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相似文献
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1.
将抗病毒的CMV-cp 基因和抗虫的Bt-toxin 基因依次插入到植物表达载体pE3 的HindⅢ和KpnⅠ位点,通过菌落原位杂交筛选和酶切鉴定,然后以土壤农杆菌GV311-SE介导转化番茄,胭脂碱检测,染色体DNA 的点杂交及PCR扩增证明CMV-cp 基因和Bt-toxin 基因已同时导入转化再生的番茄植株。RNA 点杂交证明CMV-cp 基因和Bt-toxin 基因已在转基因番茄植株中同时获得表达。  相似文献   

2.
抗芜菁花叶病毒转基因甘蓝型油菜的研究   总被引:31,自引:0,他引:31  
以子叶柄为材料,建立了甘蓝型油菜(BrassicanapusL.)双低品种的再生体系。通过子叶柄与农杆菌(AgrobacteriumtumefaciensLBA4404)共培养,将表达载体pBTu中芜菁花叶病毒外壳蛋白(TuMV-CP)基因以整合方式导入甘蓝型油菜,然后用卡那霉素进行筛选,获得了油菜再生植株。经PCR特异性扩增、点杂交和Southern印迹分析,证明再生植株基因组DNA中整合了TuMV-CP基因。攻毒实验表明,有TuMV-CP基因插入的工程油菜对TuMV均有不同程度的抗性。  相似文献   

3.
hBMP—2cDNA在COS细胞和小鼠肌肉中的表达   总被引:4,自引:1,他引:3  
研究了骨形态发生蛋白BMP-2cDNA在COS细胞和小鼠肌肉中的表达的情况,从pSPS65BMP-2质粒中回收BMP-2cDNA,删除5端的非翻译序列,插入pSVL载体中,构建了含有BMP-2全长编码序列的重组表达质粒pSVLBMP-2将表达质粒导入COS-7细胞中,细胞RNA点杂交结果表明,转染BMP-2基因的细胞内BMP-2的mRNA水平明显升高,细胞培养上清的ELISA显示,转染BMP-2c  相似文献   

4.
叶萍  李燕 《病毒学报》1998,14(3):215-220
将Epstein-Barr病毒(EBV)膜抗原(MA)BLLF1基因,插入含有CMV启动子的真核表达载体pcDNA3下游BamHI位点,构建成真核表达质粒pcDNA3-MA。将纯化的DNA注射Balb/c小鼠股四头肌。经免疫的动物产生抗EB病毒MA特异性的抗体和中和抗体,依赖抗体细胞介导的细胞毒作用(ADCC),特异性T淋巴细胞增生性反应及细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤作用。基因免疫与基因-蛋白  相似文献   

5.
苏云金芽孢杆菌毒蛋白基因在小麦基因组中的甲基化修饰   总被引:7,自引:1,他引:7  
郭亮  文玉香 《遗传学报》1997,24(3):255-262
通过花粉管通道法将苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)毒蛋白基因(Bt.toxingene)转进了小麦品种京花5号与86Al。利用点杂交、Southern杂交和PCR等技术鉴定了转化植株的当代和子代,证实了Bttoxingene的导入与对小麦染色体的整合。利用对腺嘌呤(A)与胞嘧啶(C)甲基化敏感与否的限制性内切酶组(medhylation-(un)sensitiverestrictionenzymegroup,MREG)酶切和RCR扩增(MREG-PCR),对转化子代中的Bt基因片段甲基化形式进行了研究。结果表明,整合在小麦基因组中的Bt基因的A和C的甲基化形式发生了变化  相似文献   

6.
Epstein-Barr病毒膜抗原基因免疫的研究   总被引:4,自引:0,他引:4  
叶萍  李燕  谷淑燕 《病毒学报》1998,14(3):215-220
将Epstein-Bar病毒(EBV)膜抗原(MA)BLLF1基因,插入含有CMV启动子的真核表达载体pcDNA3下游BamHI位点,构建成真核表达质粒pcDNA3-MA。将纯化的DNA注射Balb/c小鼠股四头肌。经免疫的动物产生抗EB病毒MA特异性的抗体和中和抗体,依赖抗体细胞介导的细胞毒作用(ADCC),特异性T淋巴细胞增生性反应及细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤作用。基因免疫与基因-蛋白联合免疫效果相似。不同启动子控制下的MA基因,诱发小鼠免疫应答无明显差异。  相似文献   

