肺炎支原体P1重组蛋白的提取纯化及应用研究

提取纯化肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)P1重组蛋白,建立酶联免疫吸附实验(ELISA)的方法,协助临床肺炎支原体感染的诊断。以GST融合蛋白层析柱提取、纯化Mp P1重组蛋白做抗原,以全肺炎支原体菌体成分做抗原对照,建立间接ELISA实验方法,检测40份正常献血者血清标本和51份疑似MP感染临床血清标本的IgG抗体。重组蛋白经SDS-PAGE可见诱导表达的样品在分子量大约59 ku处有明显条带,经Western blotting可与肺炎支原体免疫血清发生反应。ELISA实验检测51份临床标本,由P1重组蛋白抗原检测阳性31份,阳性率为60.78%。Mp检测阳性20份,阳性率为39.22%。实验精确度检测阳性混合血清的变异系数(CV值)为5.40%,阴性混合血清变异系数为1.10%。用Mp P1重组蛋白抗原建立的ELISA检测方法,其敏感性高于全肺炎支原体抗原,可用于临床肺炎支原体感染的诊断。     

传染病医院血清标本库系统建设

血清标本库是组织库的一种,血清样本是十分重要的临床病例原始资料,对病例回访追踪、科研教学都是重要的资源,尤其是对传染病医院来说,在确认疫情性质、追踪传染病的来源、明确潜在的传染源、为感染者寻找有效的治疗措施等方面发挥着重要的作用,很多新发突发传染病的血清标本本身就是极其重要的第一手临床资料,因此,建设、完善和管理专业的血清标本库对医院甚至对国家来说都是具有战略意义的.我们根据我院自身情况,基于网络数据技术在原有血清库的基础上自行开发研制了血清标本库系统,包括外部浏览使用和内部管理两大部分,在冰箱管理、数据同步、外部浏览方面较前做了很大改进,可以快捷地管理、查询、取用血清标本,本文就其设计、使用及特点等方面做简单介绍.     

念珠菌性阴道炎抗体检测及临床意义初探

近年来,国外对干体液免疫应答与念珠菌感染的关系有了新的了解,但国内目前报道较少。根据念珠菌感染后抗体产生的情况,了解抗念珠菌的体液免疫应答及临床意义。为此我们进行了实验以求探讨,现将实验方法及结果报道如下。1材料与方法】．】病入健康人标本11例复发性念珠菌性阴道炎病人的血清标本、阴道分泌液标本,来自郴州市妇幼保健站和本校附属医院妇科。13例健康女性（排除IgA减少症和先天性IgA异常）的血清标本。阴道分泌物标本,来自本校职工和学生1．2试剂1．2．1血清lgA含量测定所用单向琼脂扩散试验盒,购于北京生物制品研究…     

用滤纸血片法检测乙型肝炎

用滤纸血片做反向间接血凝检测乙型肝炎表面抗原HBsAg,其结果与血清标本是一致的。为了进行大面积乙肝检测,我们对滤纸血片和血清标本同时进行对比观察其结果如下。一材料与方法 1 标本采集份数:计450份。 2 滤纸血片:滤纸系中国杭州新华造纸厂制。直径11cm,滤纸分四等份,每份滴一人血液两滴,每滴直径>9mm。     

引导学生做家庭小实验

学生做家庭小实验是学校实验教学的补充 ,是培养学生实验能力的有效途径。我在近1 0余年先后在初中的生物教学中尝试引导学生做家庭小实验 ,收到了较好的效果。布置学生做家庭小实验的原则是“自愿与鼓励相结合”。做了实验的同学 ,老师在课堂上给予肯定、表扬 ,优秀者期末给予加分鼓励。对学生制作的植物标本册和动物标本 ,每年度举办展览。学生家庭小实验的布置与检查 :家庭小实验紧密结合课堂教学内容 ,通常是提前布置实验内容 ,待到上该课内容时 ,在课堂上询问了解哪些人做了实验 ,并请同学报告实验结果 ,或者当众展示实验材料。例如 ,…     

光敏生物素标记cDNA探针在肾综合征出血热实验诊断中的初步应用

本文用光敏生物素标记的R3 cDNA探针杂交检测了HFRS患者外周血淋巴细胞、血清和尿沉淀细胞中HFRS病毒核酸。结果42份淋巴细胞标本中30份为阳性,48份血清标本中有24份出现阳性杂交信号,81份尿沉淀细胞标本中53份为阳性,表明将此光敏生物素标记的cDNA探针用于HFRS实验诊断和致病机理的研究是可行的。     

浙江省献血员HGV和TTV感染情况的调查

应用逆转录套式聚合酶链反应(RT-Nested PCR)和半套式聚合酶链反应(Semi-nested PCR)分别检测来自浙江省3个地区165例献血员血清标本中的庚型肝炎病毒(HGV)RNA和输血传播性病毒(TTV)DNA.14.6%(24/165)和12.7%(21/165)的血清标本分别检出HGV RNA和TTV DNA,其中3.6%的血清标本(6/165)可同时检出HGV RNA和TTV DNA.实验结果表明,浙江省献血员中HGV和TTV的感染率较高.     

