11种金花茶植物的RAPD分析及其系统学意义

利用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术分析了11种金花茶植物,即:龙州金花茶Camellia longzhouensis J.Y．Luo,弄岗金花茶C．longgangensis C.F.Liang et S．L. Mo,大样金花茶 C．grandis(C. F. Liang et S．L．Mo)H．T,Chang et S．Y.Liang,扶绥金花茶 C.fusuiensis S．Y. Liang et X．J.Dong,中东金花茶C．achrysantha H．T．Chang et S．Y．Liang,小花金花茶C. micrantha S．Y. Liang et Y．C．Zhong,薄叶金花茶C．chrysanthoides H．T．Chang,毛籽金花茶C．ptilosperma S．Y．Liang et Q．D．Chen,陇瑞金花茶C．longruiensis S．Y．Liang et X．J．Dong,凹脉金花茶C．impressinervis H．T．Chang et S．Y．Liang和夏石金花茶C．xiashiensis S. Y．Liang et C．Z. Deng。选用14个引物(10 bp)扩增出201个DNA片段,用于种间遗传相似性分析,构建系统发育树图。分析结果表明:(1)小花金花茶、扶绥金花茶与中东金花茶之间的关系较近;(2)大样金花茶、薄叶金花茶和夏石金花茶之间的关系较近;(3)龙州金花茶、毛籽金花茶、陇瑞金花茶和弄岗金花茶之间的关系较近;(4)凹脉金花茶与其他各种关系相对较远。     

金花茶遗传多样性的ISSR分析

采用ISSR分子标记对金花茶的4个自然分布居群的126份样品的遗传多样性水平进行了研究。用12条引物,共检测到105个清晰的扩增位点,其中多态性位点79个,多态位点百分率(PPB)为75．24％。采用POPGENE软件进行分析,结果表明：居群总的Nei’s基因多样性指数为0．2302,Shannon信息多态性指数为0．3502,金花茶总的遗传多样性水平较高。但金花茶居群内的遗传多样性相对较低。基因分化系数为0．5752,遗传变异主要存在于居群间。用NTSYS软件对样品进行UPGMA聚类分析,结果4个居群的样品各自聚在一起,而金花茶两间断分布区区内的居群又各自聚在一起。金花茶4个居群间的遗传距离与地理距离呈显著的正相关(r=0．68261,P=1．0000)。     

桃AFLP技术体系的优化及集群分离分析研究

在以桃为试材,优化AFLP技术体系及集群分离分析的研究中。研究得出：(1)高质量的基因组DNA、预扩增及选择性扩增模板的适宜浓度足影响分析结果的重要因素;(2)预扩增引物可选择E O／M O或E O／M 1组合。对扩增条带数的影响不显著;(3)选择性扩增引物组合E 2／M 3、E 3／M 3均适合桃基因组比较研究。但从揭示的多态性来说还是前者较高;(4)组建近等基因池的个体数将影响标记的筛选效率,试验叶中由6株个体组成的近等基因池较适宜多态性片段的筛选。     

黔西南州铁皮石斛资源特性及SRAP标记

采用相关序列扩增多态性(SARP)标记分析了黔西南州野生铁皮石斛和相关种类石斛23个样品的遗传多样性。结果表明34对SRAP引物组合扩增得到373条带,其中多态性位点363个,占97.32%,23份样品的遗传相似性系数在0.536 2至0.863 3之间,当遗传相似性系数为0.74时可将23份样品分为6大类,与叶片颜色、花朵细节特征表现基本相符,SRAP分类结果与植物学形态分类结果统一。本研究对黔西南州野生铁皮石斛资源特性挖掘和铁皮石斛品种纯度鉴定提供基础依据。     

