黄嘌呤氧化酶产生菌的离子注入诱变及其二步发酵的研究

采用剂量 1.0× 10 1 2 ～ 1.0× 10 1 6ions cm2 的N+注入产黄嘌呤氧化酶的球形节杆菌ATCC80 10 ,研究其诱变效果。结果表明 :细菌的存活曲线呈现特殊的“马鞍形” ,菌落形态和颜色发生了变化 ,且变化与产酶量有关 ,经过筛选获得了遗传性能稳定的高酶活突变株 ,使酶活较出发菌提高了 43.0 %。改进发酵工艺 ,采用二步发酵其酶得率是一步发酵的 4.75倍。     

节杆菌K1108乙内酰脲酶产酶条件研究

研究了乙内酰脲酶产生菌节杆菌K1108的产酶条件。该菌乙内酰脲酶为诱导酶,存在于细胞内,乙内酰脲水解酶和N氨甲酰氨基酸水解酶是同时被诱导产生。最适诱导物为5苄基乙内酰脲,而5吲哚甲基乙内酰脲和5苯基乙内酰脲等不能诱导其酶的产生。筛选到一种安慰诱导物,诱导活性提高了2倍多。对产酶培养基进行了筛选和优化,在最适条件下,K1108产酶能力可达108U/mL。     

弗氏葡糖杆菌产核糖醇脱氢酶研究

目的:研究弗氏葡糖杆菌产核糖醇脱氢酶的培养条件.方法:采用单因素实验研究了葡萄糖、氮源、金属离子Zn2+和Fe3+以及诱导物核糖醇对弗氏葡糖杆菌产酶的影响,并用优化的条件培养产酶进行核糖醇生物转化反应.结果:对于弗氏葡糖杆菌核糖醇脱氢酶的生产,当葡萄糖浓度2.5％、氮源玉米浆粉为1.0％、Zn2+浓度为4 μmol/L、Fe3+浓度为2 μmol/L时,对应的核糖醇脱氢酶活力分别为0.45U/mg、0.43U/mg、0.25U/mg和0.18 U/mg,生物转化验证实验表明反应30 h后核糖醇的转化率达97.73％,质谱分析表明产品符合L-核酮糖的结构.结论:实验获得的优化条件可进一步用于指导生产.     

短小芽胞杆菌产碱性木聚糖酶发酵条件的研究

碱性木聚糖酶在碱性条件下催化水解木聚糖,广泛应用于造纸、纺织等领域.着重对短小芽胞杆菌M-11产碱性木聚糖酶的发酵条件进行初步的探索.研究了菌株的生长曲线、确定最佳接种龄为16 h、最佳接种量为1％;确定最适碳源浓度为7％、最适单一氮源为氯化铵、其浓度为1.0％、最适无机盐为氯化铁、其浓度为3 mmol/L;在此基础之上进行6因素3水平的正交试验,确定最适产酶培养基组成:麸皮5％,接种量3％,氯化铵1.2％,氯化铁3.5 mmol/L,硫酸镁0.03％,氯化钠5 mmol/L,磷酸氢二钾0.4％;最适培养条件:接种龄16 h,初始pH 8.0,温度37℃,300 mL摇瓶装液量50 mL,摇床转速220 r/min,发酵周期48 h.通过对发酵条件的优化使发酵液酶活达613 IU/mL.无机氮源为其最适氮源,因此短小芽胞杆菌M-11在碱性木聚糖酶的产品开发上优于短小芽胞杆菌M -26.     

黄杆菌肝素酶Ⅱ重组菌培养条件的优化及高密度发酵

黄杆菌肝素酶Ⅱ(HepⅡ)是一类可特异性切割肝素、硫酸乙酰肝素类分子内连接键的酶。文中对黄杆菌肝素酶Ⅱ重组菌的诱导时机、诱导剂添加量、诱导温度、诱导时间等诱导产酶条件进行优化。经过优化最佳摇瓶发酵产酶条件为:37℃培养重组菌至对数生长前期,添加诱导剂IPTG至终浓度为0.3 g/L,20℃下诱导10 h,酶活达到最高,为570 U/L。在此基础上通过发酵罐高密度培养手段将菌体浓度OD600进一步提高到98,酶活大幅度提高到9 436 U/L,该研究结果为HepⅡ的工业化生产与应用奠定了良好的基础。     

