五肽胃泌素和胆囊收缩素对血管灌流大鼠离体胃运动的影响

用血管灌流大鼠离体胃制备,研究五肽胃泌素(G5)和八肽胆囊收缩素(CCK8)对胃窦收缩运动的影响。结果表明:(1)血管灌流G5和CCK8都能显著兴奋胃窦收缩运动,并有量效关系;(2)抗胃泌素血清(1:100)可完全取消G5对胃窦收缩运动的兴奋作用;(3)CCK受体阻断剂双丁酰环磷鸟苷和抗CCK8血清(1:100)都能完全取消CCK8对胃窦收缩运动的兴奋作用;(4)M受体阻断剂阿托品能完全阻断G5对胃窦收缩运动的兴奋作用,部分阻断CCK8对胃窦收缩运动的兴奋作用。上述结果提示:(1)G5可特异性兴奋血管灌流大鼠胃窦收缩运动,该作用通过壁内胆碱能神经系统介导;(2)CCK8对血管灌流大鼠胃窦收缩运动亦有特异性兴奋作用,该作用只是部分与壁内胆碱能神经系统有关。     

CCK-C受体与肿瘤

自从Smith等在1999年报道在胰腺癌中发现一种新型缩胆囊肽(cholecystokinin,CCK)受体(即CCK-C受体)以来,关于其结构及功能的研究已经引起广泛的兴趣。近几年相继有报道在多种癌组织中发现这种CCK-C受体,并明确了CCK-C受体是一种保留了第四内含子的CCK-B受体的变异体。研究还揭示了许多CCK-C受体的新特性,并发现其产生是由于癌细胞中低水平的U2AF35剪接因子造成的。由于CCK-C受体表现出与恶性肿瘤的密切关系,故目前研究的热点已经移向探求CCK-C受体的表达对肿瘤发生及生长的影响及其机制,并期望以此发现一种诊断及治疗多种恶性肿瘤的有力工具。     

胆囊收缩素受体拮抗剂加强大鼠的吗啡镇痛和羟甲芬太尼镇痛

已知大鼠脊髓蛛网膜下腔(i.t.)注射CCK-8能拮抗阿片μ受体介导的镇痛作用。本文给大鼠i.t.注射高选择性CCK-A受体拮抗剂devazepide和CCK-B受体拮抗剂L-365260阻断内源性释放的CCK-8,观察对阿片镇痛的影响。i.t.注射100ng devazepide或2.5ng L-365260可显著地增强吗啡镇痛(4mg/kg,sc),两者的剂量效应曲线均为钟形曲线;i.t.注射66ng devazepide或1.25ng L-365260也能显著地增强羟甲芬太尼(专一的阿片μ受体激动剂,OMF)的镇痛作用(32ng,i.t.),剂量效应曲线亦为钟形曲线。这两种CCK受体拮抗剂本身对病阈无影响。 以上结果表明,脊髓内有内源性CCK-8发挥对抗阿片镇痛作用;鉴于devazepide剂量大于L-365260剂量40-50倍,提示CCK-8在脊髓的抗阿片镇痛功能是通过CCK-B受体实现的。     

胃肠激素受体的生理和临床

近年来,胃肠激素受体研究受到广泛重视,其中研究得较多的有胆囊收缩素(CCK)、胃泌素(GAS)、血管活性肠肽(VIP)等等。由于绝大多数胃肠激素受体尚不能高度提纯,因此,受体性质的确定大多依靠结合试验和受体后生物效应的研究。前者有助于了解受体的特异性、     

