流感病毒RNA聚合酶的分离与纯化

流感病毒的RNA词是由3个亚基组成的复合物,这3个亚基统称为3P蛋白,分别由2个碱性亚基PBI、PBZ和1个酸性亚基PA组成。在病毒体内,3P与IUqA形成较紧密的3P－RNA复合物,该复合物又往往与NP形成核蛋白体（ribonu－cleoProteinRNP）。3P与RNA及3P－RNA与NP之间结合都比较紧密,三者之间不易被分离。本文用不同介质组合的分步密度梯度超速离心法成功地将3P与RNA及NP分离开来,获得了较纯的3P蛋白,为进一步研究流感病毒RNA铜的结构和功能奠定了基础。1材料与方法1．亚病零培养及病毒粒子分离4k．xH验所用病毒为甲型流感病…     

叶绿体小分子RNA的分离纯化和鉴定

本文采用低速匀浆、过筛的方法从植物叶中分离得到了完整、纯净的叶绿体。将叶绿体与提取缓冲液、苯酚混合匀浆抽提叶绿体 RNA。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳与文献已发表的已知酵母5S RNA、菠菜叶绿体4.5S RNA 及小麦5S RNA、4.5S RNA 的电泳迁移距离进行比较,发现芹菜叶绿体中小分子 RNA(沉降系数为5S 左右的 RNA)中除含有5S RNA 和4S RNA 外,还含有两种4.5S RNA。而水杉和银杏叶绿体小分子 RNA 中只含有5S RNA 和4S RNA。     

核酸分离纯化实验指南

总RNA提取常见问题分析Q:RNA降解A:1.新鲜细胞:如果试剂没有问题,且外源性污染也可以排除,那么降解几乎都来自裂解液的用量不足。如果将裂解液直接加入培养吼中裂解细胞,一定要使裂解液能覆盖住细胞。2.新鲜组织:某些富含内源核酸酶的样品(如肝脏,胸腺等),即使使用电     

实验动物胰岛细胞的分离纯化

胰岛移植作为治疗1型糖尿病的有效方法,临床应用前景较好。但是,由于在胰岛移植手术中,有功能的胰岛细胞数量较少,而严重影响其治疗效果。因此,如何提高胰岛分离纯化效果,获取尽可能多的高质量的胰岛,成为胰岛移植手术成败的关键。本文仅就在采用实验动物分离和纯化胰岛方面的实验经验作以简要介绍。     

基于计算机模拟的蛋白质分离纯化实验

利用数学建模的方法首次提出了衡量分离纯化效果优劣的定量指标——纯化效益;建立了便于应用推广的聚乙二醇(polyethyleneglycol,PEG)和硫酸铵沉淀分离纯化模型,并以海芋过氧化物酶分离纯化为例,对模型进行求解、应用和检验,求解最优实验试剂用量.     

兔出血症病毒信使RNA的分离纯化及其生物活性的鉴定

用液相免疫沉法从感染兔出血症病毒（Ｒａｂｂｉｔ Ｈａｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｖｉｒｕｓ,ＲＨＤＶ）８小时后的兔肝组织的多聚核糖体中,分离出ＲＨＤＶ特异性的多聚核糖体,并由此获得全核酸,经Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）－ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ亲和层板,得到３．４Ａ２６０的ＲＨＤＶｐｏｌｙ（Ａ）＾＋ＲＮＡ占全核酸的３．５％。此Ｐｏｌｙ（Ａ）＾＋ＲＮＡ经甲醛变性琼脂糖电泳,得到６条单一的带,其大小分别为０     

硝化细菌的分离纯化

硝化细菌是一类化能自养细菌,包括亚硝化细菌和硝化细菌两群。硝化细菌的分离纯化颇为困难。其原因主要有:1)硝化细菌生长缓慢,而伴生菌生长迅速,因此常在数量上后者会超过前者;2)硝化细菌有长在固体表面的习     

大肠杆菌RNA聚合酶σ亚基基因的表达及表达产物的分离纯化

将2种表达质拉pEGMD（含rpoD基因）和pETF（含rpoS基因）转化到BL21（DE3）菌株中,培养菌体。破碎细胞,用盐酸抓溶解包含体,经DEAE－纤维素柱层析,SDS－PAGE检测可得纯化σ的蛋白。通过紫外分光光度法测定蛋白浓度,实验表明σ38蛋白的得率为菌体温重的0．27％,σ70蛋白的得率为菌体湿重的0．06％。     

噬菌体T4诱导的核糖核酸(RNA)连接酶的分离和纯化

本文介绍了一种可以同时提取多核苷酸激酶(利用硫酸链霉素沉淀部分)DNA连接酶(DE一52柱层析峰I)和RNA连接酶(DE-52柱层析峰III)的方法。RNA连接酶的分离纯化步骤,除粗酶提取与DEAE纤维素柱层析两步与DNA连接酶的分离纯化方法一样外,以后只要再经过羟基磷灰石柱层析,葡聚糖凝胶(sc曲adex-G 100)过滤,和单链DNA琼酯糖凝胶亲和层析三步就可以达到纯化的目的。最终酶浓度达到每毫升24,800交换单位,即500个标准连接单位。用’H标记的聚腺苷酸作底物测不出Rnase杂酶活力,而且成功地应用于核糖十二核苷酸和十六核苷酸的定向合成。此外还做了一些初步的连接试验,表明RNA连接酶对受体寡核苷酸中戊糖是核糖还是脱氧核糖有较明显的专一性,对受体寡核苷酸的组成和顺序有一定的选择性。5'-脱氧胸腺嘧啶寡核苷酸d(pT)。也是个相当好的供体。     

