拉西地平对内质网应激导致左室重塑的保护作用

目的:研究在高温高湿应激状态下拉西地平对葡萄糖调节蛋白(glucose-regulated protein78,GRP78)和C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)在大鼠心肌中表达及对心室重塑的影响。方法:将30只雄性Sprague-Dawly(SD)大鼠随机分为对照组、高温高湿组、拉西地平干预组,每组10只。喂养6周后颈动脉插管测定平均动脉压及心率。B超检测左室形态结构。免疫组化法检测大鼠心肌GRP78及CHOP蛋白及表达水平。结果:高温高湿组的大鼠平均动脉压(MBP)、隔厚度(IVST)、左室后壁厚度(LPWT)、左室重量指数(LVWI),GRP78及CHOP蛋白表达水平与对照组相比均有显著升高(p<0.01),拉西地平干预组能显著降低大鼠平均动脉压(MBP)、室间隔厚度(IVST)、左室重量指数(LVWI),GRP78及CHOP蛋白的表达水平(p<0.05)。结论:内质网应激可能参与了高温高湿诱导的左室重构;拉西地平可能通过降低GRP78及CHOP的表达干预了ERS介导的心肌肥厚通路,从而改善心脏功能。     

caspase抑制剂z-VAD-fmk对阿霉素损伤乳鼠心肌细胞calumenin、caspase-3、GRP78及GRP94表达的影响

目的：研究细胞凋亡限速酶caspase广谱抑制剂z-VAD-fmk对阿霉素损伤心肌细胞calumenin、caspase-3、GRP78及GRP94表达的影响,探讨心肌细胞网腔钙结合蛋白与内质网应激及心肌细胞凋亡是否存在相互调控关系。方法：原代培养乳鼠心肌细胞实验分为3组：对照组（正常细胞）、阿霉素组（3 mg/L阿霉素+心肌细胞）、Z-VAD-fmk组（3 mg/L阿霉素+ 0.1μmol/L Z-VAD-fmk +心肌细胞）,每组细胞设3个复孔,分别处理后置37℃、CO₂培养箱中培养24 h阿霉素组、z-VAD-fmk组。采用免疫组化方法检测培养乳鼠心室肌细胞α-SMA蛋白。采用Westernblot技术检测各组心肌细胞Calumenin、内质网应激伴侣蛋白GRP78、GRP94及caspase-3表达。结果：与对照组相比较,阿霉素组心肌细胞calumenin表达明显减少（P < 0.01）,GRP78、GRP94及caspase-3表达增加（P < 0.01）。与阿霉素组相比较,z-VAD-fmk组心肌细胞calumenin表达增加（P < 0.01）,而GRP7,GRP94及caspase-3减少（P < 0.01）。结论：caspase广谱抑制剂z-VAD-fmk增加阿霉素损伤心肌细胞calumenin表达进而缓解内质网应激。     

拉西地平对内质网应激导致左室重塑的保护作用

目的：研究在高温高湿应激状态下拉西地平对葡萄糖调节蛋白（glucose-regulated protein78,GRP78）和C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白（C/EBP-homologous protein,CHOP）在大鼠心肌中表达及对心室重塑的影响。方法：将30只雄性Sprague-Dawly（SD）大鼠随机分为对照组、高温高湿组、拉西地平干预组,每组10只。喂养6周后颈动脉插管测定平均动脉压及心率。B超检测左室形态结构。免疫组化法检测大鼠心肌GRP78及CHOP蛋白及表达水平。结果：高温高湿组的大鼠平均动脉压（MBP）、隔厚度（IVST）、左室后壁厚度（LPWT）、左室重量指数（LVWI）,GRP78及CHOP蛋白表达水平与对照组相比均有显著升高（p〈0.01）,拉西地平干预组能显著降低大鼠平均动脉压（MBP）、室间隔厚度（IVST）、左室重量指数（LVWI）,GRP78及CHOP蛋白的表达水平（p〈0.05）。结论：内质网应激可能参与了高温高湿诱导的左室重构;拉西地平可能通过降低GRP78及CHOP的表达干预了ERS介导的心肌肥厚通路,从而改善心脏功能。     

