昂立植物乳杆菌发酵及其稳定性能的研究

研究昂立植物乳杆菌(LP-Onlly)的发酵特性、耐药性及遗传稳定性.结果表明LP-Onlly发酵培养条件为:37 ℃培养16～18 h发酵结束,pH可达4.4左右;LP-Onlly对研究的33种抗生素敏感、7种耐受;LP-Onlly连续传代15代后,基因组DNA指纹图谱及代谢产物HPLC指纹图谱与原代保持一致.     

乳杆菌代谢产物对化脓性链球菌的抑制作用

【目的】分析乳杆菌代谢产物对化脓性链球菌的抑制作用。【方法】基于双层平板打孔法,通过测量抑菌圈大小来检测乳杆菌代谢产物对化脓性链球菌的抑菌作用;然后分别采用高效液相色谱法和4-氨酰安替比林法检测乳杆菌代谢产物中的有机酸和H2O2含量;最后,检测乳酸、乙酸和H2O2对化脓性链球菌的最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)。【结果】对化脓性链球菌的抑菌效果以植物乳杆菌KLDS1.0667最好,副干酪乳杆菌KLDS1.0342-1次之,瑞士乳杆菌KLDS1.0203抑菌效果最差;乳酸和乙酸产量KLDS1.0667>KLDS1.0342-1>KLDS1.0203;H2O2产量KLDS1.0203>KLDS1.0667>KLDS1.0342-1。在抑菌试验中,乳杆菌的发酵上清液经去除H2O2处理后抑菌圈直径都减小;将发酵上清液的p H调至7.0后均检测不到抑菌圈。结果表明,乳杆菌代谢产物中对化脓性链球菌起抑制作用的主要物质为有机酸和H2O2,其中乳酸是产生抑菌作用的最主要物质。乳酸、乙酸和H2O2对化脓性链球菌的最小抑菌浓度(MIC)分别为1.28、0.64和0.008 g/L,对化脓性链球菌的最小杀菌浓度(MBC)分别为5.12、2.56和0.032 g/L。【结论】乳杆菌可利用其代谢产物对化脓性链球菌产生抑制作用,主要抑菌物质为有机酸和H2O2。     

昂立植物乳杆菌对腹腔感染大鼠肠道微生态的影响

目的探讨经肠道补充昂立植物乳杆菌(LP-Onlly)对腹腔感染大鼠肠道微生态的影响.方法大鼠经盲肠结扎穿孔法及颈静脉空肠置管制成腹腔感染模型后,分别给予肠外营养(PN组)和PN 昂立植物乳杆菌(LP-Onlly组)持续5 d,第6天处死,取盲肠内粪便进行肠菌群培养计数及细菌种群DNA指纹图谱分析.结果 LP-Onlly组大鼠肠道内的乳杆菌和双歧杆菌数量较单纯PN组的大鼠为多,而肠道内的潜在致病菌产气荚膜梭菌数量较单纯PN组的大鼠少,DNA指纹图谱也显示LP-Onlly组大鼠优势菌群的基因条带和正常大鼠具有较高的一致性,而PN组则差异有显著性.结论 LP-Onlly能纠正腹腔感染大鼠PN时的肠道菌群紊乱, 调理肠道微生态平衡.     

双歧杆菌的粘附特性及其对肠道致病菌的体外拮抗作用

本文采用体外细胞培养法, 从实验室现有的20株不同生境来源的双歧杆菌中筛选具有较强粘附能力的菌株, 并通过混合培养和牛津杯方法, 研究了具有粘附特性的双歧杆菌对肠道致病菌的体外拮抗作用。结果显示, 长寿老人源菌株A03和I06的粘附能力最强, 其菌液对金黄色葡萄球菌及大肠杆菌均具有显著的抑制性, 但是菌体及中和后的发酵液均没有抑菌性, 说明受试菌主要通过其代谢产物中的有机酸来发挥其抑菌性能; 此外, 通过分析比较受试菌和肠道致病菌分别与Caco-2细胞粘附后释放的乳酸脱氢酶量, 证实双歧杆菌与致病菌对细胞的作用具有本质上的区别, 双歧杆菌的粘附能减缓致病菌对细胞所造成的损害。     

