移酶(GST) 基因编码序列,将其克隆入pGEM—T载体,并进行初步鉴定。pGEM—T—GST克隆载体的成功构建,为进一步选择在不同表达系统中表达GST及其在血吸虫病免疫诊断、免疫预防中的作用研究提供了条件 相似文献
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恒河猴Fas基因的克隆 总被引:1,自引:0,他引:1
目的研究猴艾滋病发病机制中细胞凋亡的作用,克隆凋亡相关基因Fas的cDNA序列。方法从恒河猴腹股沟淋巴结中提取总RNA,根据人的Fas cDNA序列设计上、下游引物,通过RT-PCR扩增出目的cDNA片段,将这一片段克隆到pGFM-T Easy载体中,筛选阳性克隆并进行序列测定。结果首次克隆了恒河猴Fas基因,编码序列为1005 bp,将其序列提交GenBank,收录号为AY007572。结论克隆的新序列与GenBank已收录的人和食蟹猴的Fas基因在编码序列的长度上稍有区别,人的编码序列为1008bp,食蟹猴的为996 bp。 相似文献
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本文发展了PCR克隆和亚克隆技术制备DNA测序模板。首先,我们用pUC/M13系列质粒的通用正反向引物PCR扩增出质粒pBluescriptKSDNA的多克隆位点及其侧翼序列,用EcoRV和XhoI消化成为左右两个引物多克隆臂,与粘虫核型多角体病毒(LsNPV)的EcoRV和XhoI约400bp和500bp片段分别连接,经PCR扩增,得到两端具有上述正反向引物结合位点的测序模板,用ddNTP链终止法/PCR扩增/银染色,从片段两端测定了全部919bp序列,这种ddNTP/PCR/银染测序法简化了操作,大大缩短了测序模板的制备时间,易于实现自动化操作。 相似文献
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000111 生物信息学技术克隆人类神经髓鞘蛋白零家族基因[中]/唐冬生…//生物化学与生物物理学报.-2000,32(4).-364-368 为克隆新的髓鞘蛋白相关基因,将MPZ基因编码区Cdna序列与EST数据库进行同源性比较,得到与MPZ显著相似的2个EST,构建成801 bp的重叠群.此重叠群与定位在1q24的128kb Gdna的相似性为100%.计算机分析表明801 bp的重叠群可能存在一个435 bp的阅读框架.在重叠群上设计两个引物与文库载体臂上的引物配对,扩增各种Cdna文库DNAW和巢式PCR. 相似文献
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用富集文库克隆人胰岛素基因组基因 总被引:1,自引:0,他引:1
通过构建可富集人胰岛素基因的λ噬菌体文库,克隆了人胰岛素基因组基因.首先从中国人血液白细胞中提取到人基因组DNA,用EcoRⅠ和BglⅡ对基因组DNA进行全酶切,经0.4%琼脂糖凝胶电泳,特异回收9.5kb左右的DNA片段.将该片段与λEMBL3/BamHⅠ臂连接,构建成一个特殊的人基因组λ噬菌体文库(富集文库),效价为2×104.同时采用PCR方法及用引物Ⅰ:5′GGACAGGCTACATCAGGAAGAGG3′,引物Ⅱ:5′CTGCGTCTAATTGCAGTAGTTC3′,从人基因组DNA中扩增出一段含胰岛素基因的1.36kbDNA片段,做为放射性标记探针,对文库进行了噬菌斑原位杂交筛选,从1×104个噬菌斑中筛选到一个含人胰岛素基因组基因的阳性克隆,并进一步完成了亚克隆和该基因1732bpDNA序列的测定.结果该基因的1732bpDNA序列包括部分5′端和3′端与国外发表的人胰岛素α型等位基因的序列相同 相似文献
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PCR——四步两段扩增法分离人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)基因 总被引:2,自引:0,他引:2
引物是决定PCR结果的关键,本实验中,引物Ⅰ,Ⅱ虽有26个碱基,但由于其5′端有8个碱基为限制性内切酶的识别序列,所以实际上只有18个碱基与原始模板互补配对,采用标准的PCR方法时不能产生理想结果,经采用PCR-四步两段扩增法从人胎盘cDNA文库中分离得到了-484bp的DNA片段。通过斑点杂交鉴定,结果表明该DNA片段为hbFGF基因。 相似文献
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本文发展了PCR克隆和亚克隆技术制备DNA测序模板。首先,我们用pUC/M13系列质粒的通用正反向引物PCR扩增出质粒pBluescriptKS DNA的多克隆位点及其侧冀序列,用EcoRV和XhoI消化成为左右两个引物多克隆臂,与粘虫核多角体病毒(LsNPV)的EooRV和XhoI约400bp和500bp片段分别连接,经PCR扩增,得到两端具有上述正反向引物结合位点的测序模板,用ddNTP链终点 相似文献
