丙型肝炎病毒包膜糖蛋白的研究进展

本文概述了近年来利用体外表达系统对丙肝炎病毒（ＨＣＶ）包膜糖蛋白的翻译后加工、折叠、装配的研究进展。目前的研究表明：ＨＶＣＥ１、Ｅ２蛋白通过非共价键相连形成的异源二聚体代表了ＨＣＶ糖蛋白的天然构象;Ｅ１和ＥＡ２Ｃ末端的跨膜区能使其锚定于内质网;ＶＣ包膜糖蛋白在内质网中完成其加工及成熟的过程;分子伴侣及Ｅ１、Ｅ２蛋白 旁侧序列对形成天然ＨＣＶ包膜糖蛋白复合物起重要作用。     

CD81的分子生物学研究进展

ＣＤ８１是一种分子量为２６ｋＤ的四跨膜蛋白分子。在细胞膜上可与ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２、ＣＤ８２、Ｌｅｕ１３、ＨＬＡ－ＤＲ和α３β１整合素等结合,调节跨膜信号转导。最近又证实ＣＤ８１可与丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）包膜糖蛋白Ｅ２结合,可能是ＨＣＶ感染靶细胞的受体蛋白。     

猪生殖—呼吸道综合征病毒（PRRSV）CH—1a株糖蛋白基因的遗传变异分析

新近发现的猪生殖－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）是单股ＲＮＡ病毒,属于不久前成立的动脉炎病毒科,为了比较国内分离的ＣＨ－１ａ株与国外毒株的分子遗传学关系,扩增并克隆了ＰＲＲＳＶ ＣＨ－１ａ株糖蛋白基因ＯＲＦ２￣５,测定了其核苷酸序列。用序列分析软件分析了其编码产物的分子量、等电点、疏水性、抗原性和有关位点,并与国外毒株进行了序列比较和系统发育进化分析。结果表明：ＣＨ－１ａ株与ＶＲ－２３３２株尽管密     

丙型肝炎病毒颗粒研究进展

本文综述了近年来对丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）颗粒的研究进展。在ＨＣＶ感染引起的肝炎组织标本、血液标本及培养细胞中,普通透射电镜下发现有病毒颗粒的存在。核内颗粒直径为２０￣２７ｎｍ;胞质内颗粒的大小报道各异,其结构包括核心和外壳两部分,核心平均直径４０ｎｍ。这种颗粒的特性尚未被阐明。近年在ＨＣＶ感染的培养细胞及黑猩猩ＨＣＶ肝炎模型中免疫电镜检查证明这种颗粒有病毒抗原性,但在人们ＨＣＶ肝炎肝组织中这种颗料     

庚型肝炎病毒包膜糖蛋白E2基因在昆虫细胞中的表达

用ＰＣＲ扩增出ＨＧＶＥ２全基因,克隆进杆状病毒表达载体ｐＦＡＳＴＢＡＣＨＴａ中,构建成重组转座载体ｐＦＡＳＴＢＡＣＥ２,转化ＤＨ１０ＢＡＣ大肠杆菌感受态细胞,筛选阳性菌落,抽提大分子质粒ＤＮＡ,获得含ＨＧＶＥ２基因的重组杆状病毒穿梭载体,转染昆虫草地夜蛾Ｓｆ９细胞,出现细胞病变后,收集含有重组病毒颗粒的培养上清,重新感染草地夜蛾Ｓｆ９单层细胞及甜菜夜蛾幼虫,分别收集Ｓｆ９细胞和甜菜夜蛾幼虫体内的血淋巴细胞,进行１２％ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳,可见表达的融合蛋白带,经亲和层析进行蛋白纯化,用ＥＬＩＳＡ方法检测各类血清标本,初步研究ＨＧＶＥ２糖蛋白的抗原性     

HCVE2／NS1相对保守区多肽体外诱导慢丙肝患者PBMC增殖反应的研究

为了解ＨＣＶ感染后细胞免疫在其中的作用,对３１例慢丙肝及２０例正常献血员以ＭＴＴ法检测外周血单核细胞（ＰＢＭＣ）对ＨＣＶＥ２／ＮＳ１相对保守区多肽抗原及Ｃ２２、ＮＳ５的增殖反应。结果表明与正常人相比,慢性丙型肝炎患者ＰＢＭＣ对ＨＣＶＣ２２、Ｅ２／ＮＳ１抗原有明显的增殖反应（Ｐ＜００５）,而对ＮＳ５无明显增殖,其中以Ｃ２２抗原性最强。作者认为慢性丙型肝炎患者存在针对与ＨＣＶ相关抗原的细胞免疫,这种细胞免疫不能消除ＨＣＶ感染,而且与疾病的状态无关。     

