HSV-1感染对人星形胶质瘤细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

目的:研究单纯疱疹病毒1型(Herpes simplexvires,HSV-1)感染对人星形胶质瘤细胞U251增殖、凋亡和细胞周期的影响.方法:以感染复数(MOI)为5的HSV-1感染体外培养的U251细胞,在感染后24 h、48 h、72 h和96 h用倒置显微镜观察U251细胞的形态改变:用MTT法、流式细胞术观察HSV-1感染对U251细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响.结果:①U251细胞在感染24h后开始出现细胞融合,48 h后开始出现典型的细胞病变效应(Cytopathic effect,CPE),72h后超过80%的细胞出现CPE,.96h后细胞大部分死亡.②MTT法显示HSV-1感染U251细胞24 h、48 h、72 h及96 h的U251细胞OD值均低于对照组(P<0.05).③HSV-1感染U251细胞12h后凋亡率与对照组无显著差异(P0.05),感染24h和36h后凋亡率比相应对照组有显著差别(p<0.05).④HSV感染12h、24h和36h后均可引起U251细胞S期细胞增多和G0/G1期细胞减少,24 h后G2/M期细胞比例开始增加.结论:HSV.1能感染体外培养的U251细胞,抑制其增殖,促进其凋亡并影响其细胞周期.     

沉默ABCE1对神经胶质瘤细胞U251增殖、迁移和凋亡的影响

ABCE1是ATP结合盒蛋白亚家族成员之一,在病毒感染,细胞增殖,抗凋亡,翻译起始和核糖体生物发生等过程中有重要的作用。为了探讨ABCE1对神经胶质瘤细胞U251增殖、迁移和凋亡的作用,本研究通过实时荧光定量PCR和免疫印迹实验检测ABCE1在神经胶质瘤细胞和正常胶质细胞中的mRNA和蛋白质表达水平,结果发现ABCE1在神经胶质瘤细胞U251中的表达高于在正常胶质细胞中的表达。利用siRNA靶向沉默ABCE1后,神经胶质瘤细胞U251中ABCE1 mRNA和蛋白的表达水平均显著减少,细胞的凋亡率显著提高,细胞增殖和迁移明显受到抑制,而且细胞对化疗药物替莫唑胺的敏感性增强。此外,沉默ABCE1后,Bcl-2的mRNA和蛋白质表达水平显著下调,而Bax的mRNA和蛋白质表达水平显著上调。以上研究结果表明,ABCE1与神经胶质瘤细胞的增殖和迁移密切相关,通过siRNA靶向沉默ABCE1基因可显著降低U251细胞的增殖和迁移能力。     

紫草素对人脑胶质瘤U251 细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察紫草素对体外培养的人脑胶质瘤U251细胞的增殖和凋亡的影响。方法:应用MTT法和Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术分别检测2.5、5、10μM/L的紫草素对U251细胞的体外抑杀作用以及凋亡诱导作用,进一步应用Western blot方法检测紫草素对凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax表达水平的影响。结果:紫草素对人U251胶质瘤细胞具有明显的增殖抑制作用,且呈一定的剂量依赖性和时间依赖性。紫草素可明显上调U251细胞Bax的表达,下调Bcl-2的表达,与对照组相比存在显著性差异(P0.05)。结论:紫草素对人胶质瘤U251细胞具有明显的抑制增殖和促进凋亡作用。     