食欲素1受体与胆囊收缩素2受体在细胞内的相互作用分析

食欲素1受体(orexin 1 receptor,OX1R)与胆囊收缩素2受体(cholecystokinin receptor,CCK2R)在结肠癌细胞中高表达,且异常表达的OX1R、CCK2R与其配体诱导的结肠癌细胞增殖密切相关,但具体机制尚不清楚。以前的研究证实,OX1R与CCK1R在HT-29细胞中能以二聚体的形式发挥作用。本文利用多种(荧光)共振能量转移技术(FRET)结合免疫共沉淀(Co-IP),进一步研究活细胞中OX1R与CCK2R是否发生相互作用。生物发光能量共振转移(BRET)结果显示,在控制供体(OX1R-Rluc)量不变,而逐渐增加受体(CCK2R-e YFP)转染量时,与无刺激的(对照)细胞比较,食欲素或胃泌素刺激HEK293T细胞5 min,BRET信号伴随受体表达量的增加而增加,并达到最大值。采用荧光共振能量转移技术在HEK293T细胞中,能够检测到OX1R-e YFP与CCK2Re CFP明显的FRET信号。同时,受体漂白FRET(ap FRET)结果揭示,在同时表达OX1R-e YFP和CCK2R-e CFP的细胞膜特定区域,进行受体蛋白(OX1R-e YFP)完全光漂白、破坏了受体-供体之间的相互作用和能量传递后,由于供体(CCK2R-e CFP)荧光强度比漂白前明显增强,其荧光共振能量转移效率(FREPe)明显增加,是对照转染细胞的3.7倍(P0.05)。此外,基因转染结合Co-IP结果显示,仅有在共转染HA-OX1R与Myc-CCK2R的HEK293T细胞提取液的免疫沉淀物中,可同时检出HA-OX1R、Myc-CCK2R融合蛋白,而在未转染或单转Myc-CCK2R的细胞提取液沉淀物中,却不能同时检出两种融合蛋白。以上结果表明,在活细胞生理条件下,OX1R可与CCK2R相互作用,这为进一步探讨二者相互作用在结肠癌细胞增殖中的作用及相关信号通路提供了新的线索。     

食欲素1受体与胆囊收缩素2受体在细胞内的相互作用分析北大核心CSCD

食欲素1受体(orexin 1 receptor,OX1R)与胆囊收缩素2受体(cholecystokinin receptor,CCK2R)在结肠癌细胞中高表达,且异常表达的OX1R、CCK2R与其配体诱导的结肠癌细胞增殖密切相关,但具体机制尚不清楚。以前的研究证实,OX1R与CCK1R在HT-29细胞中能以二聚体的形式发挥作用。本文利用多种(荧光)共振能量转移技术(FRET)结合免疫共沉淀(Co-IP),进一步研究活细胞中OX1R与CCK2R是否发生相互作用。生物发光能量共振转移(BRET)结果显示,在控制供体(OX1R-Rluc)量不变,而逐渐增加受体(CCK2R-e YFP)转染量时,与无刺激的(对照)细胞比较,食欲素或胃泌素刺激HEK293T细胞5 min,BRET信号伴随受体表达量的增加而增加,并达到最大值。采用荧光共振能量转移技术在HEK293T细胞中,能够检测到OX1R-e YFP与CCK2Re CFP明显的FRET信号。同时,受体漂白FRET(ap FRET)结果揭示,在同时表达OX1R-e YFP和CCK2R-e CFP的细胞膜特定区域,进行受体蛋白(OX1R-e YFP)完全光漂白、破坏了受体-供体之间的相互作用和能量传递后,由于供体(CCK2R-e CFP)荧光强度比漂白前明显增强,其荧光共振能量转移效率(FREPe)明显增加,是对照转染细胞的3.7倍(P<0.05)。此外,基因转染结合Co-IP结果显示,仅有在共转染HA-OX1R与Myc-CCK2R的HEK293T细胞提取液的免疫沉淀物中,可同时检出HA-OX1R、Myc-CCK2R融合蛋白,而在未转染或单转Myc-CCK2R的细胞提取液沉淀物中,却不能同时检出两种融合蛋白。以上结果表明,在活细胞生理条件下,OX1R可与CCK2R相互作用,这为进一步探讨二者相互作用在结肠癌细胞增殖中的作用及相关信号通路提供了新的线索。     

中枢八肽胆囊收缩素对抗吗啡镇痛的作用部位及其参与吗啡耐受形成的机制

关于中枢胆囊收缩素(CCK)的研究开始于1975年,Vanderhaegher首先发现大鼠脑内存在胃泌素样免疫活性物质。次年Dockray等在此基础上证实脑内的胃泌素样物质就是CCK,1980年Dockray等又进一步证明脑内的CCK主要是含硫的羧基末端八肽     