在哺乳动物细胞中稳定表达丙型肝炎病毒E2糖蛋白

利用ＤＮＡ重组技术,将Ⅲ型中国株ＨＣＶＥ２／ＮＳ１基因片段插入真核表达载体,然后转染哺乳动物细胞ＮＩＨ３Ｔ３以表达Ｅ２糖蛋白．检测显示来自３月以上培养的细胞克隆中表达产物分子量为７０ｋＤ,经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ证实该表达产物能与抗ＨＣＶ阳性血清进行特异性反应．以上表明首次在哺乳动物细胞中成功表达Ⅲ型中国株ＨＣＶ的Ｅ２糖蛋白,并建立相应的稳定表达细胞系．     

丙型肝炎病毒高变区基因变异特点初探

对两例ＨＣＶＲＮＡ持续阳性者分三个时间点随访五年,测定了ＨＣＶ的高变区基因序列,每个时间点平均测定２８个克隆,总共测定了１６８个克隆。研究发现ＨＣＶ高变区基因变异有五个明显特点：（１）变异程度大,高变区至少有８９％的核苷酸位点都可能发生变异;（２）变异形式多样,除常见的替代突变外,缺失突变（缺失１、２或３个核苷酸）的克隆数占总克隆数的２２．５％;（３）优势克隆明显,即有若干个克隆高变区的核苷酸和氨基酸序列相同;（４）类似株现象严重;（５）变异幅度大。该研究说明ＨＣＶ高变区基因变异具有高度复杂多样性。     

用PCR分析HCV－RNA NS5部分序列变异

用ＰＣＲ分析ＨＣＶ－ＲＮＡＮＳ５部分序列变异魏来,王宇,陈红松,陶其敏（北京医科大学人民医院肝病研究所,北京１０００４４）对丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ｃＤＮＡ的序列分析是验证ＨＣＶ基因分型,确定新的型与亚型的基础￣［１］．经典的序列分析方法需经繁琐的分子...     

Ⅲ型中国株HCVE2/NS1基因与已知分离株的同源性比较

利用逆转录套式ＰＣＲ扩增Ⅲ型中国株ＨＣＶＥ２／ＮＳ１基因片段,将其克隆到ｐｃＤＮＡ３载体上．采用双脱氧链终止法测定插入片段的核苷酸序列．并与已知分离株的相应区域进行同源性比较．首次克隆出Ⅲ型中国株ＨＣＶＥ２／ＮＳ１基因（ＨＣ－Ｗ１４）,其核苷酸序列与Ⅲ型日本株ＨＣＶ（ＨＣ－Ｊ６）该区域同源性为８８．３７％,其推定的氨基酸同源性为８９．２９％．而与已知的非Ⅲ型株ＨＣＶ该区域相比,核苷酸及氨基酸的同源性均相对较低．Ⅲ型中国株ＨＣＶ与Ⅱ型中国株ＨＣＶ在Ｅ２／ＮＳ１区域有较大的变异,揭示研制我国的ＨＣＶ疫苗应该考虑这种基因型之间的变异性．     

四价HCV聚合抗原的克隆,表达及在抗—HCV ELISA试剂中的应用

本研究通过反转录从丙肝病人血清中克隆了丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｃ３３ｃ基因,通过ＤＮＡ合成法又分别合成了编码ＨＣＶ核心抗原基因,ＮＳ４抗原及ＮＳ５抗原部分抗原决定簇的基因,利用基因工程手段,在大肠杆菌中表达了含有上述四种抗原的融合蛋白。该融合蛋白具有良好的抗原性和特异性,以该融合蛋白为抗原制备的抗－ＨＣＶＥＬＩＳ试剂检测了中国药品生物制品检定所１９８份标准血清时,其阳性,阴性符合分别达９７％和９８％     