7.
研究了骨形态发生蛋白BMP-2cDNA在COS细胞和小鼠肌肉中的表达的情况,从pSPS65BMP-2质粒中回收BMP-2cDNA,删除5'端的非翻译序列,插入pSVL载体中,构建了含有BMP-2全长编码序列的重组表达质粒pSVLBMP-2。将表达质粒导入COS-7细胞中,细胞RNA点杂交结果表明,转染BMP-2基因的细胞内BMP-2的mRNA水平明显升高;细胞培养上清的ELISA显示,转染BMP-2cDNA后,细胞分泌产生的BMP-2显著增加。小鼠实验发现,在肌肉内用注射法导入BMP-2重组质粒后,局部组织内BMP-2的mRNA转录水平也明显提高。  相似文献   

8.
根据已报道的番茄花叶病毒L株系(ToMVL)序列人工合成引物,经RTPCR扩增并克隆了我国番茄花叶病毒分离物(ToMVS1)的外壳蛋白CP基因及3′端非编码区。序列测定结果表明,所得cDNA共长682个核苷酸,其中CP基因含480个核苷酸,编码158个氨基酸,3′端非编码区含202个核苷酸,其核苷酸序列与ToMVL株系具有99.5%的同源率。将该基因片段克隆到pGEMEX1载体中,转入E.coli后诱导表达,经Westernblot检测证明,该基因已在大肠杆菌中正确表达。这是我国首次报道ToMVCP基因序列。  相似文献   

9.
转BmK IT4基因烟草的抗虫性   总被引:3,自引:0,他引:3  
用酶切方法从「pBS-BmK IT4质粒中获得BmK IT4基因片段,并构建CaMV 35S启动子下的BmK IT4基因表达质粒pE3-BmK IT4,以根癌土壤杆菌(Agrobacterium trmefaciens(Smith et Townsend)Conn)介导的叶盘法转化云烟(Nico-tiana tabacum L.)K326叶片,获得45株抗卡那霉素的再生植株。用这些再生植株进行抗虫  相似文献   

10.
应用基因工程技术,将EGF,GM-CSF基因克隆到pGEM-3Zf载体的EcoRI,BamHI位点上,再钭重组融合基因亚克隆到表达载体pBV220扔EcoRI,BamHI位点上,在大肠杆菌DH5α中进行表达,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot表明EG-FGM-CSF融全蛋白获得表达,并且具有EGF,GM-CSF免疫学活活。  相似文献   

11.
对pGEX系列表达载体的多克隆位点(MCS)进行了改造,改造前MCS上仅有BamHI、SmaI和EcoRI三个酶切位点。改造后的MCS上含有8个酶切位点,它们分别是BamHI、SacI、AvaI、XhoI、BglⅡ、pstⅠ、KpnI和EcoRI,改造后构建形成的pGEX-L系列载体对目的基因的插入有更强的适应性。  相似文献   

12.
郑一敏  皮国华 《病毒学报》1995,11(2):107-113
将切去3'端穿膜序列的EB病毒膜抗原(MA)基因,插入pSV2-dhfr质粒的SV40早期启动子下游,构建了真核表达载体pSV2-dhfrGPTR,使两个SV40早期启动子分别调控MA和二氢叶酸还原酶(dhfr)基因。将该重组质粒转化CHO-dhfr细胞。在选择培养基中筛选阳性克隆,用氨甲喋呤加压扩增,建立了表达EBV-MA的克隆细胞系。Western bolt分析证明,所表达的蛋白的分子量大约为  相似文献   

13.
用电脉冲方法将含有苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因cry1C的重组质粒pBMBLC转入野生菌株YBT833,获得含不同杀虫晶体蛋白基因的4个转化子。质粒检测和Southern杂交证明它们均为菌株YBT833含重组质粒pBMBLC的转化子。PCR扩增表明,转化子YBT833-1保留了原有的杀虫晶体蛋白基因;转化子YBT833-2丢失了基因cry1Ab;转化子YBT833-3则丢失了所有的杀虫晶体蛋白基  相似文献   

