热疗对SW1990胰腺癌细胞上皮间质转化（EMT）的影响及其作用机制

目的：探讨热疗对化疗诱导的人胰腺癌细胞株SW1990细胞上皮间质转化（EMT）的影响及其可能的作用机制。方法：分别用不同浓度吉西他滨（0,5,10,20,30wM）作用于SW1990细胞不同时间（24,48,72小时）及30μM吉西他滨作用24h联合热疗43℃1h,观察细胞的形态学变化,通过四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞的增殖情况。采用Westernblot方法检测细胞内E-cadherin蛋白和剪切的Notchl蛋白的表达。结果：①吉西他滨在一定浓度范围内可明显抑制SW1990细胞的增殖（P〈0．05）,并呈浓度和时间依赖性。吉西他滨作用前24h给予43℃1h热疗预处理可显著增强吉西他滨对SW1990细胞的抑制作用（P〈0．05）②吉西他滨作用SW1990细胞24小时后,细胞数目减少,细胞形态变大,细胞呈梭形,且细胞间连接减少;而热疗预处理的联合能够逆转此种形态学变化。③吉西他滨作用24小时后,细胞内E-cadherin蛋白的表达下调、CleavedNotchl的蛋白表达上调,热疗预处理可明显上调吉西他滨诱导的E-cadherin蛋白表达下调、并下调CleavedNotchl蛋白表达的上调。结论：热疗预处理显著逆转吉西他滨所诱导的人胰腺癌细胞株sW1990细胞的EMT现象,其机制可能与Notch信号通路有关。     

沉默FOXQ1可逆转SW480细胞的上皮-间质转化

FOXQ1是FOX家族的的重要成员之一,其参与了多种人类肿瘤的上皮间质转化(epithelial- mesenchymal transition,EMT).本研究设计合成了FOXQ1基因的shRNA（short hairpin RNA）,用此转染SW480细胞,通过显微镜观察细胞形态,Transwell小室、细胞黏附试验检测转移能力及黏附能力,以探索FOXQ1与结直肠癌细胞EMT的关系.结果显示,沉默FOXQ1后,SW480细胞顶底极性及细胞间紧密连接增加,侵袭、迁移的细胞数目减少,同种黏附能力增加,异种黏附能力降低.进一步的机制研究表明,沉默FOXQ1基因可以导致SW480细胞的上皮标志因子E-cadherin表达显著增高,而间质细胞标志因子N-cadherin、Vimentin及MMP2表达均降低.以上结果表明,沉默FOXQ1基因可以逆转SW480细胞EMT,其机制可能与E-cadherin的上调和N cadherin、Vimentin、MMP2的下调有关,这为进一步研究FOXQ1在结直肠癌发生发展中的作用提供实验基础.     

MiRNA对上皮-间质转化的调控作用

上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是胚胎发育、组织分化和器官形成的重要生理过程,也是慢性炎症、器官纤维化和癌症转移等疾病的重要病理过程。近年来发现多种微RNA(microRNA,miRNA)通过靶向EMT相关蛋白,例如E-钙粘蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、Snail、ZEB和Twist等转录因子来调控EMT的发生和发展,这些例子揭示了EMT分子机制的"冰山一角",一个庞大的EMT转录后调控网络正在被发现。本文总结了miRNA对EMT相关蛋白的调控作用,并对miRNA-EMT调控网络的后续研究进行了讨论。     

环状GMP-AMP合成酶高表达对乳腺癌细胞上皮间质转化的影响

目的:探讨环状GMP-AMP合成酶(cGAS)高表达对乳腺癌MCF7细胞发生上皮间质转化(EMT)的影响。方法:构建稳定高表达cGAS的慢病毒载体并转染MCF7细胞;转染后细胞分别培养12 h,24 h,48 h,72 h,每组实验重复三次,采用MTT检测cGAS对MCF7细胞增殖的影响; transwell法检测高表达cGAS对MCF7细胞迁移能力的影响;蛋白免疫印迹(Western blot)法分析EMT相关蛋白E-cadherin和N-cadherin的表达情况。结果:与对照组比较,cGAS上调后MCF7细胞增殖能力显著增强(P<0.05);细胞形态学观察显示cGAS上调后诱导MCF7细胞EMT发生,细胞形态由鹅卵石样变为梭形; transwell实验结果显示,cGAS上调导致MCF7细胞迁移能力增强(P<0.05); Western blot结果表明,cGAS上调后上皮标记蛋白E-cadherin表达下降(P<0.05),间质标记蛋白N-cadherin表达增加(P<0.05)。结论:cGAS上调可增强乳腺癌细胞的增殖和迁移能力,诱导乳腺癌细胞EMT发生...     

