昆虫胆碱酯酶测定方法综述

<正> 胆碱酯酶(Cholinesterase,ChE)可以分成两类:一类是乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,AChE),又称真胆碱酯酶;另一类是丁酰胆碱酯酶(Butyrylcholinesterase,BuChE),又称假胆碱酯酶。在昆虫中主要是AChE,因此这里介绍的测定方法主要是针对AChE。昆虫的AChE测定方法很多,主要有测压法、测pH法、比色法(分光光度法)、荧光法、同位素法和电化学法等。以下就一些常用的方法作一简单介绍。     

抗乙酰胆碱酯酶单克隆抗体的研究

<正> 乙酰胆碱酯酶(Acetylcholine acetylhydrolase,EC 3.1.1.7.简称AChE)是神经系统中重要的水解酶,它催化胆碱能神经末梢释出的化学递质已酰胆碱水解,使之在完成信息传递后迅速失活,以维持正常的神经活动。AChE的生化研究因而受到广泛的重视。近年来,抗AChE单克隆抗体已用于组织、种属及分子型间AChE交叉免疫反应性的研究、AChE磷     

日本血吸虫胆碱酯酶的组织化学定位

血吸虫的胆碱酯酶(ChE)与血吸虫神经介质的传递、肌肉活动以及与其它物质代谢均有密切关系,也是抗血吸虫药物作用的靶子之一。1959年沈美玲等进行了药物对日本血吸虫乙酰胆碱酯酶(AChE)活力的研究。最近,姚民一等(1981)采用等电聚焦电泳分离出日本血吸虫胆碱酯酶的同功酶。然而有关血吸虫胆碱酯酶的组织化学定位研究主要限于曼氏血吸虫(Pepler,1958;Lewert等,1965;Fripp,1967;Bueding等,1967;Bruckner等,1974;Diconza等,1975)除Bueding简单述及日本血吸虫成虫的AChE外,迄今国内外尚无日本血吸虫CbE的组化资料,而且日本血吸虫的神经系统也未被专门观察。由于ChE的组化定位能细致地显示出血吸虫的神经系统构造,并能进一步提     

血液灌流抢救140例急性有机磷农药中毒的护理体会

急性有机磷农药中毒后,有机磷与胆碱酯酶结合形成磷酰化胆碱酯酶,丧失水解乙酰胆碱的能力,导致乙酰胆碱在胆碱能神经突触间隙中蓄积,产生有机磷中毒症状。常用的解毒药物如抗胆碱药物阿托品可阻断节后胆碱能神经支配的效应器上的毒蕈碱受体,对抗乙酰胆碱毒蕈样症状,是治疗有机磷中毒的关键药物,但若中毒量过大,超过了阿托品对抗的极限,则难以挽救病人生命。     

卫氏并殖吸虫童虫神经系统结构的胆碱酯酶组织化学定位

乙酰胆碱酯酶(AChE)的组织化学定位,被广泛用于显示动物神经组织中胆碱能神经细胞的存在。现已证明,多种蠕虫神经组织存在 AChE 活性。关于卫氏并殖吸虫(Paragonimus westermani)神经系统结构的较完整资料尚未见报道。为此,我们用 AChE 整体组织化学定位的方法,对卫氏并殖吸虫童虫神经系统结构进行了研究,报告如下。     

大鼠尾壳核衰老变化定量分析：Ⅰ,乙酰胆碱（Ach）系统

应用二异丙基氟磷酸(DFP)控制的乙酰胆碱酯酶(AChE)药物组化染色显示大鼠尾壳核AChE。图像分析系统测定结果表明:老年大鼠(26—27月龄)尾壳核内胆碱能神经元面积、数目及AChE合成速率均较成年大鼠(3—4月龄)减小。这些现象可能是衰老大鼠尾壳核胆碱能神经元功能障碍的生物学基础。     

大鼠背根神经节细胞—氧化氮合酶与乙酰胆碱酯酶共存的组织化学研究

用还原型尼克项胺腺嘌呤二核苷磷酸黄递酶反应,结合乙酸胆碱酯酶组织化学技术,观察了SD大鼠背根神经节,发现背根神经节内存在有四种不同显色的神经元。（1）AChE阳性神经元（8％）。（2）NADPH－d阳性神经元（2％）。（3）NADPH－d与AChE双显色神经元（90％）。（4）少数两种酶反应均为阴性神经元。其中双显色神经元胞质内含有蓝色和棕色两种颗粒。这证明背根节内存在许多NADPH－d与AChE共存的神经元。提示了背根节内NADPH－d与AChE双染神经元可能与痛感知的传递有关。     