沉默ABCE1对神经胶质瘤细胞U251增殖、迁移和凋亡的影响北大核心CSCD

三磷酸腺苷结合盒蛋白E1(ABCE1)是ATP结合盒蛋白亚家族成员之一,在病毒感染、细胞增殖、抗凋亡、翻译起始和核糖体生物发生等过程中发挥重要作用。为了探讨ABCE1对神经胶质瘤细胞U251增殖、迁移和凋亡的作用,本研究通过实时荧光定量PCR和免疫印迹实验,检测ABCE1在神经胶质瘤细胞和正常胶质细胞中的mRNA和蛋白质表达水平。结果显示,ABCE1在神经胶质瘤细胞U251中的表达高于在正常胶质细胞中的表达。利用siRNA靶向沉默ABCE1后,在神经胶质瘤细胞U251中,ABCE1 mRNA和蛋白质的表达水平均显著减少,细胞的凋亡率显著提高,细胞增殖和迁移明显受到抑制,而且细胞对化疗药物替莫唑胺的敏感性增强。此外,沉默ABCE1后使Bcl-2的mRNA和蛋白质表达水平显著下调,而Bax的mRNA和蛋白质表达水平显著上调。以上结果表明,ABCE1与神经胶质瘤细胞的增殖和迁移密切相关,通过siRNA靶向沉默ABCE1基因,可显著降低U251细胞的增殖和迁移能力。     

单克隆抗体MGd1对胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究不同浓度的MGd1对体外培养胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的影响。方法：采用MTT法测定不同浓度MGd1对SGC-7901生长抑制作用;流式细胞术（FCM）进行细胞凋亡分析。激光共聚焦显微镜观察MGd1抗原（MGd1-Ag）的亚细胞定位。结果：MTT结果显示不同浓度的MGd1均对SGC-7901细胞产生明显的抑制效应（P=0.02）;流式细胞术分析发现MGd1可诱导SGC-7901发生凋亡并呈浓度和时间依赖性（P〈0.01）;共聚焦显微镜结果显示MGd1-Ag主要定位于细胞膜上。结论：以上结果证实胃癌特异性单抗MGd1可抑制SGC-7901的增殖并促进凋亡发生。它可能通过与细胞膜上抗原特异性结合,影响下游信号传导,从而发挥抑制效应。     

单克隆抗体MGd1 对胃癌SGC-7901 细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究不同浓度的MGd1对体外培养胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的影响。方法:采用MTT法测定不同浓度MGd1对SGC-7901生长抑制作用;流式细胞术(FCM)进行细胞凋亡分析。激光共聚焦显微镜观察MGd1抗原(MGd1-Ag)的亚细胞定位。结果:MTT结果显示不同浓度的MGd1均对SGC-7901细胞产生明显的抑制效应(P=0.02);流式细胞术分析发现MGd1可诱导SGC-7901发生凋亡并呈浓度和时间依赖性(P<0.01);共聚焦显微镜结果显示MGd1-Ag主要定位于细胞膜上。结论:以上结果证实胃癌特异性单抗MGd1可抑制SGC-7901的增殖并促进凋亡发生。它可能通过与细胞膜上抗原特异性结合,影响下游信号传导,从而发挥抑制效应。     

模拟微重力对恶性胶质瘤细胞U87 影响的实验研究

目的:探讨模拟微重力(Modeled microgravity,MMG)对恶性胶质瘤细胞U87形态、生长增殖、基质金属蛋白酶-2、-9(Matrix metalloproteinase 2,MMP-2、Matrix metalloproteinase 9,MMP-9)及神经胶质酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)表达的影响。方法:常规培养U87细胞,传代培养3代后分为两组,正常重力组(Normal gravity,NG组)及模拟微重力干预组(Modeled microgravity,MMG组),相应条件下培养24 h,48 h和72 h。倒置显微镜观察U87细胞形态改变,细胞计数法及四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT法)检测模拟微重力干预和干预后U87细胞生长增殖情况;Western Blot检测不同培养时间后胶质瘤细胞U87 MMP-2、MMP-9及GFAP蛋白的表达情况。结果:模拟微重力条件下培养72 h后,U87细胞轮廓不规则,边缘圆钝,触角变少;模拟微重力条件下,U87细胞生长速度明显减慢,并且经模拟微重力干预48 h和72 h后的胶质瘤细胞经传代再培养,其增殖率也明显低于正常重力组;同时,U87细胞MMP-2及MMP-9蛋白表达水平与模拟微重力处理时间呈时间依赖性下降,而GFAP蛋白表达水平则呈时间依赖性升高。结论:模拟微重力影响U87细胞的形态、生长及表型。     

