绵马鳞毛蕨的组织培养与植株再生

1植物名称绵马鳞毛蕨(Dryopteris crassirhizoma Nakai),又称粗茎鳞毛蕨、野鸡翅膀子。2材料类别嫩叶。3培养条件愈伤组织诱导培养基:(1)1/2MS 6-BA0.3mg·L-1(单位下同) IBA0.3 NH4H2PO3200,(2)     

香鳞毛蕨的化学成分研究

本文对香鳞毛蕨水提液进行大孔树脂柱色谱,用水、30%、60%、95%乙醇依次洗脱,从香鳞毛蕨30%乙醇组分中分离得到10个化合物,通过波普数据和理化性质分别鉴定为:5,7二羟基-2-羟甲基色原酮(1)、咖啡酸甲酯(2)、2S-圣草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(3)、二氢松柏醇(4)、1,3-二羟基-5-丙基苯(5)、3β-羟基-5α,6α-环氧-7-大柱香波龙烯-9-酮(6)、2-羟基苯甲酸(7)、咖啡酸(8)、对羟基苯乙酮(9)、圣草素(10),以上化合物中4~10为首次从鳞毛蕨属植物中分离得到。     

香鳞毛蕨配子体发育的研究

研究了香鳞毛蕨(Dryopteris fragrans (L.)Schott)配子体的发育过程。结果发现孢子极面观为椭圆形,赤道面观为半圆形,单裂缝。孢子萌发为书带蕨型;丝状体2～9个细胞长,有明显顶端细胞,可形成多细胞的广阔板状片状体;片状体顶端分生组织继续分裂,发育为幼原叶体;原叶体发育为三叉蕨型;毛状体数量丰富,均为单细胞;颈卵器和精子器几乎同时形成,较小;成熟原叶体倒卵状心脏形。该配子体表现为进化性状。     

香鳞毛蕨DfDREB基因克隆与表达模式分析

DREB(dehydration-responsive element-binding)转录因子是响应非生物胁迫反应的主要调节因子,为探索DREB在多年生草本药用植物香鳞毛蕨[Dryopteris fragrans(L.) Schott]抗逆过程中的功能,该研究克隆了DfDREB基因并进行生物信息学分析,采用qRT-PCR方法分析了DfDREB基因在不同激素及干旱、NaCl、高温和低温等逆境胁迫处理下的表达模式。结果表明:(1)成功获得DfDREB基因全长1 203 bp,其编码401个氨基酸,相对分子质量为43.66 kD,等电点为6.13,是亲水性非分泌蛋白,该蛋白具有AP2保守结构域,属于AP2家族。(2)实时荧光定量PCR分析表明,DfDREB基因在香鳞毛蕨根、叶柄和叶中均有表达,其中在叶中表达量最高,根中表达量最低;在水杨酸(SA)、茉莉酸甲酯(MeJA)和乙烯利(ETH)处理时,DfDREB基因表达上调,并都在1 h时表达量达到峰值;在脱落酸(ABA)处理时,DfDREB基因的相对表达量仅在12 h和24 h时呈上调表达,其余时间为下调表达;在干旱、NaCl和高温处理时,DfDREB基因表达均上调;低温处理0.5 h和12 h时DfDREB基因表达显著上调,但在低温处理1～6 h和24 h时无明显变化。研究表明,DfDREB基因响应激素和非生物胁迫处理,且基因表达受胁迫诱导。该研究结果为进一步探索香鳞毛蕨抗逆分子机制奠定了基础。     

香鳞毛蕨DfGNOM基因的克隆及其表达分析

GNOM是一种ADP核糖基化因子(ARF)的鸟嘌呤核苷酸交换因子(GEF),为探索GNOM在香鳞毛蕨(Dryopteris fragrans)中的抗逆功能,该研究克隆了DfGNOM并进行生物信息学分析,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法分析了DfGNOM基因在不同植物激素及逆境胁迫处理下的表达模式,为进一步探索该基因的功能以及香鳞毛蕨的抗逆机制奠定基础。结果表明:(1)成功获得DfGNOM全长4 338 bp,蛋白质多序列比对以及进化树分析表明,DfGNOM与江南卷柏(Selaginella moellendorffii) SmGNOM亲缘较近,motif分析表明该蛋白含有sec7保守结构域。(2) qRT-PCR分析显示,DfGNOM在香鳞毛蕨的根、叶柄和叶中均有表达,但在叶中表达量最高;DfGNOM的相对表达量在生长素(IAA)处理后总体上调,在脱落酸(ABA)处理后总体下调;在NaCl处理下呈"降-升-降"的变化趋势,高温和低温处理下呈"升-降-升"变化趋势;在茉莉酸甲酯(MeJA)、乙烯利(ETH)以及PEG处理下,DfGNOM的相对表达也表现出不同的模式。研究认为,DfGNOM在香鳞毛蕨非生物胁迫响应过程中发挥调控作用。     