对采集制作昆虫标本实验教学的几点改进

在初中生物实验教学中,采集和制作昆虫标本是学生必做的一个实验,但是由于昆虫纲一节内容的教学时间与昆虫的生活季节不同步,加之学生普遍缺少毒瓶、展翅板,标本盒等用具,致使该实验难以完成。为了保证这一实验教学的顺利进行,我在教学时间、教学方式和昆虫标本的制作方法及用具上做了一些改进,并取得了较好的效果,现将其做法简述如下。     

Dot-ELISA检测莱姆病血清抗体的实验研究

经实验研究,建立了检测莱姆病血清IgG的Dot-ELISA方法。阻断试验表明,本法具有特异性。经对10例伯氏疏螺旋体人工感染兔血清和24例正常兔血清标本的检测证实,该法与常规ELISA法检测的符合率为100％。重复性试验表明其重复性良好。     

Dot-ELISA检测莱姆病血清抗体的实验研究

经实验研究,建立了检测莱姆病血清IgG的Dot-ELISA方法。阻断试验表明,本法具有特异性。经对10例伯氏疏螺旋体人工感染兔血清和24例正常兔血清标本的检测证实,该法与常规ELISA法检测的符合率为100％。重复性试验表明其重复性良好。     

基于滚环扩增的鸭乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA检测方法的建立

滚环扩增(RCA)是新近发展起来的一种能特异性扩增环形DNA的实验技术,自2008年以来被广泛用于HBV基因全长扩增及共价闭合环状DNA(cccDNA)耐药突变分析等研究。为了便于鸭乙型肝炎病毒(DHBV)cccDNA的分析,本研究建立了基于RCA的DHBV cccDNA的检测方法。通过针对DHBV高度保守序列设计的4对RCA硫化修饰引物,以血清DHBV DNA为阴性对照,从肝组织DHBV DNA标本中扩增得到DHBV cccDNA。然后用跨缺口引物扩增RCA产物测序替代限制性内切酶切分析进行DHBV cccDNA鉴定。应用该方法检测39份携带DHBV麻鸭肝组织与血清标本结果显示:全部肝组织标本均检出DHBV cccDNA,而全部血清标本则均无DHBV cccDNA检出,表明本研究建立的基于RCA的DHBV cccDNA检测法具有良好的特异性和灵敏性。该方法的建立为应用鸭乙型肝炎病毒动物模型研究cccDNA在病毒致病机制中的作用以及评价抗病毒疗效奠定了实验基础。     

浅谈制玻片标本时固定液的使用

浅谈制玻片标本时固定液的使用李建英（河北省葶城市实验学校）我在制玻片标本过程中,配制固定剂时得出了以下一点体会１用１０％的福尔马林做固定剂时,材料强烈收缩,效果不好。２用７０—８０％的酒清做固定剂,不但材料变硬,而且收缩也很剧烈,效果也不好。３用５０...     

应用核酸斑点杂交法检查正常分娩期妇女尿中人巨细胞病毒DNA

用α-~(32)P-dcTP标记人巨细胞病毒(Cytomegalovirus Human type,简称HCMV)DNA片段做探针,用核酸杂交方法检测CMV DNA,其敏感性达Pg水平。并抽样检测了沈阳地区分娩期妇女尿标本。在25份标本中查出HCMV DNA阳性者占6份,排毒率24％,并对实验技术及实验结果进行了讨论。     

海南省普通高中生物科毕业会考实验考查标准的编制

(一)编制实验考查标准的指导思想把实验考查从单纯的理论考试中分离出来,单独进行,目的是为了克服重理论轻实践、重读书轻动手的偏向。在全日制中学《生物教学大纲》(修订本1990年)中明文规定:“要求学生使用显微镜,制作临时装片和徒手切片,做简单的生理实验,解剖动物,画植物和动物的简图,采集植物标本和昆虫标本,以及制作植物的蜡叶标本和昆虫标本的基本技术。”我们知道,提高学生的理论水平,主要是通过课堂教学形式来实现;加强学生的基本技能,则要通过学生参加实验、实习或其他实践活动来达到。生物学是     

