研究核酸-蛋白质系统的-种凝胶电泳方法

核酸蛋白质相互作用是生命科学研究的中心课题之一,凝胶电泳是研究核酸和蛋白质的常用技术。本文试图介绍一种研究核酸-蛋白质系统的凝胶电泳方法,以及该法在研究基因表达、调控和鉴定、分离DNA结合蛋白中的应用。     

热带假丝酵母(Candida tropicalis)79微体蛋白质组分的分析研究

纯化的微体,经过渗透休克、反复洗涤,被分成微体膜和可溶性组分两部分。它们的蛋白质含量分别占微体蛋白质总量的70%和30%左右。酶学分析表明,过氧化氢酶和尿酸氧化酶主要分布在微体可溶性部分,NADH-细胞色素c还原酶(抗霉素不敏感型)可能是与微体膜相连结的蛋白质。用淀粉凝胶分离、普鲁士蓝染色的方法,在微体可溶性部分检出两种不同类型的过氧化氢酶。经SDS-PAGE分析,微体膜显示出25条蛋白亚基带,可溶性部分显示出21条蛋白亚基带。微体蛋白亚基分子量范围在14K～140K之间。其中,33K蛋白亚基是微体膜的主要结构蛋白;24K、26K和33K蛋白亚基为糖蛋白;63K和36K蛋白亚基分别是过氧化氢酶和尿酸氧化酶。在双相凝胶电泳图谱上,微体膜出现110个斑点,可溶性部分出现59个斑点。过氧化氢酶和尿酸氧化酶在双相凝胶电泳图谱中的位置都已确定。采用交叉免疫电泳的方法,研究了微体蛋白质在酵母生长过程中的变化。结果表明:热带假丝酵母79培养18小时,微体发育成熟;36小时后,微体开始降解。     

蛋白质组技术进展

蛋白质组研究是近年兴起的生命科学的前沿领域,是生命科学进入后基因组时代的标志之一。蛋白质组研究中的主要技术是双向凝胶电泳技术和质谱技术。本文简要综述了双向凝胶电泳和质谱技术的现状及存在的问题。     

蛋白质组分析技术进展

蛋白质组是指某一物种、个体、器官、组织、细胞乃至体液在精确控制其环境条件之下,特定时刻的全部蛋白质表达图谱。继基因组之后,综的研究即将成为分子生物学的研究热点,蛋白质组研究中常用分离分析技术包括样品制备,双向凝胶电泳,毛细管电泳,色谱技术和质谱技术。双向凝胶电泳是在较短时间内分离大量蛋白质组分,提供足够分离空间的比较成熟的方法。各种分离技术的连用和分析过程的自动化将是蛋白质组研究技术的发展方向。     

双向凝胶电泳的实验操作及进展

双向聚丙烯酰胺凝胶电泳是研究蛋白质组的核心技术,本文重点介绍了双向凝胶电泳的原理、实验操作过程中的具体步骤以及近年来在实验过程中发展的一些新方法和进展。     

用双相电泳技术分析棉酚对大鼠成熟精子蛋白质组成的影响

本文首次将双相电泳(等电聚焦和SDS电泳)技术应用于对棉酚作用机理的研究。实验结果表明,棉酚能够改变大鼠成熟精子的蛋白质组成;同时也证明,双相电泳这一技术对棉酚的研究是有效的。     

蛋白质组研究技术及其进展

蛋白质组学是在后基因时代出现的一个新的研究领域．它是对机体或组织或细胞的全部蛋白质的表达和功能模式进行研究。介绍并总结了蛋白质组研究的主要技术,包括双向凝胶电泳、质谱技术、蛋白质芯片和生物信息学等。     