八肽胆囊收缩素对大鼠心功能的影响及受体机制

为探讨八肽胆囊收缩素 (CCK 8)对麻醉大鼠心功能的影响及受体机制 ,实验监测了左心室收缩压(LVP)、左心室收缩与舒张期内压变化的最大速率 (±LVdp/dtmax)、心率 (HR)和平均动脉压 (MAP)。结果如下 :小剂量CCK 8(0 4 μg/kg)可引起心动过速 ,MAP、LVP和±LVdp/dtmax轻度上升 ;中剂量CCK 8(4 μg/kg)和大剂量CCK 8(4 0 μg/kg)可引起心动过缓 ,MAP、LVP和±LVdp/dtmax显著增加 ;应用CCK 受体 (CCK R)拮抗剂丙谷胺 (1 0mg/kg)抑制以上变化 ;由逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测到心肌组织有CCK A受体 (CCK AR)和CCK B受体 (CCK BR)mRNA表达。以上结果提示 :CCK 8可激活心肌组织的CCK R ,引起剂量依赖性的心功能增加和心率改变。     

胆囊收缩素8对大鼠大脑皮质细胞钙调素和蛋白激酶C活性的影响

 为阐明中枢神经系统中胆囊收缩素 8(CCK8)受体的信号传递机制 ,以分离的大鼠大脑皮质神经细胞为材料 ,观察了CCK8对细胞内钙调素 (CaM)、3′ ,5′ 环腺苷酸 (cAMP)、蛋白激酶C(PKC)活性的影响 研究结果表明 ,CCK8可刺激大脑皮质细胞CaM、PKC活性的增加 ,并有剂量依赖关系 但CCK8在 10 -12 ～ 10 -6mol L范围内 ,细胞内cAMP含量无显著变化 利用受体亚型L 364,718和L 365,2 60的研究表明 ,两种拮抗剂均可抑制CCK8引起的CaM和PKC活性变化 ,但两者IC50 不同 对于CaM ,CCKB 受体拮抗剂L 365,2 60的IC50 比CCKA 受体拮抗剂L 364,718低 4 0倍 ;而对于PKC ,L 365,2 60的IC50 比L 364,718低 60倍 因此认为 ,CCK8主要是通过CCKB 受体介导了CaM和PKC活性的变化     

禁食和复投喂对大口黑鲈胆囊收缩素及其受体基因表达的影响

为研究大口黑鲈(Micropterus salmoides) 胆囊收缩素(Cholecystokinin, CCK)和其受体(Cholecystokinin receptor, CCKR)基因在摄食活动中的功能, 研究通过克隆得到CCK1、CCK2、CCK1R和CCK2R基因的编码区序列, 其长度分别为414、387、1368和1359 bp, 分别编码137、128、455和452个氨基酸。荧光定量结果表明CCK1和CCK2基因均在脑组织中高表达, 其次为肠道组织, 而CCK1R和CCK2R基因分别在胆囊和脑组织中高表达。在摄食后24h内, CCK1、CCK2、CCK1R和CCK2R基因的相对表达量呈先升高后下降趋势, 其中CCK1、CCK1R和CCK2R基因在摄食后3h相对表达量达到最高值, 而CCK2基因在摄食后12h相对表达量达到最高值(P<0.05)。禁食过程中CCK1、CCK1R和CCK2R基因相对表达量在禁食14d时显著升高(P<0.05)。复投喂后CCK1、CCK1R和CCK2R基因的相对表达趋势与餐后表达趋势相似, 呈先升高后降低趋势。但在禁食和复投喂过程中CCK2基因相对表达量并无显著变化。综上所述, 研究结果推测CCK1基因可能与CCK1R、CCK2R基因结合, 作为饱腹信号因子, 通过抑制食欲调控大口黑鲈摄食、消化等生理过程; 而CCK2基因可能作为短期食欲因子调节摄食活动。研究结果可为大口黑鲈摄食活动调节提供理论依据。     