基于ITS序列探讨山茶属金花茶组的系统发育关系

测定了分布于我国的 2 2个山茶属金花茶组的种或变种的nrDNAITS区序列 ,它们的序列长度在 476～ 496之间。GC含量都超过了 70 % ,应用Kimura2 模型计算了序列间的分化程度 ,构建了最大简约树、邻接树和最大似然树 ,分析结果表明 :( 1 )淡黄金花茶、毛籽金花茶、陇瑞金花茶、弄岗金花茶、大样金花茶和凹脉金花茶的关系较近 ;( 2 )小瓣金花茶、小花金花茶、薄叶金花茶、多瓣金花茶、夏石金花茶和龙州金花茶的关系较近。ITS区序列分析结果与AFLP分析结果相近     

喀斯特耐阴灌木淡黄金花茶的精细空间遗传结构与基因流

淡黄金花茶(Camelia flavida)是一种具有淡黄色花瓣的金花茶植物,为喀斯特典型的耐阴灌木。基于广西弄岗喀斯特季节性雨林15 hm2(300 m×500 m)监测样地,利用13对微卫星(SSR)标记,探讨喀斯特地貌对淡黄金花茶的精细空间遗传结构(SGS)、基因流和小尺度范围遗传分化的影响。结果表明:(1)淡黄金花茶在50 m距离内产生显著的SGS,在灌木类型和依赖种子传播的物种中具有中等程度的SGS强度(Sp=0.0248);(2)淡黄金花茶种子和花粉传播平均距离较短,分别为12.47 m和29.03 m,72.2%花粉和81.0%种子的传播距离均主要是在20 m内;(3)淡黄金花茶在小尺度范围(种群间距离1 km)的4个种群,甚至相距100 m的两个斑块产生了显著的遗传分化。喀斯特生境地貌对淡黄金花茶的基因流产生阻碍作用,从而导致淡黄金花茶在小尺度范围产生遗传分化。     

利用AFLP技术分析丹顶鹤的亲缘关系

建立了丹顶鹤(Grus japonensis)AFLP分析体系,经筛选,利用28对选择性扩增引物构建了5对丹顶鹤AFLP亲缘关系分析图谱,共得到1 114个扩增条带,其中多态性条带551条,多态性比例为49.5%。每个引物组合扩增的条带数为20～66条,其中,引物E4M1扩增的条带最多,为66条;引物E6M1扩增的条带数最少,为20条。经统计分析,计算了各样品间的相似性系数在0.71～0.88之间,得到5对丹顶鹤的遗传距离,并构建了UPGMA聚类图,结果1号与2号、3号与4号鹤的亲缘关系较近,其余3对鹤(自然配对)亲缘关系较远。表明丹顶鹤具有识别亲缘关系的行为机制,丰富了丹顶鹤繁殖行为机制的研究内容,并为深入研究建立合理的散养丹顶鹤繁育体系提出了建议。     

S-SAP分子标记开发及其在苹果芽变鉴别上的应用

S-SAP(特异序列扩增多态性,Ssequence specific amplification polymorphism)是一种基于反转录转座元件的广泛应用于生物遗传多样性研究的分子标记。本研究从34对引物中筛选出7对具有谱带清晰、多态性高的引物组合,成功地开发了苹果基因组的S-SAP分子标记。27个元帅系芽变品种中,共扩增出588条谱带,每对引物组合平均扩增出84条谱带,其中多态性谱带48条,多态性谱带占总扩增出谱带数的8.2%,遗传相似系数介于0.73～0.90之间。对15个苹果芽变品种进行S-SAP分析,相似系数在0.42～0.94之间,以相似系数0.80为阈值,可以区分各芽变品系。开发的S-SAP分子标记可以有效地将苹果芽变品种区分,并为苹果生物遗传多样性与系统进化、品种鉴定提供新方法。     