一株深海热液口嗜热芽孢杆菌SY27F代谢产物活性的研究

【目的】对一株来源于深海热液口嗜热芽孢杆菌的次生代谢产物进行抑菌活性和抗肿瘤活性的初步研究。【方法】采用纸片法和微量肉汤稀释法检测嗜热芽孢杆菌SY27F次生代谢产物的抑菌活性,采用CCK-8法测定其次生代谢产物的抗肿瘤活性。【结果】抑菌实验表明,嗜热芽孢杆菌代谢产物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均有抑菌作用,其最低抑菌浓度分别为1.56 mg/mL和3.13 mg/mL;细胞实验表明,其代谢产物对肿瘤细胞A549、HepG2、HeLa、MCF-7均有一定的抑制作用,其半致死浓度分别为0.390、0.451、0.704、1.105 mg/mL;与人肝肿瘤细胞(HepG2)相比,其对人正常肝细胞(L02)表现出良好的生物相容性。【结论】嗜热芽孢杆菌SY27F次生代谢产物具有一定的抑菌和抗肿瘤活性,可为寻找新型抑菌抗肿瘤活性物质提供优质资源。     

一株抑制产气荚膜梭菌的枯草芽孢杆菌BS-2特性

【背景】感染产气荚膜梭菌会引起动物坏死性肠炎,通常使用抗生素进行预防和治疗。随着我国饲料禁抗、养殖减抗的实施,寻找绿色微生态制剂及其代谢产物成为当前研究的热点。【目的】旨在研究前期筛选的一株抑制产气荚膜梭菌的枯草芽孢杆菌BS-2特性。【方法】检测了菌株生长曲线、代谢物质的抑菌特性及细菌素基因簇mRNA表达。【结果】枯草芽孢杆菌BS-2代谢物质对革兰氏阴性菌无抑制作用,而对革兰氏阳性菌具有较强的抑菌性能,并且对产气荚膜梭菌的抑菌性能在2-12 h内迅速增长,在12-24 h内抑菌性能较稳定;该抑菌性能不受胃蛋白酶、胰蛋白酶、蛋白酶K的影响,具有良好的热稳定性;进一步分析抑菌物质基因簇mRNA表达,发现枯草芽孢杆菌BS-2抑制产气荚膜梭菌的活性可能与表面活性素(surfactin)和美杀菌素(mersacidin)表达有关。【结论】枯草芽孢杆菌BS-2对产气荚膜梭菌具有较强的抑制作用,可能通过抑菌物质surfactin和mersacidin表达发挥作用。     

美洲大蠊肠道内生微杆菌的分离鉴定及其抑菌活性研究

对美洲大蠊肠道内生微杆菌进行形态学和分子生物学鉴定,对其抑菌活性进行初步研究,并从基因水平分析微杆菌产生卤化次级代谢产物的潜力。利用平板划线法对美洲大蠊肠道内生微杆菌进行分离和纯化,革兰氏染色后进行光学显微镜观察,并利用16S rDNA PCR、BLAST同源性比对和构建系统发育树等方法对分离菌株进行分子生物学鉴定以及部分抗生素合成关键酶基因的筛选。在此基础上,以8株常见致病菌为指示菌,利用牛津杯法对分离菌株的抑菌活性进行初步研究。分离得到的8株微杆菌其菌落颜色呈淡黄色或白色;16S rDNA基因测序和BLAST比对结果表明,该8株微杆菌与已知微杆菌同源性均达到98%以上,系统发育树结果表明8株微杆菌与土壤、海洋来源的微杆菌同源性较高。部分抗生素合成关键酶基因筛选结果表明8株微杆菌中有6株至少对FADH2-依赖性卤化酶、非核糖体多肽合成酶(NRPS)及Ⅰ型聚酮合酶(PKSI)3种基因中的2种呈阳性表达。抑菌实验显示,8株微杆菌中有6株微杆菌对受试真菌和细菌的生长表现出了不同程度的选择性抑制作用,表明美洲大蠊肠道存在具有抑菌活性的内生微杆菌。     

