恶性疟原虫杂合多肽抗原融合基因的克隆和表达

合成了５对寡核苷酸片段，分别连接在两种恶性疟原虫杂合多肽（４５肽和５８肽）抗原基因片段（ＨＰＦＧＡ和ＨＰＦＧＢ）的头部和尾部，将这两种片段分别与霍乱毒素Ｂ亚单位（ＣＴ－Ｂ）基因末端融合。两种杂合多肽抗原分别含有数个红内期和红外期有代表性的、并能被Ｔ或Ｂ淋巴细胞识别的保护性抗原表位，ＣＴ－Ｂ基因前端具有促使分泌的信号肽序列，将这两种融合基因的不同重组质粒分别转化大肠杆菌，对转化菌的培养上清检测表明融     

恶性疟原虫杂合多肽抗原融合基因的克隆和表达

合成了５对寡核苷酸片段,分别连接在两种恶性疟原虫杂合多肽（４５肽和５８肽）抗原基因片段（ＨＰＦＧＡ和ＨＰＦＧＢ）的头部和尾部,将这两种片段分别与霍乱毒素Ｂ亚单位（ＣＴ－Ｂ）基因末端融合。两种杂合多肽抗原分别含有数个红内期和红外期有代表性的、并能被Ｔ或Ｂ淋巴细胞识别的保护性抗原表位,ＣＴ－Ｂ基因前端具有促使分泌的信号肽序列。将这两种融合基因的不同重组质粒分别转化大肠杆菌,对转化菌的培养上清检测表明融合蛋白被分泌性表达,既具有恶性疟原虫和ＣＴ－Ｂ抗原性,又保持了ＣＴ－Ｂ与其受体神经节苷脂ＣＭ１结合的生物学活性。     

CD自杀基因系统对胶质瘤细胞作用的实验研究

将含大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（ＥＣ－ＣＤ）基因的重组逆转录病毒感染大鼠神经胶质瘤细胞Ｃ６,获得稳定表达ＣＤ的克隆细胞Ｃ６／ＣＤ。ＣＤ可以将无毒性的原药５－氟胞嘧啶（５－ＦＣ）转化成高度细胞毒性物质５－氟尿嘧啶（５－ＦＵ）。生长抑制试验表明Ｃ６／ＣＤ细胞对５－ＦＣ高度敏感。ＩＣ５０为３μｍｏｌ／Ｌ,５－ＦＣ对Ｃ６细胞基本无毒性,ＩＣ５０近６０００μｍｏｌ／Ｌ;而Ｃ６／ＣＤ和Ｃ６细胞均低浓度５０ＦＵ敏感。     

三维适形放疗联合替莫唑胺治疗恶性脑胶质瘤的临床研究

目的：研究恶性脑胶质瘤术后三维适行放疗联合替莫唑胺的有效性和安全性。方法：选择我院收治11例术后病例证实为恶性脑胶质瘤患者,行三维适行放疗,180cGy-200cGy/次,1次/天,5天/周,DT50Gy-68Gy,同时采用替莫唑胺化疗。结果：本组患者CR为54.5%,PR为27.3%,SD为9.1%,PD为9.1%,有效率为81.8%（9/11）,1a,2a和3a生存率分别为63.6%、27.3%和18.2%,毒副反应较轻,均可以耐受。结论：三维适行放疗联合替莫唑胺治疗术后恶性脑胶质瘤近期疗效较好,耐受性良好且安全性较高。     

恶性疟原虫子孢子CS抗原融合基因的表达及其生物活性

采用遗传工程技术了获得了含有恶性疟原虫子孢子ＣＳ抗原融合基因的重组质粒ｐＭＣ０５５－ＣＳ的工程菌株,能高效分泌ＣＳ抗原的融合蛋白至胞外,可达２５ｍｇ／Ｌ,具有霍乱毒素Ｂ亚单位和子孢子ＣＳ的抗原性;将纯化的融合蛋白免疫Ｃ５７纯系小鼠,免疫后抗ＣＴ－Ｂ抗体滴度可达１：３ ２００－６４００,抗ＣＳ抗体滴度可达１：３２０－６４０,免疫小鼠用纸氏疟孢子腹腔攻击,保护率达３４－４５％。     