胆囊收缩素参与胃肠运动功能调节

胰和胆囊是胆囊收缩素(CCK)在胃肠道中的主要靶器官。鉴于CCK受体存在于整个胃肠道,并且存在于胃、胆囊、小肠和结肠的平滑肌细胞上,因而有理由认为CCK不仅具有刺激胰、胆分泌的生理作用,而且亦可能调节胃肠运动。新近面世的CCK受体拮抗剂loxiglumide(Lox)系抗溃疡新药丙谷胺(proglumide)     

柴胡皂甙(I)对胰腺腺泡的拟膜受体激动剂作用

应用检测淀粉酶分泌和单细胞[Ca2 ]i 的技术 ,研究了Bt2-cGMP和GDP对柴胡皂甙(I)[SA(I)]和CCK -8促大鼠胰腺腺泡酶分泌和增加[Ca2 ]i 的抑制作用。Bt2-cGMP对SA(I)和CCK -8促酶分泌的抑制有相似的剂量依赖性。Bt2 -cGMP对SA(I)刺激的酶分泌动力学的抑制较对CCK -8滞后并持续。SA(I)诱发的胰腺腺泡单细胞[Ca2 ]i 的变化与CCK -8的作用有所不同 :[Ca2 ]i 峰值上升较慢且持续较长 ,并在峰后[Ca2 ]i 再次升高。GDP亦抑制SA(I)刺激的酶分泌和[Ca2 ]i 增加的峰植。结果表明 ,SA(I)可激活胰腺腺泡细胞膜受体从而升高[Ca2 ]i 和促酶分泌。     

胰腺腺泡上有两种新型受体

胰腺腺泡上有 CCK,secretin、VIP、蛙皮素(bombesin)、P 物质(substance P)、霍乱毒素(chole-ra toxin)和胆碱能神经的 M 受体等受体。最近,法国国立卫生研究院的 Andre 和正在美国 NIH 工作的中国学者周志超分别又发现了胰腺腺泡上的两种新型受体,即多巴胺受体和降钙素基因相关肽(cGRP)受     

八肽胆囊收缩素可激发下丘脑-垂体-肾上腺轴的功能

长期以来,一直困扰人们的问题之一是外周应用胆囊收缩素(CCK)可以产生类似于中枢促肾上皮质激素释放激素(CRH)所引起的饱食和焦虑的作用。问题的焦点在于CCK能否激发CRH的功能,其途径如何?后来人们发现,外周应用CCK还可以引起血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)的急性释放,对此曾提出假设,认为CCK可能是通过外周迷走神经将信息传入中枢的,只是由于当时对于CCK受体的了解还不够多,以及缺     

胆囊收缩素及其类似物对兔血浆自由脂肪酸浓度的降低作用

我们最近曾报道,向兔侧脑室内灌注八肽胆囊收缩素(CCK-8)有明显的降低血浆自由脂肪酸(FFA)的作用。本实验进一步观察不同分子形式的 CCK,以及与 CCK 结构相近似的雨蛙肽(Caerulein)和胃泌素(G-17)对血浆 FFA 浓度的影响,并在摩尔量基础上比较它们的相对作用强度。结果如下:(1)侧脑室灌注CCK-8(50pmol)可引起血浆 FFA 浓度明显降低。灌注后第45分钟时,平均降低47.8%,(2)等摩尔量的CCK-4也有降低血浆 FFA 的效应(-35.1%),但其作用比CCK-8弱;(3)灌注50pmol的CCK-33对血浆 FFA 浓度无明显作用,但随着灌注剂量的增加,作用也趋明显,在10倍量时(500pmol),其作用强度与 CCK-8(50 pmol)相似,(4)雨蛙肽具有与CCK-8相似的作用(-45.1%),但G-17的作用较弱(-24.5%)。以CCK-8的作用强度为1,上述肽类在等摩尔量基础上降低血浆 FFA 浓度的相对强度如下:CGK-8:CCK-4:CCK-33:雨蛙肽:G-171:0.76:0.09:0.94:0.51可以认为,脑内CCK-8作用的发挥与其化学结构具有一定的关系,羧基端八肽酰胺可能是脑内CCK-8降低血浆 FFA 浓度的重要结构。这一结果与哺乳动物脑内 CCK 的主要形式为CCK-8是一致的。     