Napsin A基因对A549细胞在上皮-间质转化中增殖的影响及其机制

采用慢病毒载体质粒PLJM1将NapsinA基因转染到人肺腺癌细胞——A549细胞中,获得稳定表达Napsin A蛋白的特性并鉴定,通过转化生长因子-β1刺激A549细胞发生上皮-间质转化,体外构建上皮-间质转化模型并鉴定。MTT法检测转基因前后A549细胞在上皮-间质转化过程中生长速率的变化;流式细胞术检测其细胞周期的改变,最后予Western blot检测黏着斑激酶的表达情况,探讨Napsin A基因对A549细胞在上皮-间质转化过程中增殖的影响及其机制。结果表明转染后的A549细胞表达Napsin A蛋白明显增加(P<0.01);A549细胞发生上皮-间质转化后细胞E钙蛋白表达下调(P<0.01),Ⅰ型胶原表达上调(P<0.01);转基因细胞在体外上皮-间质转化模型中增殖速度减慢(P<0.05),且细胞周期被阻滞在G_1期(P<0.01),其表达整合素信号传导通路的基础分子——黏着斑激酶的量显著下降(P<0.01)。提示Napsin A基因可以抑制A549细胞在上皮-间质转化过程中的进一步增殖,其机制可能与抑制整合素信号传导通路有关。     

MMP-3与乳腺癌上皮间质转化的关系及其意义

为了探讨MMP-3在乳腺癌中表达与乳腺癌上皮间质转化的关系及其在乳腺癌浸润转移中的作用.采用免疫组织化学检测正常乳腺组织、乳腺癌癌旁组织、乳腺癌组织中MMP-3、Claudin-1、Vimentin的表达情况.研究发现:1)MMP-3在乳腺癌组织的阳性表达率较癌旁组织及正常乳腺组织高且具有统计学意义(P<0.05).Claudin-1在乳腺癌中的阳性表达率明显低于癌旁组织及正常乳腺组织具有统计学意义(P<0.05).Vimentin在乳腺癌组织阳性表达率高于癌旁组织及正常乳腺组织具有统计学意义(P<0.05);2)随着乳腺癌病理分期的增加MMP-3表达逐渐增加,同时出现Claudin-1蛋白表达降低及Vimentin蛋白表达升高.相关分析表明MMP-3与Claudin-1的表达呈负相关(r=-0.301,P=0.019),与Vimentin的表达呈正相关(r=0.378,P=0.03),Claudin-1与Vimentin的表达呈负相关(r=-0.278,P=0.031).结果提示,MMP-3可能是通过介导乳腺癌细胞发生上皮间质转化来参与乳腺癌的浸润转移.     

TDGF-1在胃癌中表达的意义及其在上皮间质转化中的作用

探讨胚胎瘤衍生生长因子(teratocarcinoma-derived growth factor-1,TDGF-1)在胃癌中表达的临床意义及其与上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的关系.分别采用免疫组化SP法和逆转录-聚合酶连反应(RT-PCR)方法,检测胃癌组织和正常胃组织中TDGF-1、E-cadherin、Vimentin的表达情况(IHC70例;RT-PCR40例),分析TDGF-1表达与临床病理特征的关系及TDGF-1、E-cadherin、Vimentin三者表达的相关性.TDGF-1、E-cadherin、Vimentin蛋白在胃癌组织中的阳性表达率分别为70%、34.3%、52.9%,在正常胃组织中的阳性表达率分别为38.5%、94.3%、15.7%(P<0.05);TDGF-1、E-cadherin、Vimentin mRNA在胃癌组织中的阳性表达率分别为67.5%、37.5%、52.5%,在正常胃组织中的阳性表达率分别为35%、87.5%、22.5%(P<0.05);TDGF-1蛋白和mRNA的表达均与胃癌的浸润深度、淋巴结转移及TNM分期显著相关(P<0.05);TDGF-1高表达与E-cadherin表达减低显著相关(r=-0.447、P<0.05),TDGF-1高表达与Vimentin表达升高显著相关(r=0.318、P<0.05),E-cadherin表达减低与Vimentin表达升高显著相关(r=-0.283、P<0.05).TDGF-1可能通过调控E-cadherin、Vi-mentin表达促进EMT,从而在胃癌的侵袭转移中发挥重要作用.     