模拟微重力对恶性胶质瘤细胞U87 影响的实验研究

目的:探讨模拟微重力(Modeled microgravity,MMG)对恶性胶质瘤细胞U87形态、生长增殖、基质金属蛋白酶-2、-9(Matrix metalloproteinase 2,MMP-2、Matrix metalloproteinase 9,MMP-9)及神经胶质酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)表达的影响。方法:常规培养U87细胞,传代培养3代后分为两组,正常重力组(Normal gravity,NG组)及模拟微重力干预组(Modeled microgravity,MMG组),相应条件下培养24 h,48 h和72 h。倒置显微镜观察U87细胞形态改变,细胞计数法及四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT法)检测模拟微重力干预和干预后U87细胞生长增殖情况;Western Blot检测不同培养时间后胶质瘤细胞U87 MMP-2、MMP-9及GFAP蛋白的表达情况。结果:模拟微重力条件下培养72 h后,U87细胞轮廓不规则,边缘圆钝,触角变少;模拟微重力条件下,U87细胞生长速度明显减慢,并且经模拟微重力干预48 h和72 h后的胶质瘤细胞经传代再培养,其增殖率也明显低于正常重力组;同时,U87细胞MMP-2及MMP-9蛋白表达水平与模拟微重力处理时间呈时间依赖性下降,而GFAP蛋白表达水平则呈时间依赖性升高。结论:模拟微重力影响U87细胞的形态、生长及表型。     

多种胶质瘤细胞系中获取胶质瘤干细胞方法的研究

目的:进一步证明胶质瘤干细胞是广泛存在的,并寻找一种简洁的方法从不同胶质瘤细胞系中提取肿瘤干细胞。方法:将胶质瘤细胞以合适的密度接种于96孔板中,获取胶质瘤干细胞,并通过检测其自我更新能力、多向分化能力、成瘤能力及胶质瘤干细胞标记物的表达情况对其进行鉴定。结果:多种细胞系中均成功获取了胶质瘤干细胞。并且这细胞球表达神经干细胞的标志物,不表达神经细胞分化标志物,同时又有多向分化的能力,仅5000个细胞就可以在裸鼠颅内成瘤。结论:我们的研究结果表明胶质瘤干细胞是广泛存在的,并为以后进一步研究胶质瘤干细胞的特性及靶向胶质瘤干细胞的药物做铺垫。     

多种胶质瘤细胞系中获取胶质瘤干细胞方法的研究

目的：进一步证明胶质瘤干细胞是广泛存在的,并寻找一种简洁的方法从不同胶质瘤细胞系中提取肿瘤干细胞。方法：将胶质瘤细胞以合适的密度接种于96孔板中,获取胶质瘤干细胞,并通过检测其自我更新能力、多向分化能力、成瘤能力及胶质瘤干细胞标记物的表达情况对其进行鉴定。结果：多种细胞系中均成功获取了胶质瘤干细胞。并且这细胞球表达神经干细胞的标志物,不袁达神经细胞分化标志物,同时又有多向分化的能力,仅5000个细胞就可以在裸鼠颅内成瘤。结论：我们的研究结果表明胶质瘤干细胞是广泛存在的,并为以后进一步研究胶质瘤干细胞的特性及靶向胶质瘤干细胞的药物做铺垫。     