14.
大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pBCG-2100的构建及应用   总被引:3,自引:0,他引:3  
利用分子生物学方法,构建了大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pBCG-2100,研究了编码日本血吸虫中国大陆株谷胱甘肽S-转移酶抗原基因在卡介苗中的表达,以含人结核杆菌热休克蛋白70基因全长序列的质粒pMT-70为模板,扩增出hsp70启动子,测序选出无错配的启动子,将其定向克隆入E.coli-Mycobactrium穿梭质粒pBCG-2000中,构建成E.coli-Mycobacterium穿梭表达  相似文献   

15.
对TMV不同抗性番茄品种ct-DNA经限制性内酶切后,将所获得的差异片段Bam6克隆到质粒pBluescriptⅡSK中,经筛选、菌落原位杂交、斑点杂交及电泳鉴定,证明重组体为抗性品种Bam6差异片段克隆,对探讨番茄ct-DNA与抗TMV的关系有重要意义。  相似文献   

16.
应用基因工程技术,将EGF、GM-CSF基因克隆到pGEM-3Zf(+)载体的EcoRI,BamHI位点上,再将重组融合基因亚克隆到表达载体pBV220的EcoRI,BamHI位点上,在大肠杆菌DH5α中进行表达,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Westernblot表明EGF-GM-CSF融合蛋白获得表达,并且具有EGF、GM-CSF的免疫学活性.这为进一步研究该融合蛋白的功能和肿瘤治疗提供一种新的基因产品.  相似文献   

17.
用PCR方法从产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)中克隆出0.9kb的DNA片段,经DNA测序证明是α-乙酰乳酸脱羧酶(α-acetolactate decarboxylase,α-ALDC)基因。将α-ALDC基因重组到质粒,pBV220后,转化大肠杆菌,经筛选获得的高效表达的重组子菌株。  相似文献   

18.
用PCR扩增和克隆马立克氏病病毒糖蛋白D基因   总被引:2,自引:0,他引:2  
用PCR技术,从GA株马立克氏病病毒(MDV)感染的成纤维细胞(GEF)基因组DNA中扩增出MDV糖蛋白D(gD)抗原基因片段的约1300bp编码序列,将该pcR扩增的产物于EcoRI和Kpnl位点克隆到pUC18质粒载体中,在以digoxigenin(dig)标记的gDPCR产物作为探针,进行原位杂交初步筛选到阳性重组质粒克隆,再根据酶切分析筛选到含MDVgD基因的重组质粒p18MgD。将p18MgD质粒DNA用dig标记后,在Southernblot中,该探针能识别MDV基因组DNA的BamHI-A克隆中的A片段DNA。酶切位点分析表明,该gD克隆也和已发表的MDV的RBIB株gD一样,不含有EcoRⅠ、HindⅢ、PstⅠ、SmaⅠ、pvuⅡ等酶切位点。证明该重组质粒是MDVgD克隆。  相似文献   

19.
HCV NS5B基因片段克隆入BAC-TO-BAC^TM重组杆状病毒表达系统的pFASTHTc载体质粒,转化DH10BAC^TM感受态细菌获得重组的Bacmid质粒,将重组Bacmid质粒转染Sf细胞,获得的重组杆状病毒可表达目的蛋白。免疫印迹和体外活性检测表明,所表达蛋白为HCV NS5B蛋白,具有多聚酶活性。  相似文献   

20.
将切去3’端穿膜序列的EB病毒膜抗原(MA)基因,插入pSV2-dhfr质粒的SV40早期启动子下游,构建了真核表达载体pSV2-dhfrGPTR,使两个SV40早期启动子分别调控MA和二氢叶酸还原酶(dhfr)基因。将该重组质粒转化CHO-dhfr细胞,在选择培养基中筛选阳性克隆,用氨甲喋呤加压扩增,建立了表达EBV-MA的克隆细胞系。westernblot分析证明,所表达的蛋白的分子量大约为340kd和220kd。经过细Sepharose2B琼脂糖凝胶层析初步纯化的抗原与福氏佐剂混合免疫小鼠,2周后小鼠血清中出现明显的gp340/220特异性抗体,表明切去嵌膜区结构的EBV-MA基因在CHO细胞中的表达产物具有同天然膜抗原相似的分子量大小、糖基化程度、免疫特异性和免疫原性,可望成为EB病毒人用基因工程亚单位疫苗。  相似文献   

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