急性心肌梗死对乙酰胆碱酯酶阳性神经的影响

目的研究大鼠实验性心肌梗死后,梗死周围区乙酰胆碱酯酶(AChE)阳性神经纤维支配的变化.方法制大鼠心肌梗死模型,应用乙酰胆碱酯酶组织化学方法,显示左心室AChE阳性神经纤维,并测定其密度.结果心肌梗死后4天,梗死周围区AChE阳性神经纤维密度为(0.82±0.35),与梗死前左心室AChE阳性神经纤维密度(1.52±0.15)比较,有极显著差异(P<0.01).结论心肌梗死使部分梗死周围区出现去AChE阳性神经支配.     

梭曼对大鼠应激性体温过高的作用及中枢和外周胆碱能受体阻断剂对其效应的影响

目的：观察梭曼对大鼠应激性体温过高的抑制作用以及中枢和外周胆碱能受体阻断剂对其效应的影响。方法：用无线遥测技术测量大鼠的体温,观察皮下注射梭曼、东莨菪碱、甲基东莨菪碱和吡啶斯的明对开放环境中大鼠应激性体温过高的影响。用分光光度技术测定血浆中胆碱酯酶活性。结果：①对照组大鼠在开放实验箱中体温升高达0.96℃,而注射梭曼动物体温只升高了0.55℃。中枢性胆碱能受体阻断剂东莨菪碱几乎完全阻断梭曼对应激体温过高的抑制作用,而外周胆碱能受体阻断剂甲基东莨菪碱则能明显增强梭曼对应激性体温过高的抑制作用。②外周抗胆碱酯酶剂吡啶斯的明能使血浆胆碱酯酶的活性降低至52%,同时明显提高开放环境中大鼠应激性体温过高的反应。甲基东莨菪碱几乎可以阻断吡啶斯的明对应激体温过高反应的影响。结论：神经毒剂梭曼可改变大鼠在开放环境中应激性体温过高的反应能力,其作用主要是通过中枢毒蕈碱型胆碱能通路所致。此外,外周胆碱能神经参与大鼠开放应激性体温过高的形成过程。     

脊髓源神经干细胞诱导分化为胆碱能神经元过程中Aldoc和Stmn1表达的研究

目的探讨脊髓源神经干细胞在诱导分化为胆碱能神经元过程中Aldoc和Stmn1的表达变化情况。方法从孕17天Wistar胚胎大鼠取出脊髓组织,制成细胞悬液,采用含EGF和bFGF的无血清限定性培养基培养,然后进行诱导分化,观察脊髓源神经干细胞向胆碱能神经元分化的情况,应用荧光定量PCR方法分析Aldoc和Stmn1基因在脊髓源神经干细胞诱导分化为胆碱能神经元的过程中的表达变化情况。结果神经干细胞在诱导分化为胆碱能神经元后,经免疫荧光检测有ChAT阳性细胞表达;Aldoc基因的表达量在胆碱能神经元较神经干细胞低(P<0.05);Stmn1基因的表达量则在诱导分化后较神经干细胞升高(P<0.05)。结论 Aldoc对神经干细胞的干性维持有重要作用,Stmn1在胆碱能神经元的成熟过程中起作用。     

中枢胆碱能系统投射支配鸣禽鸣唱控制系统并调控鸣唱行为

鸣禽因其独特的习得性鸣唱行为,成为了研究运动学习的理想模型。现已证实,鸣禽的鸣唱行为受前脑内的鸣唱控制系统直接调控。有证据显示,鸣唱控制系统内有胆碱能递质及其受体分布,其中发声运动核团接受来自基底前脑中枢胆碱能系统的胆碱能神经支配,其可通过胆碱能递质影响发声运动核团的神经活动,进而影响鸣唱行为。在哺乳动物中的研究证实,中枢胆碱能系统参与了对运动行为和运动学习神经过程的调控。了解中枢胆碱能系统对鸣禽鸣唱行为的调控作用,有助于更好地理解鸣禽鸣唱运动控制和鸣唱学习记忆的神经机制,并可从比较生理学的角度,为研究其它动物感觉运动和学习记忆的神经过程,乃至人类语言产生的神经过程提供重要参考。本文对迄今国内外在胆碱能递质对鸣禽发声运动核团作用受体的选择性及其对神经元活动影响的研究进展进行了综述,为揭示中枢胆碱能系统调控鸣禽鸣唱行为的神经机理提供有价值的线索。     