球子蕨孢子的无菌繁殖

以球子蕨成熟孢子为外植体,研究了不同激素及浓度对其孢子萌发、愈伤组织诱导、丛生芽分化及生根的影响。结果表明：孢子萌发最适培养基为1／2MS＋2％蔗糖,20d后萌发率达55．7％;诱导愈伤组织的最适培养基为MS＋0．5mg·L-1 KT＋0．5mg·L～2,4-D,诱导率达36％,愈伤组织为绿色颗粒状;颗粒状愈伤组织在不添加激素的MS培养基中即可生长出大量丛生芽,转化率可达49．3％;低浓度（0．2mg·L-1）的IAA可有效促进幼孢子体苗生根。     

球子蕨孢子的无菌繁殖

以球子蕨成熟孢子为外植体,研究了不同激素及浓度对其孢子萌发、愈伤组织诱导、丛生芽分化及生根的影响。结果表明:孢子萌发最适培养基为1/2MS+2%蔗糖,20d后萌发率达55.7%;诱导愈伤组织的最适培养基为MS+0.5mg·L-1KT+0.5mg·L-12,4-D,诱导率达36%,愈伤组织为绿色颗粒状;颗粒状愈伤组织在不添加激素的MS培养基中即可生长出大量丛生芽,转化率可达49.3%;低浓度(0.2mg·L-1)的IAA可有效促进幼孢子体苗生根。     

水蕨的组织培养和快速繁殖

1植物名称水蕨[Ceratopteris thalictroides（L．）Brongn]。 2材料类别营养叶、孢子叶。 3培养条件基本培养基为MS培养基。（1）诱导愈伤组织培养基：MS＋6．BA2mg．L^-1（单位下同）＋NAA0.5;（2）诱导芽培养基：MS＋6．BA0．25＋IBA0．25＋活性炭（AC）0．5g．L^-1;（3）生根培养基：MS＋6．BA0．5＋IBA0．25＋AC0．5g．L^-1。     

长鞭红景天的组织培养和快速繁殖

1植物名称长鞭红景天(Rhodiola fastigiata). 2材料类别幼叶和嫩茎. 3培养条件愈伤组织诱导培养基:(1)WPM 6-BA 1.5 mg·L-1(单位下同) IBA 0.1;分化与增殖培养基:(2)WPM 6-BA 1.5 IBA 0.05;生根培养基:(3)WPM IBA 0.1,(4)WPM IBA 0.1 多效唑0.05.上述培养基均加入5.0g·L-1的琼脂粉、3%蔗糖,pH 5.8.培养温度为(25±2)℃,光照度为1 500～2000 lx,光照时间10 h·d-1.     

Establishment of a Tissue Culture and Rapid Propagation System of Dryopteris fragrans

香鳞毛蕨(Dryopteris fragrans)是一种多年生野生草本蕨类植物, 具有抗氧化、抑菌、抗银屑病和抗肿瘤等多种功效。香鳞毛蕨的野生资源匮乏, 通过组织培养建立其人工再生体系, 是保护香鳞毛蕨资源可持续利用的有效途径。通过对香鳞毛蕨孢子的无菌培养, 比较分析不同因素对原叶体增殖、孢子体诱导、愈伤组织诱导与增殖、丛生芽分化及生根的影响, 建立了快速繁殖体系, 为香鳞毛蕨规模化生产奠定基础。研究结果表明, 当培养基组分为1/2MS时, 原叶体生长状态较好, 颜色翠绿, 增殖倍数最高可达5.67±0.59, 此时有大量幼孢子体产生, 孢子体诱导率为(37.50±2.04)%; 愈伤组织诱导最佳培养基为1/2MS+2.0 mg·L^-1 6-BA+1.0 mg·L^-12,4-D, 诱导率可达(96.67%±5.77)%; 愈伤组织增殖最佳培养基为1/2MS+ 1.0 mg·L^-1 6-BA+0.5 mg·L^-1 2,4-D, 增殖倍数达13.30; 颗粒状愈伤组织在1/2MS培养基中生长出大量丛生芽, 诱导率为(53.33±3.33)%; 1/2MS+0.2 mg·L^-1 NAA培养基促进幼孢子体苗生根, 移栽成活率约为60%。     

香荚兰的快速繁殖

研究了香荚兰组织培养中植物激素、椰乳、糖分以及光和温度对器官形成的影响。结果表明,１．５ｍｇ／ＬＢＡ或０．２ｍｇ／ＬＢＡ附加１２．５％椰乳或１ｍｇ／ＬＮＡＡ有利于芽的增殖和长高;诱导生根用０．５ｍｇ／ＬＩＡＡ和３％蔗糖。适宜光照强度８０００１ｘ、温度２８℃,光照以１８小时为好。     

杏香兔儿风的组织培养与快速繁殖

1植物名称杏香兔儿风(Ainsliaea fragrans Champ.)。2材料类别种子。3培养条件基本培养基为MS。(1)种子萌发培养基:MS 6-BA 0.2mg·L-1(单位下同) NAA 0.1;(2)分化培养基     