CD／5-FC自杀基因治疗系统对恶性人脑胶质瘤细胞影响的离体研究

在离体条件下探讨CD/5 FC自杀基因治疗系统对恶性人脑胶质瘤细胞的抗癌作用。通过将CD基因插入真核表达载体pcDNA3.0多克隆位点构建pCMVCD表达质粒 ,采用限制性内切酶消化鉴定所构建的质粒 ,并进行CD基因测序。采用LipofectAMINE2 0 0 0脂质体介导法将CD基因转染U2 5 1恶性人脑胶质瘤细胞 ,G4 18筛选获得抗性克隆 (取名为U2 5 1/CD细胞 ) ,使用不同浓度的 5 FC作用于U2 5 1/CD细胞 ,MTT法测定活性细胞比率。采用高效液相色谱法 (HPLC)检测 5 FC培养液内 5 FU的浓度。结果如下 :真核表达质粒pCMVCD构建成功 ,并通过酶切鉴定。U2 5 1细胞获得了质粒的成功转染。未转染的U2 5 1细胞对 5 FC不敏感 ,IC50 约为 6 5 0 0 μmol/L ,而转染基因后IC50 约为 10 μmol/L。基因转染使G4 18抗性细胞(U2 5 1/CD细胞 )对 5 FC高度敏感。并且加入不同浓度的 5 FC后 ,U2 5 1/CD细胞培养液内均能检测到 5 FU。实验结果表明 :CD/5 FC系统可以用于胶质瘤的治疗 ,CD基因修饰U2 5 1细胞及其表达的离体研究为胶质瘤基因治疗的在体研究提供依据。     

对鼻咽癌恶性转化基因Tx表达的初步研究

运用杂交组化及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ法,对中国人鼻咽癌细胞株恶性转化基因Ｔｘ的表达进行了初步研究。结果表明该基因在鼻咽癌细胞株中表达１．３ｋｂｍＲＮＡ,但表达强度较低,在ＨＰＶ阳性或阴性人宫颈癌细胞中均无表达,ＥＢＶ阴性的Ｂ淋巴细胞系及ＨＴＬＶ－１阳性的Ｔ细胞系中为阴性,而在ＥＢＶ阳性的Ｂ９５－８及Ｒａｊｉ细胞中Ｔｘ基因表达强烈,从而提示ＨＰＶ及ＨＴＬＶ－１不增强Ｔｘ的表达水平,而ＥＢＶ可能使Ｔｘ基因活化．这为进一步研究ＥＢＶ与Ｔｘ等瘤基因协同作用提供了新的依据。     

多形性脑胶质母细胞瘤化学及基因治疗的研究进展

多形性脑胶质母细胞瘤是最常见的颅内肿瘤之一且预后差。即使积极采用手术,放疗及化疗的联合治疗方法,中位生存期小于1年。传统的恶性胶质瘤的化学治疗主要是应用细胞周期性或非周期性细胞毒性药物,直接杀死肿瘤细胞。随着人们对胶质瘤细胞生物学行为的深入研究,近年来新的细胞毒性药物(如替莫唑胺)不断开发出来;替莫唑胺及亚硝基脲类药物耐药性得到了部分解决以及非细胞毒性药物如酪氨酸激酶抑制剂及细胞间信号传导通路抑制剂在临床中的应用。此外,在导入自杀基因、修复或导入抑癌基因、肿瘤免疫基因治疗、血管生成抑制基因治疗、对流增强传送运输系统等基因治疗策略方面亦展开了广泛的临床研究。使得化学治疗及基因治疗成为GBM手术及放疗的有益补充。     

Prediction of Aquaporin Function by Integrating Evolutionary and Functional Analyses

Aquaporins (AQPs) are a family of channel proteins, which transport water and/or small solutes across cell membranes. AQPs are present in Bacteria, Eukarya, and Archaea. The classical AQP evolution paradigm explains the inconsistent phylogenetic trees by multiple transfer events and emphasizes that the assignment of orthologous AQPs is not possible, making it difficult to integrate functional information. Recently, a novel phylogenetic framework of eukaryotic AQP evolution showed congruence between eukaryotic AQPs and organismal trees identifying 32 orthologous clusters in plants and animals (Soto et al. Gene 503:165–176, 2012). In this article, we discuss in depth the methodological strength, the ability to predict functionality and the AQP community perception about the different paradigms of AQP evolution. Moreover, we show an updated review of AQPs transport functions in association with phylogenetic analyses. Finally, we discuss the possible effect of AQP data integration in the understanding of water and solute transport in eukaryotic cells.     