变形杆菌诊断血清试制研究 Ⅲ、血清的实际应用——325株地方性菌株的鉴定结果

普通及奇异变形杆菌诊断血清试制工作的同时,即收集了一批地方性菌株,主要目的为检验血清的特异性。其中有部份具有新的O或H抗原的菌株也经过实验而得到证实,并试制了相应的O或H血清。同时,对325株变形杆菌进行了鉴定,其结果初步总结如下: 1.标本来源 325株变形株菌有以下几个来源。     

异羟基洋地黄毒甙元(Digoxigenin)标记的RNA探针在丁型肝炎病毒核酸杂交中的应用

应用异羟基洋地黄毒甙元(Digoxigenin)标记的RNA探针,检测了人和黑猩猩血清及肝脏中丁型肝炎病毒核酸,并与~(32)P标记同一探针做了比较。结果表明,异羟基洋地黄毒甙元标记的RNA探针的杂交效果与同位索探针一致(同源cDNA0.2pg),可用于人和动物血清及肝脏标本内HDV核酸的检测。     

对1983年夏季北京地区儿童中流行性咽结膜热病毒病因的研究

1983年夏季,北京地区儿童(以中小学生为主)中曾暴发流行咽结膜热。为探讨其病毒病因以便为临床提供诊断和防治依据,从8月10—31日在我院儿科门诊共采集患儿80份咽拭子标本和8份结膜拭子标本。同时对88例中的58例采集了双份血清,进一步做血清学试验来检测病毒,并进行了免疫荧光早期快速诊断病毒的试验。现将结果报道如下。     

人工合成多肽检测抗HIV－1和HIV－2抗体的研究

采用固相法合成ＨＩＶ－１和ＨＩＶ－２两个多肽,建立了用混合多肽为包被抗原检测ＨＩＶ－１和ＨＩＶ－２感染的间接酶联免疫吸附法。检测４６份抗ＨＩＶ－１和ＨＩＶ－２抗体阳性血清标本以及９４份对照血清标本,与ＵＢＩ试剂比较,其阳性符合率为９７．８％,阴性符合率为１００％,总符合率为９９．３％。实验结果表明,此法可用于ＨＩＶ－１和ＨＩＶ－２感染的检测。     

低浓度臭氧对小鼠生长发育的影响

目的研究低浓度臭氧对小鼠生长发育的影响。方法实验组小鼠和对照组小鼠分别在15w紫外灯照射产生的低浓度臭氧环境下和正常无臭氧环境下连续饲养7周,观察其体重变化;阴道涂片镜检观察雌性小鼠的动情周期。7周后,取脑、心、肝、脾、肺、肾等组织标本,做组织病理学分析;利用全自动生化分析仪对部分血清生化指标进行测定,利用放免试剂盒对血清性激素水平进行测定。结果实验组雌性小鼠体重与对照组雌性小鼠差异无统计学意义,实验组雄性小鼠体重比对照组雄性小鼠轻;实验组雌性小鼠的动情周期与对照组雌性小鼠差异无统计学意义;实验组与对照组小鼠的组织切片均未发现异常;实验组小鼠的血清生化指标以及血清性激素水平与对照组小鼠差异无统计学意义。结论本实验中紫外灯照射产生的低浓度臭氧对昆明小鼠的生长发育基本无影响。     

实验动物和公园动物中SARS病原来源调查初报

目的　调查SARS冠状病毒的动物来源。方法　用冠状病毒通用引物的反转录巢式PCR方法对采集的动物呼吸道分泌物或咽拭子标本进行检测 ,用血清学方法 (EIASA)对动物血清进行检测 ,确定阳性的初筛动物。结果　分别从各实验动物猴、犬饲养场、广州动物园共采集拭子标本 84份 ,包括的动物品种有猴、犬、小灵猫、果子狸、狒狒、巨蜥、滑鼠蛇、巴西龟、孔雀、鸭子、鸽子等 ,PCR方法检测 ,未检出SARS冠状病毒 ;另抽取 16个单位 3 73只小鼠和 9个单位 198只大鼠的血清 ,用ELISA方法检查 ,有 52只鼠检出鼠冠状病毒抗体。实验动物SARS冠状病毒的追溯研究是从根本上防治SARS病的重要环节之一。