新型HCV EIA诊断试剂盒的研制

丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因组结构区核壳蛋白（Ｃ）区抗原、膜蛋白Ｅ１和Ｅ２区抗原,以及非结构区ＮＳ３－ＮＳ５区抗原的区段,已经在原核细胞中获得有效的表达。同时,相应区段中的优势抗原表位肽也经化学合成法大规模地制备。ＨＣＶ基因组上各区段抗原性的分析发现,由Ｃ区和ＮＳ３区分别编码的Ｃ抗原和Ｃ３３ｃ抗原是ＨＣＶ基因组上两个优势抗原区段。其相应的抗体出现早（感染后６周可检出抗Ｃ３３ｃ抗体）,阳转率高（约９９％阳性检出率）,特异性和重复性均优于其它区段抗原。以中国人ＨＣＶ的Ｃ３３ｃ重组蛋白和分支状合成肽ＭＡＰ－Ｃ－１９为复合抗原,研制了适合我国抗ＨＣＶ抗体检测的新型丙型肝炎病毒酶免疫测定（ＨＣＶＥＬＡ）诊断试剂盒。它同当代美国Ａｂｂｏｔｔ／ＵＢＩＨＣＶＥＬＡ诊断试剂的符合率约９８％,同加拿大ＹＥＳ公司ＨＣＶＥＩＡ诊断试剂的符合率约９７．８％,阳性检出率提高了约２％,３次重复性达１００％,表明其特异性、敏感性和重复性均达到了当代第二代ＪＣＶＥＬＡ诊断试剂的水平。我国人群中抗ＨＣＶ抗体的分布情况为：正常人群的检出率１％－２％;外科类住院病人检出率约２８．８％;肝炎患者抗ＨＣＶ阳性率为３４．４％,慢活肝、肝硬化和重症肝炎患者     

HIV－1感染初始阶段的分子机制

ＨＩＶ－１感染初始阶段的分子机制项秉懿（第四军医大学分子生物学研究所,西安７１００３２）关键词艾滋病,人类免疫缺陷病毒－Ｉ型,包膜糖蛋白ｇｐ１２０,ＣＤ４受体,感染ＴｈｅＭｏｌｅｃｕｌａｒＭｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＨＩＶ－１ＩｎｆｅｃｔｉｏｎｉｎｔｈｅＩ...     

利用合成肽进行丙型肝炎病毒（HCV）的线性抗原表位分析

首先利用固相多肽合成技术对ＨＣＶ多蛋白中可能含有优势抗原表位的１４个肽段进行了化学合成,并用合成肽作包被抗原进行间接ＥＬＬＳＡ试验来分析它们的抗原性,结果表明,所有合成肽中除ＮＳ３区的Ｐ７、Ｐ８和ＮＳ５区的Ｐ１３无抗原性外,其余肽段均具有抗原活性,其中Ｃ区的Ｐ１,ＮＳ４区和Ｐ９和ＮＳ５区的Ｐ１２三个肽段的抗原性较好,与相应的重组蛋白Ｃ２２,Ｃ１００和ＮＳ５Ａ比较,它们之间的抗原性比较接近,随后选择抗原性较好的几个肽段合成了含八分支的多抗原肽（ＭＡＰ）ＭＰ１、ＭＰ２、ＭＰ３、ＭＰ１０和嵌合多肽ＣＰ１５等工程肽抗原,前者不仅保持了相应单体肽的抗原性,而且与抗体反应的敏感性有显著提高;后者含双表位改善了常规合成肽抗原表位单一的缺陷,为研究ＨＣＶ工程肽抗原进行了有益的尝试。     

汉滩病毒A9株强毒和弱毒克隆M基因片段G1糖蛋白编码区核苷酸序列的分析比较

采用逆转录－ＰＣＲ方法,用３对引物分３个片段扩增强毒克隆（Ａ９ｖ）及弱毒克隆（Ａ３％）的Ｍ基因片段ｃＤＮＡ,并克隆入ｐＧＥＭ－Ｔ载体中。采用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧法测定了Ａ３９ｓ、Ａ９ｖ病毒Ｇ１糖蛋白编码区的全序列,发现二者均由１９７８个核苷酸组成,比７６／１１８株少６个核苷酸,并发现Ａ３９ｓ在Ｇ１编码区有３３个碱基及８个氨基酸与Ａ９ｖ不同。进一步与７６／１１８、ＨＶ１１４的相关序列比较,发现Ｇ１编码区的第６０６、６１４位氨基酸的变异同Ａ３９ｓ病毒的减毒有一定相关。从Ａ３９ｓ、Ａ９ｖ、７６／１１８及ＨＶ１１４４株病毒Ｇ１糖蛋白编码区推导的氨基酸序列亲疏水性资料显示,在位于Ｇ１糖蛋白Ｃ末端的最大亲水区域的６００～６２０位氨基酸区域,弱毒株Ａ３９ｓ同强毒株Ａ９ｖ、７６／１１８、ＨＶ１１４的亲水性有明显不同,而这一差异又主要由第６１４位氨基酸的变异所引起。因此推测,Ｇ１糖蛋白Ｃ端亲水区域同汉滩病毒毒力相关,而第６１４位的精氨酸被谷氨酰胺取代,同Ａ３９ｓ病毒毒力的减弱可能有关。     