抗溃疡药是作用在胃免疫系统细胞

人们一直认为,胃粘膜壁细胞的功能失调是溃疡病的主要病因,抗溃疡药组胺H_2受体阻断剂、多巴胺受体阻断剂、毒蕈碱型胆碱能受体阻断剂均作用于壁细胞而产生疗效。最近匈牙利两位学者Eva Mezey和Miklos Palkovits所做的实验对这一传统观点提出质疑。他们用组织化学杂交定位法显示出组胺H_2受体、M_1至M_5胆碱能受体、胃泌素受体及D_1至D_5多巴胺受体的mRNA在胃粘膜内的分布。结果表明,含有这些mRNA的阳     

雨蛙肽中枢促胃酸分泌作用机制的初步分析

利用特异的受体阻断剂能够拮抗相应的受体激动剂的效应的原理,分析雨蛙肽中枢促胃酸分泌作用的受体机制。向大鼠侧脑室内注射微量雨蛙肽(67ng/鼠),可引起急性灌流大鼠胃酸分泌明显增加。预先向大鼠侧脑室内注射肾上腺素受体阻断剂酚妥拉明或心得安,20min后再向侧脑室内注射雨蛙肽,预处理对雨蛙肽的促胃酸分泌作用影响不大。但事先向侧脑室内注射乙酰胆碱受体阻断剂阿托品或胆囊收缩素(CCK)受体阻断剂二丁酰环化-磷酸鸟苷(Bt_2 cGMP)则可有效地阻断雨蛙肽的作用。以上结果提示,脑内雨蛙肽促胃酸分泌机制中,可能有 CCK 受体和胆碱能受体参与,而与肾上腺素能系统关系不大。     

胃泌素释放肽受体在认知功能及行为中的作用

胃泌素释放肽(gastrin-releasing peptide,GRP)是哺乳动物体内的一种神经肽,它可以和细胞膜表面的胃泌素释放肽受体(gastrin-releasing peptide receptor,GRPR)结合产生相应生理作用。GRPR是G蛋白偶联受体超家族的成员,其介导的信号可以调节神经及神经内分泌方面的许多重要功能,包括认知功能和行为等方面。研究发现GRPR表达的改变可以引起神经退行性变、神经发育、心理紊乱等中枢神经系统疾病。GRPR在中枢神经系统疾病发生发展过程中有着重要作用,提示GRPR激动剂或者拮抗剂可能改善与神经疾病相关的认知和行为缺陷。     

胃泌素及其受体的分子生物学研究进展

胃泌素是一种刺激胃酸分泌的胃肠道激素,并能刺激胃肠道粘膜及肿瘤的生长。胃泌素曾被认为是一种自泌生物因子在胃肠道恶性肿瘤中起作用,但是近年来人们更加重视胃泌素原,甘氨酸胃泌素及其受体在恶性肿瘤中的作用。     

缩胆囊素受体拮抗剂对血浆缩胆囊素生物测定的影响

利用生物法测定了102例正常人空腹及进食二个油煎鸡蛋30min后血浆CCK浓度,结果分别为1.4±0.1pmol/L和4.9±0.4pmol/L(X±SE)。血浆CCK浓度不随性别和年龄而变化。本文研究了三种不同类型的CCK受体拮抗剂对CCK生物测定的影响。一组将L364,718(5.0nmol/L),丙谷胺(1.0mmol/L)或Bt_2-cGMP(0.1mmol/L)分别加入含8pmol/LCCK-8的人血浆,用SEP-PAK提取,另一组先提取血浆,于测定前向血浆提取物内加入上述拮抗剂,两组同时测定。结果显示,在有L364,718存在时仍可利用生物法测定血浆CCK浓度,如血中含有丙谷胺或Bt_2-cGMP则无法准确测定。