离体大鼠心肌内质网应激模型构建条件的优化

目的探讨构建体外心肌内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）模型的方法及实验条件。方法应用Langendorff灌流装置制作大鼠心脏离体缺血/再灌注模型,采用PowerLab系统持续监测血流动力学参数,Western blot检测缺血（停止灌流）不同时间/再灌注120 min后心肌ERS标志性分子糖调节蛋白（GRP）78的表达,并检测C/EBP同源蛋白（CHOP）的表达;逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测二者mRNA的表达;体外孵育心肌组织切片,分别应用不同浓度的衣霉素（tunicamycin,Tm）和二硫苏糖醇（dithiothreitol,DTT）处理3 h和6 h,Western-blot检测心肌GRP78及CHOP的表达。结果与对照组相比,离体灌注心脏缺血40 min/再灌注120 min时,心肌GRP78表达最高（P〈0.01）,CHOP蛋白、GRP78 mRNA及CHOP mRNA表达均明显升高（P〈0.01,P〈0.05和P〈0.05）,同时,各项血流动力学参数受损（均P〈0.01）;Tm 10μg/mL和DTT 2 mmol/L孵育心肌组织切片3 h时,GRP78表达较对照组显著升高（均P〈0.001）,CHOP表达亦均明显升高（P〈0.05和P〈0.01）。结论使用离体大鼠心脏缺血/再灌注和孵育心肌组织切片的方法,均可成功构建体外心肌ERS模型。     

硫化氢对大鼠糖尿病心肌病氧化应激及内质网应激的影响

目的:观察外源性给予硫化氢(H2S)供体硫氢化钠(Na HS)对大鼠糖尿病心肌病氧化应激作用以及内质网应激相关因子表达的影响。方法:将30只雄性SD大鼠随机分为对照组、糖尿病组和治疗组(n=10)。采用腹腔注射链脲佐菌素的方法制备大鼠糖尿病模型,治疗组采用腹腔注射给予Na HS干预治疗。12周后,利用离体心脏灌流装置测定心室动力学指标;透射电镜观察心肌细胞超微结构变化;测定心肌组织脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性;RT-PCR检测C/EBP同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和半胱天冬蛋白酶12(Caspase 12)基因表达。结果:与对照组比较,糖尿病组心功能明显降低、心肌超微结构损伤明显,心肌组织MDA含量增加、SOD和GSH-Px的活性明显降低,CHOP、GRP78和Caspase 12 mRNA表达明显增加。与糖尿病组比较,治疗组心功能和心肌超微结构损伤明显改善,心肌组织MDA含量下降,SOD和GSH-Px的活性明显升高,CHOP、GRP78和Caspase 12 mRNA表达明显下降。结论:外源性补充H2S对糖尿病大鼠心肌病具有保护作用,机制可能与减轻氧化应激损伤和抑制内质网应激引发的凋亡作用有关。     

miRNA在异丙肾上腺素诱导大鼠心肌肥厚中的表达及生物信息学分析*

目的:探讨miRNAs(miR199a-5P、miR206、miR133a-3P、miR499-5P)在异丙肾上腺素(ISO)诱导大鼠心肌肥厚模型组中的表达变化;并运用生物信息学方法分析相关的主要信号通路及分子机制。方法:将16只SD雄性大鼠随机分为2组:对照组和ISO模型组,模型组给予ISO(1 mg/kg)诱导心肌肥厚模型,对照组给予等量生理盐水,均采用背部皮下多点注射。连续给药10 d后采用超声心动图测量舒张期室间隔厚度(IVSd)、舒张期左室后壁厚度(LVPWd)、左室舒张末期内径(LVDd)及心脏收缩功能(EF%);称量心脏重量(HW)、大鼠体重(BW),并计算心脏/体重比(HW/BW);心肌组织HE染色,Image J分析软件测量心肌细胞表面积;RT-qPCR检测大鼠心肌组织中4种miRNAs的表达情况。运用Targetscan、miRDB、miRwalk 数据库预测大鼠4种miRNAs可能的靶基因,FunRich软件分析预测靶基因相关的信号通路。结果:与正常组相比,模型组IVSd、LVPWd增厚,LV增大,EF%明显降低;HW、HW/BW增加;模型组心肌细胞体积明显增大,排列紊乱,细胞表面积增加;模型组miR199a-5P、miR206表达上调(P＜0.05);miR133a-3P、miR499-5P表达下调(P＜0.05)。应用生物信息学预测4种miRNAs的靶基因可能参与心肌肥厚相关的信号通路主要有:VEGF/VEGFR信号通路、ErbB受体信号通路等。结论:ISO诱导心肌肥厚导致miRNAs表达的改变,生物信息学预测4种miRNAs参与心肌肥厚相关的靶基因及其主要信号通路,这些研究为心肌肥厚的调控机制及其防治措施提供了新思路。     