中国河南两株庚型肝炎病毒（HGV）NS5区部分cDNA的克隆与序列分析

通过逆转录－聚合酶链反应从我国河南省２例重叠感染ＨＣＶ或ＨＢＶ／ＨＤＶ的献血啼中,分离到ＨＢＶＮＳ５区的部分ｃＤＮＡ,对其进行序列分析比较,结果表明,河南株ＨＧＶＮＳ５工核苷酸与两中国ＨＧＶ主同源性高于国外代表株（８８．５－９０．６％）,但由核苷酸推导的氨基酸的同源性都无明显的地区性区别。ＨＧＶＮＳ５区氨基酸序列较保守,缺乏明显高变区,中国４株ＨＧＶ在７３８４位发生了由Ｃ→Ｔ的变异,从而导致一个人     

丙型肝炎病毒基因高变区变异的动力学研究

本文旨在对ＨＣＶ的基因高变区的变异规律进行初步探索。根据随访的５年、分别检测３个两例的ＨＣＶ持续感染者的高变区基因变异的资料分析,发现高变区的变异可能有两种不同的动态模式;一种为快速演变模式,表现为基因变异速度快、优势克隆转化快和同一时间点各克隆的遗传距离近;另一种灯对缓慢演变模式,表现为基因变异速度缓慢,优势克隆转化不明显,同一时间点不同克隆间的遗传距离远。该研究结果显示,ＨＣＶ高变区基因变划具     

从中国病人克隆丙型肝炎病毒基因组C区基因及其在大肠杆菌中的表达

本文通过逆转录（ＲＴ）－聚合酶链式反应（ＰＣＲ）,从两份分别来自湖南省娄底地区丙型肝炎病人和河北省秦皇岛市职业献血员丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ打点杂交阳性的血清中,扩增并克隆到１段５６３ｂｐ的ＨＣＶ基因组Ｃ区抗原基因Ｃ２６９／８３１,并通过ＰＣＲ得到了３个表达片段Ｃ８３１、Ｃ８０１和Ｃ５８７。测定Ｃ２６９／８３１基因的全序列后发现,中国人ＨＣＶ湖南分离株与ＨＣＶ－Ⅰ型株ＨＣＶ－ＵＳ和Ⅱ型株ＨＣＶ－ＢＫ在该基因区段的核苷酸／氨基酸序列的同源性,分别为９０．３％／９４．６％和９５．２％／９４．６％。利用原核高效表达载体ｐＢＶ２２０在大肠杆菌中有效地表达了非融合的Ｃ区抗原基因重组蛋白ＣＬ、ＣＭ和ＣＳ。通过免疫筛选法及Ｗｅｓｔｅｍ印迹法对约占菌体可溶性蛋白１１％的表达产物进行了鉴定。采用ＴｒｉｔｏｎＸ－１００和盐析处理表达产物,再进行离子交换层析纯化,得到可用于检测ＨＣＶ血清抗体的核壳蛋白（Ｃ）抗原。通过不同分子量抗原的表达,发现由Ｃ区Ｎ端８９个氨基酸组成的多肽ＣＳ其抗原性与由１５８或１６８个氨基酸组成的多肽ＣＭ或ＣＬ相同,但抗原的稳定性和表达量显著优于后两种抗原。本研究为研制ＨＣＶ抗体诊断试剂盒奠定了重要基础。     

风疹病毒包膜糖蛋白研究进展

本文对风疹病毒（ＲＶ）包膜糖蛋白近３年的研究进行综述,包括包膜糖蛋白的细胞内转运与加工,蛋白分子上的抗原位点,糖化对包膜糖蛋白加工、转动和免疫原性的影响以及基因工程抗原用于临床诊断和亚单位疫苗制备的前景与展望。     

HFRSV内影像型抗独特型人单抗重链可变区基因克隆

利用反转录－ＰＣＲ方法,从分泌肾综合症出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）内影像型抗独特型人单抗杂交瘤细胞系（Ｃ８）中,成功地克隆了抗ＨＦＲＳＶ１ｄ人单抗重链可变区基因,并将此基因重组入Ｍ１３噬菌体ＤＮＡ中,测定了此重链可变区基因全序列。经计算机分析,基因全长共３５１ｂｐ、编码１１７个氨基酸,氨基酸序列同源性分析发现所推得的该单抗ＣＤＲ２区与ＨＦＲＳＶＧ２蛋白Ｃ端有同源区,此区可能具有较强的抗原性。