人雄激素受体激素结合区cDNA片段在大肠杆菌中的克隆、表达及其活性检测

人雄激素受体(hAR)为甾体激素受体超家族的成员之一,由一条多肽链组成,分三个功能区:N端区、DNA结合区和激素结合区。C端的激素结合区,是与雄激素结合并介导其发挥生物学效应的关键区域,在目前导致男性两性畸形的主要疾病雄激素抵抗症的研究中发现,该区域内的基因突变是导致雄激素与hAR结合异常的主要原因,但这种由基因突变引起的结合异常的分子机制尚不清楚。根据由hARcDNA推演的氨基酸序列分析表明,hAR分子中不存在二硫键,且氨基酸残基上无糖基化修饰。 以前,由于hAR在组织中含量极低且极易     

甾体激素受体的提纯倍数与其纯度的关系

甾体激素受体是一类具有特殊生理功能的蛋白质。存在于生物体内的各种甾体激素受体,各自接受其专一性甾体激素的信息,例如雌激素受体只能与雌激素相结合,与孕激素等其它甾体激素不能结合。同时,这种受体的含量,极为稀少,据估计,靶细胞(受体含量最多的组织)匀浆内的受体只占总蛋白的十万分之一。因此,若不经过十万倍的提纯,就不能得到单一组分的纯受体,这和酶要经上千倍的纯化相     

甾体激素受体的提纯倍数与其纯度的关系

甾体激素受体是一类具有特殊生理功能的蛋白质.存在于生物体内的各种甾体激素受体,各自接受其专一性甾体激素的信息,例如雌激素受体只能与雌激素相结合,与孕激素等其它甾体激素不能结合.同时,这种受体的含量,极为稀少,据估计,靶细胞(受体含量最多的组织)匀浆内的受体只占总蛋白的十万分之一.因此,若不经过十万倍的提纯,就不能得到单一组分的纯受体,这和酶要经上千倍的纯化相比,受体的提纯就显得更加艰巨. 以上所指千倍万倍,就是生化分离技术中     

甾体激素受体功能特异性的结构基础

甾体激素受体家族包括雌激素受体、雄激素受体等五个亚家族,在机体组织细胞的生长分化、发育生殖、内环境稳定等几乎所有生理过程中都起着重要的作用。研究甾体激素受体亚家族的特异性可以加深对该家族功能的理解,并且具有潜在的临床应用价值。采用进化踪迹方法对该家族的配体结合域（LBD）进行分析,探讨了决定亚家族功能特异性的结构基础。结果表明,甾体激素受体的各亚家族可能同相应的内源性配体存在着共进化关系;配体结合处的踪迹残基决定了受体－配体间的氢键作用和疏水相互作用模式并导致了亚家族的配体结合特异性。上述结论可用于甾体激素受体的配体结合特异性的改造以及新型组织选择性配体（如选择性雌激素受体调节剂,SERM）的设计。     

神经活性甾体激素的快速中枢效应

过去认为甾体激素只能由神经系统外的内分泌组织产生。甾体激素的作用原理为经典的基因作用机制。近年来的研究发现脑组织也能产生神经源性的神经甾体激素,而且神经细胞膜表面存在甾体激素结合位点。神经活性甾体激素和脑源性神经甾体激素可通过调制配基门控离子通道受体、Ｇ蛋白耦联受体产生快速中枢效应。     

甾体激素的作用机制及其受体的结构和功能

本文介绍了甾体激素作用机制的研究进展,以及受体参与作用的模式。甾体激素受体的核内定位,是一个重要的突破。对于受体Domain结构的研究及其与靶基因HRE相互作用,则是近年来更深入的发展。另一方面,细胞内专一性染色质组份接受了受体携带的大部分激素信息,也成为研究甾体激素调控机制的一个不可忽视的方面。     

神经活性甾体对神经元的作用

神经活性甾体是指神经组织中具有活性的甾体激素,根据甾体激素的作用机制可分为三类：（1）通过细胞表面离子通道型受体介导产生效应,这些受体包括GABAA受体,NMDA受体等。（2）通过G蛋白偶联的膜受体指导第二信使反应,再通过DNA结合蛋白,调节基因表达产生效应,（3）通过细胞内受体介导调控基因的表达产生效应,甾体激素的这些效应尤其是对离子通道型受体和G蛋白偶联型受体的调节作用,已引起重视。     