藏红花素调控NLRP3通路抑制上皮间质转化治疗糖尿病肾病的机制研究

本研究从上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)和NLRP3通路角度研究藏红花素(crocin, CRO)治疗糖尿病肾病(diabetic kidney disease, DKD)的效果及作用机制。将60只C57BL/6J小鼠适应性喂养1周,随机选取10只作为正常组,采取正常饲养。其余小鼠接受高脂饮食继续喂养8周,之后链脲佐菌素造模并随机平均分为模型组、MCC950组(10 mg/kg MCC950,腹腔注射)、低剂量CRO组(5 mg/kg,灌胃)、中剂量CRO组(10 mg/kg,灌胃)、高剂量CRO组(20 mg/kg,灌胃)。治疗8周后,收集小鼠24 h尿液样本、血液样本、肾脏进行分析测定。采用试剂盒测定小鼠24 h尿蛋白定量(24 h-urine total protein, 24 h-UTP)、血清肌酐(serum creatinine, Scr)、血尿素氮(blood urea nitrogen, BUN)评估其肾功能。对肾脏同一部位进行苏木素-伊红(hematoxylin-eosin, HE)、马松(Masson)染色...     

Egfl7 与非小细胞肺癌上皮间质转化关系的研究

目的:研究Egfl7与非小细胞肺癌(NSCLC)上皮间质转化标志物E-cadherin,Vimentin的相关性,探讨Egfl7是否参与NSCLC的上皮间质转化(EMT)。方法:分别采用免疫组化法和RT-PCR法检测40例NSCLC组织和20例肺癌旁正常肺组织中Egfl7,E-cadherin和Vimentin蛋白和mRNA的表达情况。结果:1).NSCLC组织中的Egfl7蛋白和mRNA的表达水平明显高于癌旁正常肺组织;其差异有统计学意义(P<0.05)。Egfl7的表达水平与肺癌的临床分期、及淋巴结转移密切相关(p0.05)。结论:NSCLC组织中Egfl7高表达,Egfl7可能与NSCLC的侵袭性相关;Egfl7与E-cadherin呈负相关,与Vimentin表达成正相关,Egfl7可能参与了NSCLC患者的上皮间质转化(EMT)过程,阻断Egfl7信号可能会抑制NSCLC患者的ENT。     

上皮间充质转化促进肿瘤细胞干性获得的研究进展

上皮间充质转化是上皮细胞丢失细胞极性和细胞黏附,而获得间充质细胞迁移和侵袭特性的生物学过程.肿瘤干细胞是存在于肿瘤中具有自我更新和异质性分化能力的一小群细胞,在肿瘤的发生发展过程中起重要的作用.上皮间充质转化(EMT)与肿瘤的转移密切相关,而近几年的研究表明,EMT也可以促进肿瘤细胞获得干细胞的特性,因此使肿瘤治疗更困难,本文对EMT促肿瘤干细胞形成机制及其对临床治疗意义的研究进展作一综述.     

高温诱导金黄仓鼠胚神经上皮细胞基因的差异表达

以mRNA差异显示法研究高温作用后金黄仓鼠胚神经上皮细胞基因的差异表达。结果表明,高温处理后第16h,从鼠胚神经上皮细胞基因表达中检出两条良好重复性差异序列。该差异序列为未知序列,属新EST,提示高温可能诱导金黄仓鼠胚神经上皮细胞基因表达发生变化。     

Transformation of Epithelial Ovarian Cancer Stemlike Cells into Mesenchymal Lineage via EMT Results in Cellular Heterogeneity and Supports Tumor Engraftment