一次淀粉凝胶电泳同时测定猪六种血清蛋白质多态性的简便方法

自从Smithies1955年发明淀粉凝胶电泳分离技术以来,国外已广泛应用此技术研究血清蛋白、乳蛋白、卵清蛋白和同功酶的多态性。而且在方法上不断改进,一次淀粉凝胶电泳所能测定的蛋白质种数也不断增加,由最初的一两种蛋白质增加到现在的五种蛋白质。我国在这方面的研究起步较晚。一些学者发现国产马铃薯淀粉用作凝胶电泳支持物效果不好,而进口水解淀粉价格昂贵,大量使用受到限制。为了解决这个问题,作者参考有关文献资料,结合自己的实验体会加以改进,建立了用国产马铃薯淀粉,一次淀粉凝胶电泳同时测定猪转铁蛋白(Tf)、血液结合素(Hpx)、前白蛋白(Pa)、后自蛋白(Po)、铜蓝蛋白(Cp)、淀粉酶(Am)、多态性的简便方法。     

蛋白质组研究中的分析技术

蛋白质组分析技术已在生物科学各领域被广泛应用,蛋白质组的研究已成为目前国际上的前沿和研究热点。概述了蛋白质组研究中的常用分析技术,包括样品制备、双向凝胶电泳、凝胶图像分析、质谱鉴定及数据库检索等。直观地列出了蛋白质组研究的技术体系流程图。各种分析技术的连用和分析过程的自动化将是蛋白质组研究技术的发展方向。     

蛋白质组阵列技术的现状与展望

蛋白质组就是展示一个细胞或组织或机体的全部蛋白质。目前双向凝胶电泳特别是固相pH梯度等电聚焦的双向聚丙烯酰胺凝胶电泳,是分离阵列蛋白质组成分的核心技术,但仍存在诸多不足,通过改善蛋白溶解、阵列策略和蛋白斑点的探测技术,使蛋白质组阵列技术取得了进展。     

板栗疫病菌致病性机理的双向凝胶电泳法研究

双向凝胶电泳技术是蛋白质组学研究的基础性技术平台。如何得到一张高质量的双向凝胶电泳图谱是进行后续研究的关键。为探索适用于板栗疫病菌可溶性总蛋白的最佳提取条件,从蛋白组学角度来探索板栗疫病菌致病性机理,比较了目前在丝状真菌中常用的两种蛋白质提取方法,制备的蛋白质样品经双向凝胶电泳后,在凝胶上呈现的蛋白质斑点的丰度和分布特点。结果表明,两种方法获得的蛋白质主要集中分布在pH4~7的范围内;TCA-丙酮沉淀法得到的图谱分辨率高但是蛋白质总量很少。裂解液-TCA-丙酮沉淀法得到的蛋白质总量较大,通过cleanupkit处理后图谱分辨率可以达到差异蛋白组的要求。随机提取几个银染蛋白点用MALDI-TOFMS/MS进行分析,可以得到高质量的肽质量指纹谱。表明该样品制备方法可以满足蛋白质鉴定的要求。     

适用于双向电泳的杨树叶片蛋白质提取方法的研究

为了获得分离效果好、清晰度高的杨树叶片蛋白质双向电泳图像,本研究以小黑杨、毛果杨和84K杨叶片为材料,采用三氯乙酸—丙酮沉淀法、Tris-饱和酚法和Tris-三氯乙酸法提取杨树叶片总蛋白质,分别采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和双向凝胶电泳对蛋白质进行分离,应用Image Master 2D Platinum 6.0软件对这3种蛋白质提取方法得到的双向电泳凝胶进行分析。结果表明:Tris-三氯乙酸法最适用于双向电泳的杨树叶片蛋白质的提取。利用Tris-三氯乙酸法提取蛋白质得到的鲜样中总蛋白质平均含量为949.46μg·g-1,得到的蛋白质点平均数量为567个,所得到的双向电泳凝胶图谱分离效果好、清晰度高。     

蛋白质芯片及其应用

人类基因组计划的实施和大量珍贵的功能基因组数据的获得,使得蛋白质的研究显得越发重要。蛋白质芯片技术的出现为我们提供了一种较传统的凝胶电泳技术更为方便和快速的研究方法。     

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量

Shapiro于1967年首次报告了SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳系统,根据他对11种蛋白质电泳获得的结果,发现蛋白质(或亚基)分子量的对数与蛋白质分子的迁移率之间有直线关系。Weber等人的深入研究,肯定了Shapiro的发现,确立了SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量的新方法。 Shapiro和Weber所应用的SDS-凝胶电泳缓冲系统为连续的磷酸盐系统,后来     