蒙药新Ⅱ号对扩张型心肌病大鼠心功能、心肌细胞内质网应激及凋亡的作用

目的：探讨蒙药新Ⅱ号对阿霉素性扩张型心肌病大鼠心功能、心肌病理、心肌细胞内质网应激及凋亡作用。方法：30 只SD 雄性大鼠分为3组（n=10）： 正常对照组、模型组（腹腔注射阿霉素2 mg/kg体重,1次/周,用药4周后观察4周）和蒙药新Ⅱ号组（腹腔注射阿霉素2 mg/kg体重,1次/周,用药4周后,给予蒙药新Ⅱ号30 mg/kg·d灌胃,共4周）。观察大鼠的一般情况,8 周后行高频超声心动图检查,测定各项心功能指标,检查结束后处死大鼠,取心脏,行HE 染色、VG染色及电镜观察。用TUNEL 法检测各组大鼠心肌细胞凋亡, Western blot 检测各组大鼠心肌细胞内质网伴侣蛋白GRP78、GRP94及促凋亡因子CHOP、caspase-3表达。结果：与模型组相比较,①蒙药新Ⅱ号组大鼠心脏左室结构及血流动力学各项指标均有明显改善（P<0.05）。②蒙药新Ⅱ号组大鼠心肌病理积分明显下降（P<0.01）。③蒙药新Ⅱ号组大鼠心肌细胞内质网应激伴侣蛋白GRP78、GRP94、CHOP、caspase-3表达及细胞凋亡明显减少 （P<0.01）。结论：蒙药新Ⅱ号可改善扩张型心肌病大鼠心脏功能,减轻心肌病理变化,缓解内质网应激,减少心肌细胞凋亡。这一实验结果可能是蒙药新Ⅱ号治疗扩张型心肌病作用机制之一。     

分子伴侣GRP94在创伤后应激障碍大鼠前额内侧皮质表达变化及其意义

目的检测创伤后应激障碍（Post-traumatic stressdisorder,PTSD）连续单一刺激（single prolonged stress,SPS）模型大鼠前额内侧皮质（medial prefrontal cortex,mPFC）分子伴侣葡萄糖调节蛋白94（Glucose-regulated protein,GRP94）的表达变化,探讨PTSD发病机制过程中存在未折叠蛋白反应（unfolded protein reaction,UPR）的激活及GRP94在UPR中的作用机制及意义。方法健康,雄性,成年Wistar大鼠60只,建立国际认定的PTSD-SPS模型,随机分为正常对照组和模型组,模型组大鼠分别于1d、4d、7d取材。应用免疫组化、蛋白印迹和RT-PCR方法检测PTSD大鼠mPFC神经元GRP94表达变化。结果免疫组化、蛋白印迹和RT-PCR方法均显示,给予SPS刺激后大鼠GRP94的蛋白表达及GRP94mRNA表达均高于正常组（P〈O．05）,7d达到顶峰。结论分子伴侣GRP94表达发生变化,提示SPS刺激后大鼠mPFC神经元出现未折叠蛋白反应的激活,PTSD的发生过程中GRP94参与了未折叠蛋白反应,对揭示PTSD致脑损伤的发病机制具有重要意义。     

黄芪注射液对网腔钙结合蛋白基因沉默阿霉素损伤心肌细胞内质网应激伴侣蛋白GRP78,GRP94 mRNA的作用

目的：研究黄芪注射液对网腔钙结合蛋白（calumenin）基因沉默阿霉素损伤心肌细胞内质网应激伴侣蛋白GRP78,GRP94 mRNA的作用。方法：实验将体外培养的1~3 d乳鼠心肌细胞分为5组：对照组、模型组（正常细胞+3 mg/L阿霉素）、calumenin基因沉默模型组（慢病毒感染细胞+3 mg/L阿霉素）、黄芪组1（正常细胞+3 mg/L阿霉素+200 g/L黄芪）、黄芪组2（慢病毒感染细胞+3 mg/L阿霉素+200 g/L黄芪）。构建慢病毒-calumenin质粒,转染乳鼠培养心肌细胞,采用实时荧光定量分析（real-time PCR）检测各组心肌细胞calumenin及内质网应激伴侣蛋白GRP78、GRP94 mRNA表达。结果：①与对照组比较,模型组心肌细胞calumenin mRNA表达减少（P<0.05）,而calumenin基因沉默模型组及黄芪组2心肌细胞calumenin mRNA表达明显减少（P<0.01）;与模型组比较,黄芪组1心肌细胞calumenin mRNA表达增加（P<0.05）;与calumenin基因沉默模型组比较,黄芪组2心肌细胞calumenin mRNA表达明显增加（P<0.01）。②与对照组相比较,模型组及calumenin基因沉默模型组心肌细胞内质网应激伴侣蛋白GRP78、GRP94 mRNA表达明显增多（P<0.01）;与模型组比较,黄芪组1心肌细胞GRP78、GRP94 mRNA表达明显减少（P<0.01）;与calumenin基因沉默模型组比较,黄芪组2心肌细胞内质网应激伴侣蛋白GRP78、GRP94 mRNA表达明显减少（P<0.01）。结论：①阿霉素损伤可引起心肌细胞calumenin表达减少。②Calumenin可缓解阿霉素损伤所诱导心肌细胞内质网应激。黄芪注射液可抑制阿霉素损伤所诱导心肌细胞内质网应激,这种作用可能系通过calumenin介导实现的。     