甾体激素对神经元作用的新机制

甾体激素作用的核机制长期以来人们普遍认为甾体激素通过如下机制发挥作用:甾体激素与其在细胞浆内的受体结合形成激素受体复合物,该复合物活化后,转位到细胞核内,与核蛋白和 DNA 上的特定接受位点结合,抑制特异的基因组,加快某些特异 DNA 的转录速率。最近有资料表明,雌激素及孕激素等甾体的受体位于细胞核内,而糖皮质激素受体在胞浆及胞核内均存在。甾体激素作用的这种基因机制被认为同样适用于神经组织。     

雄激素受体的作用机制

主要概述了雄激素受体的作用机制,特别对影响雄激素受体特异性的因素进行探讨.雄激素受体（AR）属于甾体激素受体超家族,能通过配体依赖方式与特异的DNA序列结合,调控基因转录.     

甾体激素受体的结构相似

对于甾体激素调节靶细胞基因活动的研究,已有近30年的历史。近年来的主要进展是激素受体的鉴定和纯化及受激素调节基因的克隆。西德M.Beato最近专文综述了甾体激素受体与靶细胞基因调控的研究进展。通过对不同受体的cDNA克隆和氨基酸序列比较,发现已知的甾体激素受体都具有相似的结构。受体蛋白质具有可变的N端区、短而高度保守、富于半胱氨酸的中间区,以及较保守的C端区。每区内又可分为更短的基本结构区,为一些尚未完全确认的区域所隔开。例如,在中间区,富于半胱氨酸的区域构成两个“锌手指(zinc finger)”,其主要特点是一个锌原子与一段突出肽段构成的环上的四个半胱氨酸残基相联接。这种结构特点和体外结合及功能实验均提示,中间区具有结合DNA的功能。C端区似乎有更复杂的     

甾体激素的调节基因表达作用

由于对甾体激素受体的结构、结构与功能关系及HRE进行了许多研究,人们对甾体激素受体和HRE及多种转录因子相互作用调节基因表达的过程在分子水平上有了更深入的了解,因而对甾体激素调节基因表达的机制有了进一步的认识,本文综述了这方面的研究进展。     

神经甾体

神经甾体是指那些不经过外周内分泌腺而在神经组织中合成代谢的甾体激素。神经甾体的合成代谢途径已得到证实。对神经甾体调节神经兴奋性的作用机制进行了许多研究。神经甾体的多种神经调质功效尤其是其对γ－氨基丁酸Ａ受体（ＧＡＢＡＡ受体）的调节作用,已引起重视。     

激素在细胞内的作用机理(续)

(二)类固醇激素作用原理 (作用于细胞核的激素) 1.甾体激素的受体细胞对甾体激素的反应依赖于被称作受体(receptor)的蛋白质分子的存在。由激素和受体形成的复合物作用于细胞的基因物质。由内分泌器官所分泌的激素可以影响远距离的无明显关系的组织的细胞,在这些起调节     

人转铁蛋白受体及其特异性抗体的制备

目的:从胎盘中提取转铁蛋白受体并获得抗转铁蛋白受体的抗体。方法:人新鲜胎盘组织被破碎后,用去污剂TritonX-100裂解细胞膜,释放膜蛋白。利用膜蛋白中的转铁蛋白受体能与铁-转铁蛋白复合物特异性结合的特性对其进行亲和纯化。对纯化得到的目的蛋白,经脱盐后进行ELISA及肽质量图谱分析,证明为所需的转铁蛋白受体后,以其包被免疫管,从全合成人源噬菌体抗体库中筛选抗体。结果:从人源噬菌体抗体库中筛选到5个能够与转铁蛋白受体特异性结合的噬菌体单链抗体。结论:以人源转铁蛋白受体为抗体,可从全人源噬菌体抗体库中筛选到其特异性的抗体。     