BCG对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的从细胞增殖和凋亡两方面观察BCG对乳腺癌细胞MDA—MB-231的抑制作用。方法用MTT法检测BCG作用后MDA—MB-231细胞的增殖能力,采用TUNEL法检测凋亡。结果BCG能明显降低MDA-MB-231细胞的增殖代谢活性而抑制其增殖。TUNEL法染色显示BCG可显著增加凋亡细胞。结论BCG不仅能显著抑制MDA—MB-231细胞增殖,还能有效诱导其凋亡。     

氯化锂对KT-1/A3细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究氯化锂(LiCl)在体外对KT—1／A3白血病细胞增殖及凋亡的影响。方法：采用液体培养实验,MTT实验,集落培养实验为指标观察LiCl对KT—1／A3细胞增殖的影响,采用DNA片段凝胶电泳及流式细胞检测为指标检测细胞凋亡。结果：①不同浓度的LiCl(5mM—25mM)对KT—1／A3细胞具有抑制增殖的作用,这种增殖抑制作用呈剂量依赖关系。②在LiCl(20mM)作用72h的DNA凝胶电泳谱可见DNA Ladder及流式细胞仪检测可见凋亡特有的AP峰,提示LiCl可诱导KT—1／A3细胞凋亡。绪论：LiCl能抑制KT—1／A3白血病细胞增殖和诱导凋亡。     

槟榔碱对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察槟榔碱对人乳腺癌细胞（MCF-7）增殖和凋亡的影响,并探讨其机制。方法：采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测不同浓度（0、10、30、50、100、300、500μmol/L）槟榔碱对MCF-7细胞增殖的影响,Hoechst 33342染色和流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测Bax,Bcl-2和P53蛋白表达。结果：低浓度（0、10、30、50μmol/L）槟榔碱不影响细胞的增殖和凋亡;而高浓度（100、300、500 μmol/L）槟榔碱呈浓度依赖性抑制MCF-7细胞增殖、诱导MCF-7细胞凋亡、提高P53和Bax蛋白表达、降低Bcl-2蛋白表达。结论：高浓度槟榔碱抑制MCF-7细胞增殖、诱导凋亡,其机制可能与提高P53和Bax蛋白表达,降低Bcl-2蛋白表达有关。     

土贝母苷甲经miR-21/ PDCD4 途径诱导胶质瘤U251细胞凋亡

目的:研究土贝母苷甲(TBMS I)对胶质瘤U251细胞的抗肿瘤作用以及探究土贝母苷甲对miR-21及其靶基因PDCD4基因表达的影响。方法:U251细胞在体外进行培养,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度的土贝母苷甲对细胞增殖的影响;Hoechst33258染色观察细胞核形态的变化;实时荧光定量PCR检测miR-21和PDCD4基因的表达情况;Western blot检测PDCD4蛋白的表达情况。结果:土贝母苷甲能够显著抑制U251细胞的增殖,其抑制作用呈剂量和时间依赖性。Hoechst33258染色观察到土贝母苷甲处理组细胞的细胞核形态表现出典型的凋亡特征。PCR结果显示:随着土贝母苷甲浓度增加,miR-21的表达逐渐降低(P0.05),PDCD4基因表达显著增加(P0.05)。Western blot结果提示:与阴性对照组相比,15、30μg/mL土贝母苷甲显著上调了PDCD4蛋白的表达(P0.05)。结论:土贝母苷甲能够显著抑制人胶质瘤U251细胞的增殖并诱导细胞发生凋亡,其机制可能与下调miR-21的表达和上调PDCD4的表达有关。     