波赛链霉菌JMC 06001抑菌活性物质的特性研究

使用藤黄八叠球菌（Sarcina lutea）、枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis）、大肠埃希菌（Escherichia coli）、黑曲霉（Asperillus niger）、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）、变形杆菌（Proteus vulgaris）、白色念珠菌（Candidaalbicans）、青霉（Penicilliumsp.）、铜绿假单胞菌（P.aeruginosa）9种指示菌,采用杯碟法检测抑菌活性。研究了波赛链霉菌JMC 06001菌株（Streptomyces peucetiusJMC 06001）发酵液和菌丝体中活性物质的抑菌谱,对由该菌株产生的抑菌物质的温度、pH值、抗紫外线方面的稳定性进行了考察。利用硅胶柱层析和薄层层析对抑菌物质的分离也做了初步的研究。结果表明,该菌株的发酵产物对部分革兰阳性菌、革兰阴性菌和部分真菌有较为明显的抑制作用。稳定性试验结果显示,该菌株产生抑菌活性物质的最适温度为40℃左右,最佳pH值在7.0左右,具有较好的热稳定性和较宽的pH作用范围,抗紫外线辐射能力较强。通过硅胶柱层析分离和薄层色谱检测,显示该菌次生代谢产物中的抑菌活性物质包含了多种成分。     

西洋参内生真菌抑菌活性的初步研究

以金黄色葡萄球菌、蜡状芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌、大肠杆菌、鼠伤沙门氏菌及肠炎沙门氏菌为测试菌种,对从西洋参(Panax quinquefolium L.)的茎和叶中分离得到的36株内生真菌进行抑菌活性试验,并测定活性菌株的代谢产物和不同极性物质对测试病菌的抑菌活性。试验筛选出2株具有明显抑菌活性的内生真菌,它们的代谢产物和不同极性物质对金黄色葡萄球菌和蜡状芽胞杆菌的抑菌效果最佳,其中胞外多糖和正丁醇提取物的抑菌效果较好。     

植物乳杆菌CMCC-P0002代谢产物中抑菌物质的研究

目的通过对一株植物乳杆菌代谢产物的抑菌作用以及该产物的某些物理特性的研究,为进一步发现可替代现有抗生素的抗菌物质奠定基础。方法首先利用低温离心和超滤法对植物乳杆菌培养后的上清液进行初步提取,用打孔法行抑菌试验,明确其对铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和金黄色葡萄球菌等临床分离菌株的抑菌活性;并进一步经加热、调整pH及过氧化氢酶等处理上清液后,再验证其活性变化。结果植物乳杆菌的培养上清液对铜绿假单胞菌等多株临床分离菌株均具有一定的抑菌活性,且以pH在6以内时该物质抑菌活性较好,过氧化氢酶处理后或加热至100℃、30min,上清液的抑菌活性依然存在。结论在植物乳杆菌的培养上清液中存在着具有抑菌活性的物质,对从临床标本所分离的部分革兰阴性菌及革兰阳性菌有抑菌作用,该物质对热耐受,其活性受pH变化的影响。     

The antibacterial activity of the hemichordate Saccoglossus ruber (Enteropneusta)

Antibacterial activity of crude whole body homogenates and mucus from the body surface of the hemichordate Saccoglossus ruber was detected using a turbidometric and plate assay. Activity was found to be strongest against marine bacteria and significantly higher against bacteria isolated from the immediate environment of the animals. The whole body nomogenate was less effective at inhibiting growth of the seven terrestrial bacteria tested. The antibacterial factor from the homogenate retained its activity after boiling and was stable at room temperature for at least 8 weeks, suggesting that it was nonproteinaceous. The loss of all activity during dialysis also indicated that a low molecular weight substance was involved. The antibacterial factor from the mucus and homogenate had similar properties, so that the same molecule may have been involved. The possibility that the antibacterial factor may be related to the halogenated indoles and phenols occurring in other enteropneusts is discussed.     