中国食用向日葵种质资源遗传变异的RAPD及AFLP分析

本研究采用RAPD和AFLP方法对23个中国不同地区的食用向日葵(Helianthus annuus L.)骨干品种进行了遗传变异分析,同时对两种标记系统进行了比较.26个RAPD引物产生了总计192条DNA条带,大小分布于0.26 kb～1.98 kb之间,其中165条(86.12%)具有多态性,每条引物产生DNA条带的平均数为7.38.8对AFLP引物组合共产生了576条带,分布于100 bp～500 bp之间,其中的341条具有多态性,多态百分率为76.00%,每对引物组合产生DNA条带的平均数为72.RAPD方法检测到的每位点有效等位基因数(1.76)大于AFLP(1.65),AFLP标记位点的平均多态性信息量(PIC)(0.38)低于RAPD标记位点的PIC(0.41),但AFLP标记具有很高的多态性检测效率(Ai=38.52).用RAPD标记分析23个食用向日葵材料的亲缘关系,Nei氏相似性系数分布在47.84%～82.06%,平均相似性系数为0.649 5, 而采用AFLP的Nei氏相似性系数分布在54.15%～83.52%,平均相似性系数为0.688 4.RAPD数据的标准差为0.13,而AFLP数据的标准差为0.08.因此,采用RAPD和AFLP方法分析食用向日葵遗传变异,RAPD标记具有较低相似性系数和较高方差而AFLP则相反.源于两种不同标记的遗传相似性矩阵的相关系数为0.51,说明采用RAPD和AFLP系统分析食用向日葵遗传变异得到的结果有一定的相关性.无论采用RAPD还是AFLP标记进行聚类分析,都将23个不同基因型的食用向日葵材料分成了三个类群.     

茄子耐盐种质资源遗传多样性的SRAP和ISSR分析

利用SRAP和ISSR分子标记,研究了14份耐盐茄子种质资源的遗传多样性,结果表明,2种标记均能揭示材料间较高的遗传多样性,其中ISSR标记多态性略高于SRAP标记。在SRAP分析中,每对引物组合可扩增出8-15条DNA片段,平均为12．12条：26对SRAP引物组合共扩增出315条DNA片段,其中263条具有多态性,多态性比率为83．49％;材料间遗传相似系数变化范围为0．212～0．923,平均值为0．755。在ISSR分析中,每个引物可获得5～16条DNA片段,平均为10．87条;15个ISSR引物共扩增出163条DNA片段,其中141条具有多态性,多态性比率为86．50％;材料间遗传相似系数变幅为0．333-0．957,平均值为0．736。聚类分析表明,2种标记都能将供试材料完全区分开来,聚类结果具有一定的相似性,但也存在明显差异。Mantel相关分析表明,SRAP分析与ISSR分析的相关性达到极显著性水平（r=0．904,P〈0．01）。     

7种金花茶组植物叶片营养成分分析

为选育金花茶优良品种，以7种金花茶组(Camellia sect. Chrysantha)植物成熟叶片为试材，对其总黄酮、茶多酚、总多糖、总皂苷、总氨基酸及维生素E等6种营养物质及K、Ca、Na、Fe、Mn、Zn、Se等7种矿质元素含量进行测定比较，通过聚类分析，考查不同金花茶组植物叶片间存在的药用价值差异。结果表明，7种金花茶组植物叶片的营养成分含量丰富且存在显著差异：凹脉金花茶(Camellia impressinervis)的茶多酚含量最高，达7.13%；东兴金花茶(C. tunghinensis)的总皂苷含量最高，达0.41 g·100 g^-1；柠檬金花茶(C. limonia)的总黄酮含量最高，达671.67 mg·100 g^-1。矿质元素方面各种类均呈现高钾低钠的特征，凹脉金花茶、柠檬金花茶和小果金花茶(C. nitidissima var. microcarpa)K含量高于Ca，且各品种中均检测出Se元素。综合结果表明，凹脉金花茶叶片中茶多酚、总多糖、总氨基酸等各类营养成分含量相对较高，具有潜在的研究与开发价值。     