新生大鼠脑低氧缺血早期对纹状体胆碱能系统的影响

采用7日龄大鼠右侧颈总动脉结扎合并高温、低氧环境制作新生动物脑低氧缺血模型,观察了脑低氧缺血对新生动物纹状体胆碱能系统的影响。乙酰胆碱(ACh)放射免疫测定结果表明,低氧缺血损伤后24h,两侧纹状体ACh含量均比正常对照组明显下降。乙酰胆碱酯酶(AChE)组织化学图象定量提示,脑低氧缺血后24h,纹状体内拟胆碱能神经元数量未见减少,而胞体内AChE染色强度略有下降。胆碱能递质和该标志酶在新生鼠脑低氧缺血早期的一致改变,证明发育中纹状体胆碱能系统对低氧缺血敏感。鉴于动物不结扎动脉仅作低氧处理者双侧纹状体ACh含量出现与低氧缺血组相同的改变,故提示缺氧可能是造成胆碱能系统早期损伤的直接原因。     

水螅AChE和NPY类似物的定位

乙酰胆碱脂酶(AChE)组织化学定位方法常用于研究动物的神经系统,但迄今未见水螅AChE分布定位的相关报道。本文使用免疫细胞化学、组织化学和亚甲基蓝活染方法,探索AChE、NPY类似物在水螅上的连续分布状态,对阳性标本进行内胚层、外胚层人工分离手术,并与亚甲基蓝染色结果进行比较。本文首次成功地在水螅上定位出AChE,展示了AChE、NPY类似物在水螅上的分布特点。AChE定位在水螅体柱和触手基部外胚层的近外表,呈网状结构,正常水螅上没有发现明显的阳性神经细胞,外胚层表面受损部位内有阳性神经细胞,我们认为是一种临时的生理现象。成熟刺丝囊的刺针内有AChE 产物。NPY免疫组织化学反应(NPYIR)在水螅外胚层近外表处上均有分布,呈网状结构。垂唇和近基盘处NPYIR最强,NPYIR神经细胞仅存在于垂唇和近基盘处的外胚层基部。刺丝囊分化、发育初期NPYIR较强。随刺丝囊发育成熟而逐渐减弱。最后,进行了分析和比较,认为NPY、AChE来源于上皮细胞。水螅刺丝囊的分化和发育与NPY的作用密切相关;刺丝囊发射刺丝的机理与胆碱能的作用可能有联系     

miR-126、miR-31在运动神经元与神经干细胞分化所得胆碱能神经元间表达情况的比较

目的了解运动神经元和神经干细胞诱导分化所得胆碱能神经元间miR-126和miR-31的差异表达情况,并以此来探讨两种细胞之间的差异。方法应用ABI公司的TaqMan MicroRNA Assays real-time PCR技术,观察miR-126和miR-31在运动神经元与神经干细胞分化所得胆碱能神经元中的表达情况。结果 miR-126在神经干细胞分化所得胆碱能神经元中的表达是在运动神经元中的0.002倍(P<0.05)。miR-31在神经干细胞分化所得胆碱能神经元中的表达是在运动神经元中的56.444倍(P<0.05)。结论 miR-126和miR-31在运动神经元与神经干细胞分化所得胆碱能神经元中的表达存在差异,对二者预测靶基因参与的生物学过程分析,暗示两种细胞可能在信号传导和发育上存在有差别。     

多靶点抗AD bis-MEP-乙二酰胺杂合物ZLA抑制神经元型AChE活性及促智作用研究

目的:探究ZLA对神经元型AChE的抑制活性及其对中枢胆碱能神经功能障碍导致的学习记忆功能减退的改善作用。方法:通过体外实验观察ZLA对神经元型AChE活性的影响;通过ex vivo实验观察ZLA体内AChE抑制活性;利用Morris水迷宫行为学实验探讨ZLA对东莨菪碱诱发的小鼠学习记忆功能障碍的改善作用。结果:ZLA明显抑制人SH-SY5Y神经元细胞和小鼠海马神经元来源的AChE活性。另外,ZLA腹腔注射后以剂量依赖性方式抑制小鼠脑内AChE活性。Morris水迷宫实验结果显示,ZLA显著改善东莨菪碱引起的学习和记忆功能障碍。结论:ZLA能够抑制神经元型AChE活性并具有促智作用。     