可溶性人sPD-L1及其抗体的制备和鉴定

通过固定化金属离子亲和层析进行柱上复性与纯化,获得高纯度的可溶性PD-L1胞外域(sPD-L1),其纯度达95%,纯化的sPD-L1经免疫印迹分析得到验证,并具有与其受体PD-1的特异性结合活性;以该抗原免疫小鼠获得高滴度的抗血清,并以制备的sPD-L1-HiTrap亲和层析柱纯化获得高纯度特异性抗体;将该抗体与另一商业化抗体结合建立了一种灵敏的双夹心ELISA法,检测范围为1ng/mL~100ng/mL,可用于分析可溶性PD-L1的含量。可溶性sPD-L1及其抗体的制备不仅可用于人体内特异性抗体和可溶性PD-L1的检测,同时也为进一步研究其体内外活性及其受体的性质提供了条件。     

人源核受体hLRH-1 的表达纯化及多克隆抗体制备

目的：制备抗人源核受体hLRH-1 的多克隆抗体,为进一步研究其功能奠定基础。方法：构建含有hLRH-1基因全长克隆的 原核表达载体pET507a-hLRH-1 并用IPTG 诱导其在Rosseta2 菌株中表达重组蛋白His-hLRH-1,经亲和层析纯化后按常规方法 免疫新西兰兔制备多克隆抗体,并用Western Blot 对其特异性进行鉴定。结果：原核表达载体pET507a-hLRH-1经测序证实构建 成功,将其转化大肠杆菌Rosseta2菌株后成功诱导表达重组蛋白His-hLRH-1,经纯化免疫新西兰兔后得到抗hLRH-1 多克隆抗 体,Western blot 证实抗体具有高度特异性。结论：成功表达His-hLRH-1 重组蛋白并制备出多克隆抗体,为进一步用于hLRH-1 的 免疫学检测及其功能研究奠定了基础。     

尿液睾酮的准确测定

在放免测定中,分离纯化样品中待测物质是保证测定准确性的一个重要步骤。生殖甾体激素常规放免测定方法,一般采用乙醚或其它有机溶剂抽提分离样品中待测的甾体激素。但这种方法不能完全将甾体同样品中可与抗血清发生交叉反应的物质分离开,往往得到过高的测定结果。本文介绍在尿液睾酮的放免测定中加用Celite柱层析纯化步骤,获得较为准确的测定结果,并和常规放免方法所得结果相比较。     

hNOK抗体的制备及肺癌组织中NOK的表达检测

Novel Oncogene with Kinase-domain (NOK)是一个新的肿瘤相关基因, 其结构上?与受体蛋白相似, 具有一个蛋白激酶结构域。过量表达NOK会导致肿瘤的产生与转移。为了更进一步研究生理状态下NOK的功能, 需要制备NOK特异性的抗体。利用GST融合蛋白制备了人源NOK的多克隆抗体, 并进行了纯化。检测表明所得的抗体具有很高的滴度, 能够特异性检测NOK蛋白的表达。使用该抗体进行了人肺癌组织的免疫组化检测, 发现该抗体能够高效识别组织内源性表达的NOK蛋白, 可为肺癌的诊断提供依据。     

hNOK抗体的制备及肺癌组织中NOK的表达检测

Novel Oncogene with Kinase-domain (NOK)是一个新的肿瘤相关基因, 其结构上?与受体蛋白相似, 具有一个蛋白激酶结构域。过量表达NOK会导致肿瘤的产生与转移。为了更进一步研究生理状态下NOK的功能, 需要制备NOK特异性的抗体。利用GST融合蛋白制备了人源NOK的多克隆抗体, 并进行了纯化。检测表明所得的抗体具有很高的滴度, 能够特异性检测NOK蛋白的表达。使用该抗体进行了人肺癌组织的免疫组化检测, 发现该抗体能够高效识别组织内源性表达的NOK蛋白, 可为肺癌的诊断提供依据。     

雌激素浆受体制剂的保存

雌激素受体与雌激素结合,是雌激素产生生理功能的初始反应。但离体条件下,受体蛋白的性质很不稳定,因此对测定和纯化带来很多困难。文献报道将离体的牛或猪子宫直接浸于液氮,或再制成组织冻干粉,以及进一步制成胞液冻干粉,都能在一定时间内保存其中甾体激素受体的生物活性。本文比较了兔子宫胞液、胞液冻干粉以及经肝素琼脂糖部分纯化所得制剂的雌激素受体结合活力,获得了可使受体结合活力保持60天不变的实验条件。这为今后开展分离提纯和结构功能的研究提供了方便,同时有可能为临床测定雌激素受体提供质量控制的标准样品。