Ovarian cancers are heterogeneous and contain stemlike cells that are able to self-renew and are responsible for sustained tumor growth. Metastasis in the peritoneal cavity occurs more frequently in ovarian cancer than in other malignancies, but the underlying mechanism remains largely unknown. We have identified that ovarian cancer stemlike cells (CSCs), which were defined as side population (SP) cells, were present in patients’ ascitic fluid and mesenchymally transformed cell lines, ES-2 and HO-8910PM. SP cells, which were sorted from both cell lines and implanted into immunocompromised mice, were localized to the xenografted tumor boundary. In addition, SP cells exhibited an epithelial phenotype and showed a distinct gene expression profile with reduced expression of cell adhesion molecules (CAMs), indicating that SP cells exert an important role in ovarian cancer progression on the basis of their delicate interaction with the surrounding microenvironment and anatomical localization in tumors. In contrast, non-SP cells exhibited a more mesenchymal phenotype and showed more increased invasive potential than SP cells. This heterogeneity was observed as an endogenous transformation via the epithelial–mesenchymal transition (EMT) process. Inhibition of the EMT process by Snail1 silencing reduced the SP cell frequency, and affected their invasive capacity and engraftment. These findings illustrate the interplay between epithelial ovarian CSCs and the EMT, and exert a link to explain tumor heterogeneity and its necessity for ovarian cancer maintenance, metastasis and progression.     

热疗联合奥沙利铂对SW480细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察奥沙利铂联合热疗对人结肠癌细胞SW480增殖及凋亡的影响,确定联合用药的效果,为临床方案提供参考。方法:采用MTT(四唑盐)法检测热疗、奥沙利铂及联合用药对细胞增殖的影响;瑞士吉姆萨染色法观察细胞形态;流式细胞仪检测细胞凋亡和周期;Western blot检测Bax、Bcl-2以及Caspase8蛋白表达量变化;q PCR检测Bax、Bcl-2以及Caspase8 m RNA的积累。结果:热疗联合奥沙利铂可以显著抑制细胞增殖,与对照组相比,热疗组、化疗组、联合组细胞凋亡率分别为16.2%、20.5%和36.1%,具有显著性差异(P0.01);细胞学形态中,热疗组细胞发生皱缩,化疗组细胞膜破裂;化疗将细胞阻滞在G2/M期,热疗和联合组将细胞阻滞S期;Western blot和qPCR显示Bax/Bcl-2比值上升,Caspase8表达量增加,联合组三种蛋白的表达量均与对照组具有显著性差异(P0.01)。结论:热疗联合奥沙利铂可以显著促进细胞凋亡,提高治疗效果,为结肠癌的治疗提供参考。     

Circulating miRNAs Related to Epithelial–Mesenchymal Transitions (EMT) as the New Molecular Markers in Endometriosis

Endometriosis is a chronic gynecological disease defined by the presence of endometrial-like tissue found outside the uterus, most commonly in the peritoneal cavity. Endometriosis lesions are heterogenous but usually contain endometrial stromal cells and epithelial glands, immune cell infiltrates and are vascularized and innervated by nerves. The complex etiopathogenesis and heterogenity of the clinical symptoms, as well as the lack of a specific non-invasive diagnostic biomarkers, underline the need for more advanced diagnostic tools. Unfortunately, the contribution of environmental, hormonal and immunological factors in the disease etiology is insufficient, and the contribution of genetic/epigenetic factors is still fragmentary. Therefore, there is a need for more focused study on the molecular mechanisms of endometriosis and non-invasive diagnostic monitoring systems. MicroRNAs (miRNAs) demonstrate high stability and tissue specificity and play a significant role in modulating a range of molecular pathways, and hence may be suitable diagnostic biomarkers for the origin and development of endometriosis. Of these, the most frequently studied are those related to endometriosis, including those involved in epithelial–mesenchymal transition (EMT), whose expression is altered in plasma or endometriotic lesion biopsies; however, the results are ambiguous. Specific miRNAs expressed in endometriosis may serve as diagnostics markers with prognostic value, and they have been proposed as molecular targets for treatment. The aim of this review is to present selected miRNAs associated with EMT known to have experimentally confirmed significance, and discuss their utility as biomarkers in endometriosis.