Gene Network Polymorphism Is the Raw Material of Natural Selection: The Selfish Gene Network Hypothesis

Population genetics, the mathematical theory of modern evolutionary biology, defines evolution as the alteration of the frequency of distinct gene variants (alleles) differing in fitness over the time. The major problem with this view is that in gene and protein sequences we can find little evidence concerning the molecular basis of phenotypic variance, especially those that would confer adaptive benefit to the bearers. Some novel data, however, suggest that a large amount of genetic variation exists in the regulatory region of genes within populations. In addition, comparison of homologous DNA sequences of various species shows that evolution appears to depend more strongly on gene expression than on the genes themselves. Furthermore, it has been demonstrated in several systems that genes form functional networks, whose products exhibit interrelated expression profiles. Finally, it has been found that regulatory circuits of development behave as evolutionary units. These data demonstrate that our view of evolution calls for a new synthesis. In this article I propose a novel concept, termed the selfish gene network hypothesis, which is based on an overall consideration of the above findings. The major statements of this hypothesis are as follows. (1) Instead of individual genes, gene networks (GNs) are responsible for the determination of traits and behaviors. (2) The primary source of microevolution is the intraspecific polymorphism in GNs and not the allelic variation in either the coding or the regulatory sequences of individual genes. (3) GN polymorphism is generated by the variation in the regulatory regions of the component genes and not by the variance in their coding sequences. (4) Evolution proceeds through continuous restructuring of the composition of GNs rather than fixing of specific alleles or GN variants.     

SARS-CoV(BJ01)基因预测及功能推测

通过对有关SARS—Cov文献的调研,指出了有关基因预测和功能研究的不足。为制备有效的药物和疫苗,对SARS—CoV(BJ01)重新进行了基因预测和功能推测。比较12种基因预测方法对冠状病毒属中已知基因的预测优劣,选用Heuristic models、Gene Identification、ZCURVE—CoV和ORF FINDER4种较好的方法来预测基因,然后运用AT—Gpr分析第一起始密码子的可能性及是否符合Kozak规则,同时搜索转录调控序列,以提高基因预测的准确性。共预测出34个ORF,排除NCBI及有关文献中完全相同或有微弱差别的13个,得到21个大于50个氨基酸的可能新基因。对于预测出的蛋白质,运用ProtParam分析它们的物理化学特征,用SignaIP分析蛋白是否有信号肽,用BLAST、FASTA分析是否有相似序列,用TMPred、TMHMM、PFAM和HMMTOP分析结构域或模体,以提高基因功能推测的可靠性。根据4种基因预测方法使用情况、与其他冠状病毒属已知基因匹配分值、匹配预期值、已知基因与预测基因长度差别,将21个可能的新基因按出现可能性分为4类。同时对结果进行了讨论。     

Gene Diversity, Gene Differentiation Coefficients of Parent Populations and Prediction of Their F_1 Heterosis

1IntroductionThepredictionofheterosisisveryimportantinbreeding.Atearlystage,scientistspaidgreatattentiontopredictheterosisbyusinggeneticdistancebasedonqllantitativetraits.Butthiskindofdistanceisaffectedstronglybyenvironmentalfactors.Soitisdifficulttoreflecttheactualgeneticdifferencebetweenparentpopulations.Recently,scientistspaymoreattentiontopredictheterosiswithgeneticdistanceestimatedfromproteinandDNApolymorphisms.Thisisbecauseitcanreflectthegeneticdifferencebetweenpopulationstrulier.Inte…     