植物蛋白质组学面临的挑战和前景

目前功能基因组研究开展得如火如荼 ,蛋白质组研究是阐明基因组所表达的真正执行生命活动的全部蛋白质的表达规律和生物功能 ,而植物蛋白质组研究是 2 1世纪整体细胞生物学最重要的内容 ,将为医药、农业和工业的革新提供崭新的思路。当前主要的研究手段为双向凝胶电泳、双向高效柱层析、质谱分析和生物信息学     

蛋白质组研究的技术体系及其进展

随着后基因组时代的到来,蛋白质组研究越来越受到国内外科学工作者的密切关注, 我国国家自然科学基金委员会已把蛋白质组研究列为重大科研项目.概述了蛋白质组研究中的基本技术,包括双向凝胶电泳的样品制备和分离、蛋白质的检测、凝胶图像分析、蛋白质的鉴定以及蛋白质数据库构建等,并就蛋白质鉴定的常用方法如氨基酸组成分析方法、蛋白质末端序列分析、肽质量指纹谱作了详细阐述.直观地列出了蛋白质组研究的技术体系流程图,着重介绍了蛋白质组研究的最新技术及其进展.     

蛋白质组学研究中的分离分析技术及其研究进展

在后基因组时代,蛋白质组学成为新的研究热点。蛋白质组学的研究目标是为复杂蛋白质样品建立一个高通量、大规模、自动化的分离分析技术平台,从而实现准确、快速地筛选功能蛋白质。蛋白质的分离分析在蛋白组学研究中起着非常重要的作用。本文主要综述在蛋白质组学研究中二维凝胶电泳、毛细管电泳及其与质谱联用、多维液相分离技术及其与质谱联用和蛋白质芯片等高效分离分析技术的应用研究进展。     

蛋白质组学研究技术及其在植物抗渗透胁迫研究中的应用

蛋白质组学是功能基因组学研究的热点领域之一。该文介绍了蛋白质组学的基本的和新兴的研究技术方法如蛋白质组样品的制备、双向凝胶电泳、生物质谱技术、蛋白质芯片技术、酵母双杂交系统和生物信息学等,以及蛋白质组学技术在植物抗干旱、盐渍等渗透胁迫研究中的应用。     

应用超高分辨双向凝胶电泳技术进行正常人类肝脏蛋白质组研究

肝脏是人体最大的实质器官, 承担着人体许多关键的生理功能, 在生命活动中占有重要地位. 根据人类肝脏蛋白质组计划, 本实验旨在构建人肝脏蛋白质双向凝胶电泳表达谱, 尽可能分离和鉴定更多的蛋白. 在双向凝胶电泳第一向等电聚焦水平上, 从上样方式、水化液配方、聚焦时间等方面优化了碱性蛋白的分离条件, 利用超放大胶分离技术搭建了高分辨的双向凝胶电泳分离平台, 构建了人类肝脏蛋白质2-DE参考谱, 检测到5481个蛋白质点. 这是目前国际上最为全面的人体器官蛋白质组2-DE参考谱, 为其他肝病的研究提供了较好的参照系. 成功鉴定了429个非冗余蛋白, 对pH 4.0~7.0, 5.0~6.0, 5.5~6.7, 6.0~9.0部分蛋白质点在胶上进行了注释, 由此构建了人肝2-DE蛋白质表达谱数据库. 对蛋白质的理化性质、功能及亚细胞定位进行了全面分析. 研究中构建的人类肝脏蛋白质2-DE图谱将为肝脏比较蛋白质组学研究提供参考.     

蛋白质组学研究技术及其进展

蛋白质组学是在后基因组时代出现的一个新的研究领域,它是对机体、组织或细胞的全部蛋白质的表达和功能模式进行研究。对蛋白质组的研究可以使我们更容易接近对生命过程的认识。本文对蛋白质组学研究所使用的主要技术例如二维凝胶电泳、质谱、酵母双杂交、蛋白质芯片、表面等离子共振和生物信息学等作一简要综述。