也门铁的组织培养技术研究

以4品种也门铁的茎段为外植体进行组织培养技术研究。结果表明,控制普通也门铁茎段褐化效果最理想的培养基为MS + 0.25 g·L-1 VC + 0.50 g·L-1 Na2S2O3;诱导也门铁不定芽萌动的最佳培养基为MS + 3.0 mg·L-1 6-BA + 0.2 mg·L-1 NAA + 0.1 mg·L-1 KT;诱导也门铁不定芽增殖的最佳培养基,因品种不同而异,普通也门铁和金心也门铁为MS + 2.0 mg·L-1 6-BA + 1.0 mg·L-1 NAA + 0.1 mg·L-1 GA3,扭纹铁和金心扭纹铁为MS + 1.0 mg·L-1 6-BA + 0.5 mg·L-1 NAA + 0.1 mg·L-1 GA3;也门铁壮苗的最佳培养基为MS + 0.05 mg·L-1 6-BA + 0.05 mg·L-1 NAA + l g·L-1AC;也门铁生根最优培养基为1/2MS + 0.5 mg·L-1 IBA。     

蓝花楹组织培养与快速繁殖研究

以蓝花楹(Jacaranda mimosifolia Humb.et Bonpl.)胚轴为外植体进行组织培养和快繁体系建立的研究。结果表明,蓝花楹种子经40℃-45℃温水浸泡后发芽率较高,达到55.7%。蓝花楹不定芽和愈伤组织诱导的最适培养基分别为MS+6-BA2.0 mg L-1+NAA 0.1 mg L-1+2,4-D 0.1 mg L-1和M S+6-BA 0.5 mg L-1+NAA 1.0 mg L-1+2,4-D 1.0 mg L-1。不定芽和愈伤组织增殖的最适培养基分别为改良MS培养基+6-BA 0.5 mg L-1+NAA 0.5 mg L-1+IBA 0.5 mg L-1和MS+6-BA 1.0 mg L-1+NAA 0.5 mg L-1+ZT 3.0 mg L-1。愈伤组织分化最适培养基为M S+BA 1.0 mg L-1+NAA 0.5 mg L-1+2,4-D 0.5 mg L-1。最适生根培养基为1/2MS+蔗糖20 g L-1+NAA 0.1 mg L-1+活性炭2.0 g L-1,生根率达78.3%。     

宽叶弹簧草的组织培养与快速繁殖

以宽叶弹簧草Ornithogalum concodianum休眠期的鳞茎为材料,进行离体再生体系研究。结果表明,培养基MS(KH2PO4 加倍)+6-BA 4.0 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1适宜鳞茎诱导,诱导率达54.2%;对鳞茎增殖的主要影响因素为6-BA,培养基2/3MS(KH2PO4 加倍)+6-BA 4.0 mg·L-1+NAA 1.0 mg·L-1+蔗糖2%适宜鳞茎增殖,增殖系数为4.0;培养基1/2MS(大量元素减半,其他成分不变)+IBA 1.0 mg·L-1+NAA 1.0 mg·L-1+活性炭1.0 g·L-1生根效果较好;适宜的栽培基质为草炭∶园土∶火山岩(体积比)＝5∶1∶1,成活率可达89.6%。     

红掌的离体组织培养与快速繁殖

本研究从红掌组培的实用化生产出发,在不同激素成份及浓度水平下,以MS为基本培养基,红掌的叶片或叶柄为外植体进行组培快繁试验。实验结果表明:MS+6-BA1mg/L+2.4-D0.1mg/L为最佳诱导培养基,诱导率可达89%以上,红掌的叶片诱导效果比叶柄较为理想。最适分化培养基为:MS+BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L,其分化率为93%;继代增殖培养基为MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L,增殖系数达7.1;适合生根诱导培养基为l/2MS+NAA0.2mg/L,生根率达96.5%以上。生根苗田间移栽后成活率可达95%以上。     

‘巴斗杏’组培快繁体系建立与耐盐植株筛选

以淮北黄里‘巴斗杏’茎段为外植体,MS为基本培养基,通过茎段诱导植株再生及进行耐盐筛选。结果表明:采用4、5月‘巴斗杏’茎段用0.1%升汞灭菌8 min较适宜;在含有1.0 mg/L 6-BA和0.1 mg/L IBA的MS培养基上茎段增殖较快,生长旺盛;较理想的生根培养基为MS+NAA 0.1 mg/L+IBA 0.2 mg/L,生根率达46.3%;‘巴斗杏’组培苗进行耐盐筛选的适宜盐浓度为0.4%～0.8%,筛选植株与对照相比差异显著。     

高羊茅植株再生体系的研究与建立

利用幼苗下胚轴建立了高羊茅(FestucaarundinaceaSchreb.)植株再生体系。当高羊茅种子以次氯酸钠为主要消毒剂时,其最适的浓度和时间分别为次氯酸钠50%(V/V)处理20min,种子发芽率为80%,污染率为0%。研究发现用高羊茅下胚轴诱导愈伤组织时,下胚轴的不同的切法对愈伤组织诱导有影响,从一端切的下胚轴诱导愈伤率74.7%高于从两端切55.8%。以下胚轴为外植体,2,4D的浓度为9mg·L1时,愈伤组织诱导率最高。高羊茅愈伤组织的分化再生率可达80.7%。