纳米银/植物源复合抗菌剂的制备及其抑菌性能的研究

以硝酸银作为银源,水溶性淀粉作保护剂,丙酮酸钠作还原剂,氨水提供碱性环境来制备纳米银胶,并以聚乙烯吡咯烷酮(PVP)作分散稳定剂,复配红景天提取液和无患子提取液制备出纳米银/植物源复合抗菌剂。实验结果表明,纳米银胶或植物提取液仅对部分细菌或霉菌有较强抑制效果,而复合抗菌剂对细菌、霉菌均有很强抑制效果。在湿巾液中添加0.5%复合抗菌剂时,其对大肠杆菌,金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的抗菌效率可达99%,且经过常温六个月、高温55℃一个月保存后,其抗菌活性分别可达到95%、90%左右,表明复合抗菌剂具有较强的抗菌效率及抗菌稳定性。     

Processing of an antibacterial peptide from hemocyanin of the freshwater crayfish Pacifastacus leniusculus

An antibacterial peptide with 16 amino acid residues was found in plasma of the freshwater crayfish, Pacifastacus leniusculus. This peptide, designated astacidin 1, was purified by cation-exchange column chromatography and reverse-phase high performance liquid chromatography. Astacidin 1 has a broad range of antibacterial activity, and it inhibits growth of both Gram-positive and Gram-negative bacteria. The primary sequence of astacidin 1 was FKVQNQHGQVVKIFHH-COOH. The molecular mass was 1945.2 Da, and no carbohydrate-linked amino acid residues could be found by mass spectrometry. A synthetic astacidin 1 resulted in similar activity as the authentic astacidin 1 against Gram-positive bacteria, whereas it had less or no activity against Gram-negative bacteria. Three amino-terminal-truncated synthetic peptides were made; they all showed low activity, suggesting that the amino-terminal part of astacidin 1 contributes to the antibacterial activity. The structure of astacidin 1 based on the CD results showed that it has a beta-sheet structure in citric acid buffer at pH 4, 6, and 8. Cloning of astacidin 1 shows that it is the carboxyl-terminal part of crayfish hemocyanin and that astacidin 1 is produced by a proteolytic cleavage from hemocyanin under acidic conditions. The processing and release of astacidin 1 from hemocyanin is enhanced when crayfish are injected with lipopolysaccharide or glucan.     

三种百合鳞茎提取物的抑菌作用

采用纸片琼脂扩散法测定了宜昌百合、岷江百合及兰州百合鳞茎甲醇提取物对革兰氏阳性细菌(金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌)和革兰氏阴性细菌(大肠杆菌、沙门氏菌)的抑制活性,并对3种百合鳞茎提取物的含量与抑菌活性进行了剂量-效应关系分析。结果表明:3种百合鳞茎提取物对4种细菌均具有抑制活性,对革兰氏阳性细菌的抑菌活性高于对革兰氏阴性细菌的抑菌活性,且宜昌百合和岷江百合两种野生百合鳞茎提取物的抑菌活性均高于普通食用的兰州百合;3种百合鳞茎提取物的含量与抑菌活性之间存在明显的剂量-效应关系,即随着提取物含量的升高,抑菌活性明显升高。     

马尾松毛虫肠道产细菌素细菌的筛选及抑菌特性

[背景]细菌素是一类由细菌产生的抗菌肽活性物质,对多种致病菌有抑制和杀灭作用.昆虫是世界上种类最多、肠道菌群资源最为丰富且多样的动物类群之一.昆虫肠道很可能蕴含着丰富的产细菌素菌种资源.[目的]以马尾松毛虫(Dendrolimuspunctatu)幼虫为研究材料,对其肠道细菌进行分离、培养和鉴定,获得对典型致病菌有明显...     