三种金花茶提取物降脂作用实验研究

目的:探讨金花茶浓缩液、金花茶乙酸乙酯/二氯甲烷提取物以及金花茶水提物对高脂血症小鼠血脂的调节作用。方法:将小鼠按照体重随机分成正常饮食组和高脂饮食组,分别给予正常饲料和高脂饲料喂食,4周后将高脂饮食小鼠按照体重以及血脂水平(TC)随机分成金花茶浓缩液组、金花茶乙酸乙酯/二氯甲烷提取物组、金花茶水提物组以及辛伐他丁组。3种金花茶提取物以及辛伐他丁混悬液连续灌胃10周,同时给予高脂饮食。末次给药后禁食不禁水12 h,摘眼球取血,检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)以及丙二醛(MDA)。结果:与模型组相比,金花茶浓缩液和辛伐他丁能显著降低血清TC、TG、LDL-C水平(P0.01或P0.05),但是对HDL-C无明显调节作用;对血清中的AST、ALT、SOD以及MDA影响不大。金花茶乙酸乙酯/二氯甲烷提取物以及水体物对血清中的TC、TG、LDL-C、HDL-C、AST、ALT、SOD及MDA无明显的调节作用。结论:金花茶浓缩液对高脂血症小鼠的血脂具有良好的调节作用。     

基于叶绿体四个DNA 片段联合分析探讨山茶属长柄山茶组、金花茶组和超长柄茶组的系统位置与亲缘关系

为探讨山茶属茶亚属 (Camellia subgenThea) 中长柄山茶组 (sectLongipedicellata)、金花茶组 (sectChrysantha)和超长柄茶组 (sectLongissima) 的系统位置和亲缘关系,本研究选取了该属4个亚属11组28个种及2个外类群的材料,对这些材料的叶绿体4个DNA片段 (rpl16、psbA trnH、trnL F和rpl32 trnL) 进行了测序,运用邻接法 (neighbor joining)、最大简约法 (maximum parsimony) 和贝叶斯推断 (Bayesian inference) 对获得的序列进行了联合矩阵分析,并构建基因树。基因树的拓扑结构显示：1) 金花茶组包括3个平行的支系,并且长柄山茶组的模式种长柄山茶 (Camellia longipedicellata) 嵌于其中一个支系,因而金花茶组可能是一个并系或多系类群;2) 长柄山茶与越南分布的金花茶组种类在分子系统树上构成一个单系支,暗示了长柄山茶组和金花茶组之间可能具有紧密的亲缘关系;3) 超长柄茶组不是一个单系类群,该组的河口超长柄茶 (C. hekouensis) 位于系统树的基部,与山茶属其余种构成姐妹群。由于缺乏更广泛取样的分析,超长柄茶在山茶属中的系统位置仍然不明确,超长柄茶组与长柄山茶组的亲缘关系问题也没有得到解决。     

Phylogeny of Camellia sects Longipedicellata,Chrysantha and Longissima (Theaceae) Based on Sequence Data of Four Chloroplast DNA Loci

We focused on the systematic positions and relationships of three sections of Camellia subgenThea of Theaceae, i.e., sect.Longipedicellata, sect.Chrysantha (golden camellias) and sect.Longissima by using four chloroplast DNA regions (rpl16, psbA trnH, trnL F & rpl32 trnL). We sampled 28 species representing four subgenus, 11 sections in Camellia and two outgroups. Combined analyses of chloroplast DNA sequence data sets are performed with the neighbor joining, maximum parsimony and Bayesian inference methods, and the gene trees are constructed. The topologies of gene trees revealed that: 1) sect. Chrysantha is paraphyletic or polyphyletic, containing three parallel lineages and Camellia longipedicellata (type of sectLongipedicellata) nested inside; 2) all four species from Vietnam, together with C. longipedicellata, forming a well supported monophyletic clade, which implies the close relationship between sect. Longipedicellata and sect.Chrysantha; and 3) sectLongissima is not monophyletic because C.hekouensis is the sister to the rest of Camellia species. The systematic position of C.longissima and the relationship between sect.Longissima and sect.Longipedicellata are unsolved.     

Brachyptera Group. Sp.32. C. Brachyptera. Sp.33. C.c RUFA. Sp.34. C. Troglodytes. Sp.35. C. Fulvicapilla.

A part from considerations as to where it is best wedged into the linear sequence, the brachyptera group is defined in general terms as a compact group of four small or very small species which resemble one another in many important specific characters and the other thirty-six species classified here as Cisticola in so many ways of form, coloration and behaviour as to make them best understood by classifying them also under that generic name.