UMSCs对U87MG细胞增殖的影响

目的：通过对研究脐带间充质干细胞（Umbilical cord mesenchymalstellcells,UCMSCs）与人恶性胶质母细胞瘤细胞U87MG细胞（U87 Malignant glioma cells）体外共培养,模拟肿瘤生长的内环境,以及其对U87MG细胞增值作用的影响及肿瘤细胞与间充质干细胞的共培养方法。方法：提取人脐带间充质干细胞进行体外培养、扩增,用MTT法测定uMSCS上清液对U87MG的影响,用瑞士染色法检测U87MG形态学变化。结果：MTT比色法结果显示UMSCS对U87MG有抑制作用。96小时培养后1：8、1：4、1：2及未稀释的UMSCs上清液对u87MG的抑制率分别为17％,24％,37．2％及46．4％,u87MG细胞形态亦随着培养时间的延长由多角形变为梭形,突起消失,细胞间骨架结构断裂。结论：通过对共培养前后U87MG与UMSCs共培养后形态学变化、生长曲线变化及对生长周期的影响作用的观察分析,得出UMSCs及其上清液对U87MG有抑制作用,而且呈时间及浓度依赖性。     

miR-1290对人脐带间充质干细胞增殖、周期和凋亡的调控作用研究

目的:探索microRNA-1290对人脐带间充质干细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法:以从胎儿脐带分离的间充质干细胞为基础细胞,构建miR-1290模拟物,进行瞬时转染,通过荧光定量PCR检测转染后miR-1290水平;运用MTT方法观察转染miR-1290后间充质干细胞的增殖情况;通过流式细胞仪染色观察转染后细胞周期和细胞凋亡的变化。结果:荧光定量PCR结果显示,转染后miR-1290表达水平显著升高12.2倍;MTT结果表明,高表达miR-1290相比于阴性对照组(NC组)可以促进间充质干细胞的增殖;流式细胞周期检测结果发现,转染miR-1290后,细胞周期G1期从(85.90±1.91)%缩短至(76.35±2.03)%,而S期和G2期与对照组相比均明显增加,增殖指数(22.75±3.01)相比于对照组(14.10±1.87)也显著升高(P0.05);凋亡检测结果显示,高表达miR-1290细胞凋亡率(4.9±0.276)%与阴性对照组(8.2±0.891)%相比下降,有统计学意义(P0.05)。结论:miR-1290可以提高MSC的增殖能力,延长S期和G2期,并一定程度上抑制MSC的凋亡。     

Bub1基因对人肝癌MHCC97-H细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的:研究Bub1基因在肝癌中的表达以及对肝癌细胞系MHCC97-H增殖、周期和凋亡的影响。方法:利用RNA干扰技术下调肝癌细胞系MHCC97-H中Bub1的表达;qRT-PCR和Western Blot分别检测Bub1在mRNA和蛋白水平表达的变化;CCK-8实验检测肿瘤细胞增殖能力的改变;流式细胞术检测细胞周期和凋亡的变化。结果:qRT-PCR和Western Blot结果显示si-Bub1能够成功下调Bub1的表达;下调Bub1后肝癌MHCC97-H细胞的增殖能力下降(P0.05),细胞的凋亡比例升高(P0.05),细胞发生S期阻滞。结论:Bub1基因在肝癌中高表达,下调Bub1的表达后能够降低肝癌细胞的增殖能力,促进细胞凋亡,诱导细胞发生S期阻滞。     