产肌氨酸氧化酶菌株的分离及发酵条件研究

在本研究工作中分别从42℃的恒化富集培养物和30℃的分批富集培养物中分离到4株产肌氨酸氧化酶（SOX）的节杆菌。对所产SOX的特性分析表明,从42℃恒化培养物中分离得到的菌株42-1所产的酶比分批培养法分离得到菌株的酶具有高的热稳定性和低的Km值。对菌株42-1产酶发酵条件的研究表明,SOX可以被诱导物如肌氨酸、肌酸、肌酐和氯化胆碱诱导产生。在发酵过程中适当减少通气量对SOX的产生有显著的促进作用。葡萄糖等容易利用的碳源的存在对SOX的合成不产生降解代谢产物抑制作用,而尿素的存在则对SOX的生成有强的抑制作用。因而菌株42-1分解肌酸的主要作用是为细胞提供生长所需的氮源。     

假单胞菌产生铁氧化酶条件的研究

以氧化铁锰假单胞菌FEl3-26为实验菌株,对其铁氧化酶的产酶条件进行研究,结果表明柠檬酸铁铵和硝酸钠分别是该菌产酶的最佳碳氮源.最适产酶条件为温度28～30℃.起始pH值6.5～7.5,接种量2%,150 r/min振荡培养72 h.酶的定位研究结果显示该菌产生的铁氧化酶是一种胞外酶.     

一株产琼胶酶细菌的鉴定和发酵条件优化

从烟台地区的海藻样品中,本课题组分离到一株产琼胶酶细菌菌株YTB2-3。通过生理生化特征和16 S r RNA分析,鉴定YTB2-3为Cellulophaga fucicola。为提高YTB2-3产酶潜力,本研究阐述了培养基成分和培养条件对琼胶酶活力的影响。结果表明琼脂粉既可以作为YTB2-3产琼胶酶的碳源,又可以作为诱导因子,而麦芽糖和可溶性淀粉则对产酶具有抑制作用。单因素研究结果显示C.fucicola菌株YTB2-3产琼胶酶的最适培养基组成(g:m L)为:乳糖0.01%、牛肉膏0.70%、海盐2.0%、琼脂0.05%。最佳产酶条件:250 m L三角瓶装90 m L培养基,初始p H为6、发酵温度为16℃,发酵时间为24 h。上述培养条件下,发酵液的酶活力达到3.88 U/m L。本研究结果有助于YTB2-3琼胶酶的进一步研究开发。     

三种中药提取物对黄嘌呤氧化酶的抑制作用

分别用水、60%乙醇和95%乙醇为提取溶剂,对泽泻、青风藤和白芷进行提取,通过测定黄嘌呤氧化酶(XOD)-黄嘌呤反应体系终产物尿酸的吸光度,得出各提取物对XOD的抑制率,并判断其抑制机制。实验结果显示,在一定浓度范围内,泽泻和青风藤两种醇提物对XOD的抑制率较高,泽泻60%乙醇提取物抑制率最高达86%,青风藤95%乙醇提取物抑制率最高为71.2%,白芷水提取物对XOD抑制率较高,最高为72.7%。结果表明,三种中药的提取物均具有较强的体外抑制XOD活性的作用。     

一株产α-高温淀粉酶的地衣芽孢杆菌的分离和筛选

从西藏当雄温泉附近的土壤中用锥虫蓝平板,55℃培养,筛选到一株分泌高温淀粉酶的菌株,经生理生化初步鉴定后,克隆16s rDNA基因测序,提交GenBank比对后,鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheninformis),命名为B.licheninformis LT.通过对B.licheninformis LT的生长条件和产酶条件的研究表明:该菌高温特性良好,最高可以在65℃生长,产酶最适温度50℃;可以在pH 3.O～pH 11.0的LB培养基中生长,最佳产酶pH 10.0,LB培养基加入淀粉诱导,发酵液酶活可达80 U.对该菌所产α-高温淀粉酶的性质研究表明:酶的最适反应温度为95℃,100℃处理60 min发酵液酶活力没有明显下降,最适酶作用pH 10.0,添加1g/L的钙离子具有激活作用.