细菌RNA分离试剂盒

Bioscience Technology 2003年7月31页报道：美国Amersham Biosciences公司最近推出GenomiPhi^TM DNA扩增试剂盒。利用这种试剂盒可从有限的生物材料制备高质量的DNA。这是一种简单的等温扩增技术,它不需要使用热循环器。原材料可以是来自全血、颊面拭子、细胞印迹纸、     

碱性磷酸酶分离纯化和比活性测定实验的优化

实验采用低温预处理兔肝和有机溶剂,实验前做好肝匀浆的方法,分级提取兔肝碱性磷酸酶。经过对酶提取过程中实验条件的优化,实验结果明显改善,同时也提高了学生的实验技能和实验教学效果。     

Fluka的RNA分离盒

作为Sigma-Aldrich Co Ltd一部分的Fluka Chemicals研制出一种新的RNA分离盒,其Micro Selelct区具有快速、一步提取RNA的功能。这种盒使用guanidiam硫氰酸盐-酚-氯仿提取法,能获得纯RNA,不含DNA且污染蛋白含量低于用guanidium-CsC1法制备的样品。因为没有离心步骤,所以能同时加工大量样品。Fluka介绍说,这种盒可应用于小规模和大规模制备RNA,从各种培养细胞系     

斑马鱼总RNA提取和纯化

采取异硫氰酸胍法从斑马鱼的3个样品中提取和纯化RNA,结果表明,RNAA260分别为0、587、0．719、0．151.A260/A280比值分别为1．89、1．92、1．82。电泳条带也清晰可见,可以用于进一步的分子生物学研究。     

木聚糖酶分离纯化技术

木聚糖酶应用广泛,其分离纯化是进行酶学性质研究、分子研究的前提条件,是成功确定氨基酸序列和三维结构的基础。综述微生物木聚糖酶分离纯化的方法,分析了常用方法在其分离纯化中的优缺点;强调了特异性分离纯化技术是高效的分离纯化方法;并对其它方法进行了概括。     

疫苗分离纯化研究进展

综述了国内外关于疫苗分离纯化的研究进展,系统介绍了目前可用作各类疫苗(尤其是基因工程疫苗)分离纯化的方法。沉淀和离心等传统分离技术在各类疫苗的分离纯化中应用广泛,层析技术和其它分离技术的结合已成为疫苗分离纯化的主流,新型膜技术和亲和层析在基因工程亚单位疫苗分离纯化中的作用引人注目。     

棉花凝集素的分离纯化

IsolationandPurificationofCottonLectinLIUShi－Zhuang,SHICheng－Liang,WANGTong－Yu（DepartmentofBiology,ShanghaiTeacher'sUniversity,Shanghai200234）凝集素是一类广泛分布在动物、植物和微生物体内的蛋白质或糖蛋白。植物凝集素在防御植物病害方面的作用已引起人们重视。我们［‘增报道棉花种子中凝集素含量与棉花抗枯萎病能力呈正相关。本文又在以前工作的基础上,于1984～1994年继续对棉花凝集素进行分离纯化,并检测了棉花凝集素对棉花枯萎病菌的直接影响。材料与方法棉花（o删四响m———）抗枯萎病品种861,由…     

抗生素的分离和纯化

抗生素的提炼一般是指将在发酵液中积累的抗生素经过分离、浓集、纯化,获得符合使用要求制品的全过程。是一门利用各种化工单元操作有机组合进行生物技术产品后处理的技术。由于抗生素的生源、性质各异,在发酵液中存在形式、杂质的干扰情况不一,以及制品的使用要求不同,所以抗生素的提炼过程不可能有一     

金丝小枣多糖ZP3c的分离纯化及其组成分析

经DEAE-SepharoseCL-6B、SepharoseCL-6B和Sephadex G-200柱层析,得到一个均一的金丝小枣多糖组分(ZP3c).ZP3c的中性单糖是由鼠李糖、阿拉伯糖和半乳糖组成,其摩尔比为1:2.13:19.3.经红外光谱测定,ZP3c的酯化度为41.85%.     

DNA连接酶、RNA连接酶、多核苷酸激酶和DNA聚合酶的同时分离纯化

本文报道从T4amN82噬菌体诱导的大肠杆菌E.coliB 同时分离和纯化四种酶的一般方法。先用硫酸链霉素沉淀把RNA连接酶,DNA连接酶与多核苷酸激酶和DNA聚合酶加以分离。然后用DEAE纤维素柱层析把DNA连接酶与RNA连接酶加以分离,用DEAE-Sephadex-A50柱层析把多核苷酸激酶与DNA聚合酶加以分离。本文着重介绍T4DNA聚合酶的分离纯化。