HCMV感染对恶性胶质瘤U87细胞增殖及ATF5表达的影响

人巨细胞病毒(HCMV)能够诱导肿瘤细胞的恶性转化,但其分子机制尚有待进一步探索。探讨HCMV是否通过调控转录激活因子5(ATF5)的表达变化促进胶质瘤细胞的增殖。采用HCMV AD169株(MOI=5)感染神经胶质瘤U87细胞株,MTT方法观察HCMV感染0、12、24、48 h后细胞的增殖活性。Real-time PCR及Western-blot检测HCMV感染U87细胞后ATF5基因及蛋白的表达水平变化。以慢病毒为载体的靶向ATF5小干扰RNA构建载体,敲低ATF5表达水平后感染HCMV,MTT检测病毒感染细胞的增殖活性变化。HCMV感染神经胶质瘤U87细胞后,与未感染组比较,增值活性明显升高(P0.05),ATF5表达水平上升,表明HCMV感染使胶质瘤细胞增殖活性提高,细胞抗凋亡能力增强。成功构建沉默ATF5细胞系siATF5 U87,HCMV感染siATF5 U87细胞后使细胞增殖活性减弱,抗凋亡能力下降。以上实验结果表明,HCMV感染上调胶质瘤U87细胞ATF5的表达水平,促进细胞的增殖。因此HCMV感染可能通过调控ATF5信号通路增加细胞恶性性状,为治疗胶质瘤提供一个新的思路。     

瘦素对卵巢癌细胞 SKOV3 增殖及凋亡的影响

目的:探讨瘦素对人卵巢癌SKOV3细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制。方法:用不同浓度的瘦素(0、50、100、200 ng/m L)处理人卵巢癌SKOV3细胞48 h后,采用MTT法检细胞的生长;以血清饥饿诱导细胞凋亡,同时给予瘦素刺激,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡的变化;western blotting分析p21、cyclin D1、Bcl-2、Bax蛋白的表达水平和ERK1/2通路的活化情况。结果:瘦素以剂量依赖性的方式促进人卵巢癌SKOV3细胞的增殖,同时抑制血清饥饿诱导的细胞凋亡。瘦素处理可下调p21和上调cyclin D1的表达,抑制促凋亡分子Bax的表达和上调抗凋亡分子Bcl-2的表达。瘦素可诱导细胞中ERK1/2通路的活化,其抑制剂PD98059可明显抑制瘦素诱导的促细胞增殖和抗凋亡作用,同时伴随有cyclin D1、Bcl-2蛋白表达的下调和Bax的上调。结论:瘦素可能通过活化ERK1/2通路调节细胞有丝分裂进程,进而促进卵巢癌细胞的增殖;同时通过调节凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达抑制卵巢癌细胞的凋亡。     

海星皂甙1对人胶质瘤U87细胞抗增殖作用的研究

目的:海星皂甙是一类从海星中分离、萃取出来的甾体苷类,被认为是海星体内毒素的主要成分.研究表明海星皂甙及其化学衍生物具有多种药理学活性,包括抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抑制真菌活性等.本实验旨在研究海星皂甙1对人胶质瘤U87细胞的抗增殖作用和可能的机制.方法:不同浓度海星皂甙l处理人胶质瘤U87细胞后,采用MTT法检测细胞活力,TUNEL染色观察细胞凋亡情况,Westernblot检测内质网应激相关凋亡分子的活性.结果:①海星皂甙1显著抑制U87细胞的增殖,呈时间与剂量依赖性.②海星皂甙1诱导U87细胞发生凋亡.③海星皂甙1处理后U87细胞内质网相关凋亡分子活性明显增高.结论:海星皂甙1通过诱导细胞凋亡抑制人胶质瘤U87细胞的增殖,这种抗增殖作用可能是通过激活内质网应激相关凋亡分子实现的.     

Varp蛋白影响人宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的研究

目的：探讨Varp蛋白对人宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的影响。方法：构建稳定表达Varp蛋白的Hela细胞株,通过氚标胸腺嘧啶核苷酸（3H—TdR）掺入法及碘化丙啶（PI）染色流式细胞术检测Varp蛋白对Hela细胞增殖、凋亡等方面的影响。结果：稳定表达Varp蛋白的Hela细胞相对于对照细胞,其增殖明显下降,而凋亡明显增加。结论：Varp蛋白在Hela细胞中稳定过表达能够增加细胞凋亡,抑制细胞增殖。