瑞舒伐他汀对同型半胱氨酸诱导的小鼠血管平滑肌细胞去分化和内质网应激的影响及其机制研究

目的：探讨瑞舒伐他汀（Rsv）对同型半胱氨酸（Hcy）诱导的小鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）去分化及内质网应激（ERS）的影响。方法：Hcy和不同浓度瑞舒伐他汀（0.1,1.0,10 μmol/L）干预VSMCs,48 h后检测细胞骨架及表型蛋白（α-SMA）、钙调节蛋白（calponin）和骨桥蛋白（OPN）变化,并检测ERS相关mRNA （Herpud1,XBP1s和GRP78）在不同时间点的水平;再在Hcy及Rsv干预基础上给予ERS抑制剂4-苯基丁酸（4-PBA）或诱导剂衣霉素来调控细胞ERS水平,检测细胞增殖、迁移和表型蛋白表达,明确ERS在Rsv表型保护中的作用;在Hcy及Rsv干预基础上给予雷帕霉素靶蛋白（mTOR）-P70S6激酶（P70S6K）信号抑制剂雷帕霉素或激活剂磷脂酸,检测mTOR-P70S6K磷酸化和ERS水平,明确mTOR-P70S6通路在Rsv调控ERS中的作用。结果：与Hcy组相比,Hcy+中Rsv组（1 μmol/L）和Hcy+高Rsv组（10 μmol/L）细胞骨架极性明显增强,α-SMA、calponin表达升高,而OPN及ERS相关mRNA水平显著降低（P<0.01）;与Hcy组比较,Hcy+Rsv组和Hcy+4-PBA组增殖、迁移水平降低（P<0.01）,收缩蛋白表达增强,但衣霉素干预则逆转了Rsv的上述作用;与Hcy组相比,Hcy+Rsv组和Hcy+雷帕霉素组的mTOR-P70S6K磷酸化及ERS水平降低（P<0.01）,但磷脂酸干预抑制了Rsv对mTOR-P70S6K通路和ERS的影响。结论：瑞舒伐他汀可能通过mTOR-P70S6K通路抑制ERS水平,抑制Hcy诱导的小鼠VSMCs去分化改变。     

Selection with two alleles and complete dominance

For a plant selection model with frequency-independent viabilities, fertilities and selfing rates, it is shown that apart from global fixation, for certain parameter combinations a protected polymorphism and facultative fixation (either allele may become fixed according to initial frequencies) may both occur. Facultative fixation requires different selling rates for the dominant and recessive type. Protection of the polymorphism requires resource allocation for male and female function. In this connection the problem of purely genetically caused population extinction is discussed.
For general frequency dependence and regular segregation, the chances for establishment of a completely recessive gene are compared to those of a completely dominant gene. It is proven that the process of establishment of the recessive gene, despite a fitness advantage, may be considerably endangered by drift effects if random mating prevails. The recessive gene may reach the same effectivity in establishment as a dominant gene, only if the recessive homozygote mates exclusively with its own type during the period of establishment.     

杆状病毒出芽病毒粒子膜融合蛋白的研究进展

杆状病毒是一类感染节肢动物的病原微生物,其基因组为双链环状DNA,大小为80～180kb.     

Inception of the Modern Public Health System in China and Perspectives for Effective Control of Emerging Infectious Diseases: In Commemoration of the 140th Anniversary of the Birth of the Plague Fighter Dr. Wu Lien-Teh

In this article, we systematically review Dr. Wu Lien-Teh's academic achievements and outstanding contributions in the prevention and control of the plague epidemic in northeast China and introduce the development of the earliest public health epidemic prevention system in China in order to commemorate the 140th anniversary of Dr. Wu Lien-Teh's birth. We hope that this article will provide insights into the effective prevention and control of emerging infectious diseases as well as the current worldwide pandemic of COVID-19, facilitating the improvement and development of public health systems in China and around the globe.