大鼠隔—海马通路损伤对海马内递质含量及酶活力的影响

单侧切断大鼠海马缴和部分穹窿可使海马部分去神经。损伤后7d,海马内胆碱能系统中乙酰胆碱(ACh)含量下降72.5%,胆碱乙酰基转移酶(ChAT)活力下降45.7%,胆碱酯酶活力下降52.2%,在单胺能系统中,去甲肾上腺素(NA)含量下降16.3%,多巴胺(DA)含量下降31.3%,5-羟色胺含量下降30.3%。在损伤过程中,海马内氨基酸含量没有改变。实验结果表明,海马缴和穹窿是脑内胆碱能和单胺能传入神经到达海马靶区的部分共同通路。     

抑制乙酰胆碱酯酶对乙酰胆碱受体也有影响

通常认为,乙酰胆碱酯酶(AChE)通过水解乙酰胆碱(ACh)影响突触传递。抑制AChE.ACh水解减少,其突触后效应增强。然而,Fossier等最近在加利福尼亚海螺(aplysia Californica)的离休口腔神经节(buccal、ganglion)制备发现,抑制AChE对乙酰胆碱受体(AChR)也有影响。Fossier等在生理营养液连续灌流下,固定该制备突触前、后神经元的膜电位,并维持突触后神经元的Cl~-翻转电位不变,观察灌流液中添加各种AChE抑制剂后该神经节中的胆碱能中间神经元对胆碱类激动剂的突触后电流(PSC)反应的变化。发现:经有机磷类AChE抑制剂处理后,该制备不仅对ACh的PSC反应增强为静息电流的269±32%,而且对不被AChE水解的卡巴可(carbachol)的反应也增强为176±7%。经氨基甲酸酯类AChE抑制剂普鲁斯的明(prostigmine)和肟类化合物contrathion(AChE有机磷中毒的复活剂,也是一种迅速可逆的AChE强抑制剂)处理后,其PSC反应类似。     

大鼠皮层神经干细胞分化为胆碱能神经元过程中骨架蛋白的表达

目的对皮层神经干细胞向胆碱能神经元定向分化及骨架蛋白(β-tubulin)进行探讨研究.方法采用细胞培养技术、免疫细胞化学方法观察皮层神经干细胞向胆碱能神经元定向分化及其过程中骨架蛋白表达变化.结果皮层神经干细胞在去除丝裂原后开始进行分化,至第7d可分化为成熟神经元,NSE、Ach E反应明显阳性,随着分化神经元的逐渐成熟,β-tublin在细胞内的分布亦发生变化,由核周集中分布变化为广泛分布于细胞质内,形成细网状,构成细胞骨架.结论皮层神经干细胞定向分化为胆碱能神经元的过程中伴随有骨架蛋白的时空变化,随神经元的成熟而构成细胞骨架.     

胰腺腺泡有两种M受体亚型

胰腺腺泡存在胆碱能神经的 M 受体。胆碱能神经激动剂通过作用于 M 受体引起腺泡释放淀粉酶。新近,美国密执安州医科大学的 Dexter 等发现,胰腺腺泡有两种不同亚型的胆碱能神经 M 受体。Dexter 首先用 M_1受体阻断剂 pirenzepine 和 M_2受体阻断剂4-DAMP 研究了对乙酰胆碱引起的腺泡淀     

神经生长因子对低氧缺血新生鼠纹状体内胆碱能神经元的保护作用

采用7日龄大鼠右侧颈总动脉结扎合并高温低氧环境制作的脑低氧缺血(hypoxia-ischemia)模型,观察神经生长因子(NGF)对新生动物纹状体胆碱能递质改变的影响。新生鼠结扎合并低氧后,脑室内一次注射NGF,可防止24h后纹状体乙酰胆碱(ACh)含量及乙酰胆碱酯酶(AChE)组织化学图像定量的改变,上述结果提示,新生鼠脑低氧缺血早期应用NGF对因低氧缺血所引起的新生鼠脑纹体胆碱能系统的变化有保护作用。