单纯疱疹病毒胸苷激酶基因对人胶质母细胞瘤细胞的杀伤效应研究

目的　研究单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSV1 TK)基因转染并联合抗病毒药更昔洛韦 (Ganciclovir ,GCV)对人胶质母细胞瘤细胞的杀伤效应。方法　采用基因工程技术构建带HSV1-TK基因的逆转录病毒重组体pLX SN TK ,采用脂质体介导入PA317包装细胞 ,建立重组逆转录病毒载体分泌细胞株PA317 TK ;用该细胞上清液转导人胶质母细胞瘤细胞 ,用不同浓度GCV作用人胶质母细胞瘤细胞SW0 38 C2 TK和野生型SW0 38 C2 ,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测 72h后细胞存活率 ,并求出半杀伤浓度。结果　重组逆转录病毒载体pLXSN TK能有效地将TK基因导入SW0 38-C2细胞内 ,并使其获得对GCV的敏感性 ;体外细胞毒实验 :在 2 0 μmol LGCV存在的情况下 ,野生型细胞无明显改变 ,而实验组细胞明显死亡 ,半杀伤浓度IC50 为 0 8μmol L ,与SW0 38 C2相比 ,对GCV的敏感性提高了 6 0 0倍 ,旁杀效果也较明显。结论　SW0 38 C2转染TK基因后 ,能有效地被GCV杀灭。显示了其潜在的临床应用价值     

禾谷镰刀菌中FgPDE1基因的敲除及其功能的研究

目的:旨在敲除禾谷镰刀菌Fusarium graminearum Fg PDE1基因,确定其缺失突变体表型,从而分析该基因的生物学功能。方法:应用Split-marker技术构建含有潮霉素基因敲除盒,通过PEG介导原生质体转化,PCR筛查抗潮霉素转化子以获得缺失突变体ΔFg PDE1,根据突变体表型变化及致病性的检测对Fg PDE1基因的功能进行分析。结果:采用Split-marker技术,成功构建了Fg PDE1基因敲除盒;PEG介导转化禾谷镰刀菌原生质体后成功获得转化子。经PCR筛查,得到3个PCR确认的敲除突变体;表型观察发现,ΔFg PDE1菌落的外型及菌落生长速度与野生型没有明显差异。孢子侵染西红柿果实实验证明:以西红柿为侵染宿主,相对于野生型,突变体致病性没有明显减弱;但突变体分生孢子产量显著下降。结论:Fg PDE1基因可能与禾谷镰刀菌分生孢子的形成有关。     

结合基因表达数据和ChIP-chip数据的酵母转录调控模块的识别

活细胞依赖其众多的转录调控模块来实现复杂的生物功能,识别转录调控模块对深入理解细胞的功能及其转录机制有着重要的意义。本文结合酵母基因表达数据和ChIP-chip数据,提出了一种转录调控模块识别算法。该算法通过采用不同的P值阈值分别得到了核心集和粗糙集,然后对核心集和粗糙集进行判别,最后对基因进行扩展之后得到基因转录调控模块。将该算法运用到两个酵母基因表达数据中,得到了一些具有显著生物学意义的基因转录调控模块。与其它算法相比,该算法不仅可以识别含有较多基因的转录调控模块,而且可以识别一些其它算法不能识别的基因转录调控模块。识别得到的基因转录调控模块有着不同的生物学功能,并且有助于进一步理解酵母的转录调控机制。     

基于人类信号网络和表达谱数据挖掘动脉粥样硬化相关模块

目的:动脉粥样硬化是一种高致死率的慢性炎症疾病,其发生和发展的机制尚不明确。本文基于人类信号网络和基因表达谱数据对动脉粥样硬化相关模块进行挖掘,以探究其在疾病发生发展中的作用机制。方法:结合人类信号网络和基因表达谱数据,设计显著差异模块筛选策略,通过功能分析,挖掘动脉粥样硬化相关模块,对动脉粥样硬化的致病机制进行研究。结果:基于网络模块的平均表达值改变量,采用两种随机方法,进行显著差异模块筛选,最终获得8个动脉粥样硬化相关的显著差异模块。结论:应用本文提出的整合筛选策略,能识别与动脉粥样硬化相关的模块,获得潜在的致病基因,并从外周血的基因表达改变来探究动脉粥样硬化致病机制,这对动脉粥样硬化的诊断、治疗以及发生发展机制的研究具有重要意义。