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为从多发性骨髓瘤细胞中克隆与鉴定恶性相关基因并试图阐明其发病分子机制,建立了一种改进的快速表达克隆法,简单、快捷、直接从多发性骨髓瘤细胞株ARH-77 cDNA文库中克隆恶性相关基因。其特点是常用的表达克隆法与经典的DNA介导的NIH/3T3转染实验相结合,直接从cDNA表达文库中克隆恶性相关基因。首先建立高质量的cDNA表达文库,将cDNA表达文库分成几个基因池,转染NIH/3T3细胞;将转化活性最强的基因池再分成几个亚基因池,转染NIH/3T3细胞;将转化活性最强的亚基因池再分成次级亚基因池,直到获得有明显转化活性的单个cDNA克隆。该技术亦可用于从其他肿瘤细胞中克隆恶性相关基因。 相似文献
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核糖核酸酶barnase基因的克隆策略研究 总被引:1,自引:0,他引:1
比较了目前报道的两种克隆barnase基因的方法——barnase基因的单独克隆和barnase抑制剂基因保护下的barnase基因克隆。分别利用4种质粒进行barnase基因的单独克隆时,得到的阳性克隆数量少。对其中15个阳性克隆进行了测序分析,结果有5个克降出现碱基缺失,1个克隆出现碱基增加,其余9个克隆则出现氨基酸突变,均未得到氨基酸序列完正确的克隆。进一步分析表明这些突变的位点大多直接与保持barnase蛋白的活性位点相关。而在克隆barnase基因之前,预先将barnase基因连同其自身启动了加载于待克隆载体上,随后再进行barnase基因克隆时则容易得到与报道的barnase基因序列完全一致的阳性克隆。分析认为由于barnase基因单独存在时有一定数世的蛋白表达,宿主菌大肠杆菌无法忍受而通过某种方式造成其barnase发生相应突变而无法实现barnase基因的单独克隆。因此有必要利用barnase基因的保护来进行barnase基因相应的克降和遗传操作。 相似文献
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仲如 《中国生物化学与分子生物学报》1986,2(2):59-64
从人基因库中分离得到的两个含有不同变种组蛋白H_1基因的λ克隆(λHh8和λHh9),分别把它们含有该基因的片段(8c和9a)插入载体puc8质粒中,得到了亚克隆pHh8c和pHh9a。对这两个人组蛋白H_1基因的启动子(Promoter)和部份编码蛋白质的区域作了核苷酸顺序的分析和比较,确定了它们的启动要素和同系顺序。 相似文献
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DNA重组技术,即DNA克隆技术的研究和运用是现代生物学发展的一个重要分支,是分子生物学发展的突出领域。本文介绍了DNA重组的类型及相关的生物学概念;综述了目前已报道的传统的酶切-连接经典克隆方法、位点特异性重组克隆方法、以及同源重组克隆方法,重点阐述了各自的原理、步骤、特点及实际应用等方面;最后归纳总结了各种方法的优缺点和应用范围,并对该技术的科研成果进行了回顾和对未来的研究进行了展望。 相似文献
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植物防御系统中抗病相关基因的研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
本文论述了植物防御系统中抗病相关基因(resistance gene,R基因)的研究进展。列表总结了迄今已克隆的R基因,并将其归为四种不同的类型。综述了不同基因表达产物-R蛋白在细胞中的定位及其相应的功能。此外,还对R基因编码区的多态性、R基因在染色体上排列方式以及R基因的进化与起源等问题进行了讨论。
Abstract:This review comments on recent advances in research of disease resistance genes(R Genes) in defence system of plants.The R genes cloned up to date are summarized and classified roughly into four classes listed in the Table 1.The location and the founction of the R proteins,i.e.,the expressed products of different R genes in the cells are reviewed.In addition,the polymophism of coding region of R genes,the different fashions of R gene arrangement on the chromosomes,and the evolution and origin of R genes are discussed. 相似文献
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植物甜蛋白brazzein基因的克隆与表达 总被引:2,自引:0,他引:2
根据大肠杆菌偏爱的密码子,利用PCR技术体外人工合成brazzein cDNA序列,并将其克隆至原核高效表达载体pET30a( )中。重组载体pET30a( )-brazzein转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导后,SDS-PAGE结果证明pET30a( )-brazzein在大肠杆菌中获得高效表达,目的蛋白占总菌体蛋白25%左右。 相似文献