1株植物乳杆菌的抑菌作用及其生物学特性的研究

植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）是乳酸杆菌中的一种,常存在于发酵的蔬菜和果汁中。植物乳杆菌作为人体肠道的益生菌群,具有维持肠道菌群平衡、提高机体免疫力和促进营养物质吸收等多种作用。研究从市售腌渍蔬菜中分离筛选获得一株植物乳杆菌,以9种菌作为指示菌,采用牛津杯琼脂扩散法检测筛选菌株的抑菌谱大小。结果表明,该菌株能较强的抑制大肠杆菌、柠檬色葡萄球菌、藤黄微球菌和枯草芽孢杆菌等指示菌。此外,研究了菌株对温度的稳定性,p H值的耐受性及其酶的敏感性等生物学特性,结果显示该株植物乳杆菌菌株具有良好的热稳定性,酸碱稳定性,并且对3种蛋白酶具有很好的敏感性。这为今后深入研究与开发植物乳杆菌奠定了基础。     

肠球菌E4及其抑菌产物特性的研究

目的获得抑制微生物生长的菌株。方法根据形态学和生理生化学特性进行菌种鉴定;采用牛津杯法测定抑菌谱和抑菌物质的理化特性。结果排除了过氧化氢和有机酸的作用,该菌发酵上清液对苏云金杆菌、枯草杆菌、大肠埃希菌、鸡白痢沙门菌等有抑制作用。根据菌株的生理生化特征,该菌株初步定为肠球菌属,定名为E4（Enterococcus sp．）。所产抑菌物质具有较好的热稳定性,在酸性条件下稳定且活性高。结论分离筛选了1株可产抑菌物质的肠球菌,其产生的抑菌物质具有良好的生物化学特性和广谱的抑菌能力。     

Characterization of a broad range antibacterial substance from a new <Emphasis Type="Italic">Bacillus</Emphasis> species isolated from Amazon basin

A Bacillus sp. strain producing a bacteriocin-like substance was characterized by biochemical profiling and 16S rDNA sequencing. The phylogenetic analysis indicated that this strain has low sequence similarity with most Bacillus spp., suggesting a new species was isolated. The antimicrobial activity was detected starting at the exponential growth phase, and maximum activity was observed at stationary phase. The substance was inhibitory to a broad range of indicator strains, incluing pathogenic and food spoilage bacteria such as Listeria monocytogenes, B. cereus, Aeromonas hydrophila, Erwinia carotovora, Pasteurella haemolytica, Salmonella Gallinarum, among other. The antibacterial substance was stable over a wide pH range, but it was sensitive to pronase E and lipase. The antibacterial substance was bactericidal and bacteriolytic to L. monocytogenes and B. cereus at 160 AU ml⁻¹. The identification of a broad range bacteriocin-like inhibitory substance active against L. monocytogenes addresses an important aspect of food protection against pathogens and spoilage microorganisms.     

Hydrogen peroxide produced by two amino acid oxidases mediates antibacterial actions

The antibacterial actions of two amino acid oxidases, a D-amino acid oxidase from hog kidney and a L-amino acid oxidase from the venom of Agkistrodon halys, were investigated, demonstrating that both enzymes were able to inhibit the growth of both Gram-positive and Gram-negative bacteria, and that hydrogen peroxide, a product of their enzymatic reactions, was the antibacterial factor. However, hydrogen peroxide generated in the enzymatic reactions was not sufficient to explain the degree to which bacterial growth was inhibited. A fluorescence labeling assay showed that both of these two enzymes could bind to the surfaces of bacteria. To the best of our knowledge, this is the first report regarding the antibacterial activity of the D-amino acid oxidases.     

载铜蒙脱石的抗菌机理研究

研究载铜蒙脱石对副溶血弧菌的抗菌效果和机理。载铜蒙脱石对副溶血弧菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度分别为75mg/L和300mg/L,而蒙脱石未显抗菌活性。细菌胞内酶活性结果显示,载铜蒙脱石可使细菌细胞膜发生损伤或通透性增大,导致细菌胞内酶的外漏。载铜蒙脱石对细菌呼吸代谢影响的结果表明,载铜蒙脱石可抑制三羧酸循环途径。原子力显微镜动态观察载铜蒙脱石作用下副溶血弧菌形态变化的结果发现,载铜蒙脱石能破坏细菌细胞膜。