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《生物技术通报》1992,(9)
92弓1 38合成无dc-dG拖尾的全长双链cONA转录本的新方法〔英〕/Fukuoka,5.1.…了Nueleie AeidsRes一1991,19(24)一6961~6962〔译自DBA,1992,11(6),92一02479〕 该方法利用末端转移酶将dC同聚物拖尾(15个碱基)添加到eDNA中。用合成的01190一ribo一G (rG,巧聚体)引导全长第二条链cDNA的合成。完成ds cDNA合成后,用RNA酶H消除RNA-DNA异源双链核酸分子拖尾中的rG核昔酸,用噬菌体T4 DNA聚合酶消除暴露的单链dC同聚物拖尾。产生的ds oDNA转录本不含C/G拖尾,通过连接物一接头辅助消化可将其插人任一载体。(朱遐)923139DNA片段的… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(3)
920836用盆组聚合酶链反应构建小砚全长血型.蛋白签因〔英〕/Gu,H.一厂B ioehe皿.Biophys.Res.Commun一1991,177(i)一202~208〔译自})BA,1991,10(15),91一08450〕 分别从贫血小鼠脾基因库(质粒pBR322)和小鼠基因库(质粒pUC18)中分出小鼠血型搪蛋自一A基因不完全cDNA克隆(质粒pGP315)和基因组克隆(质粒pGX7,含第一个外显子和转录起始位点附近的序列),并定序。由于缺乏构建小鼠全长血型糖蛋白一A基因的限制位点,用聚合酶链反应拼接这两部分序列克隆擂人的成分,获得全长的重组DNA片段(IO53bp,含小鼠血型糖蛋白A eDNA)。用5种DNA… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(10)
923843RFLP在分析桃遗传连锁图谱中的应用〔英〕/Eld-redge,L.…f Hortseienee一1992,27(2)一160一163〔译自DBA,1992,11(9),92-05149〕 利用桃(P,“:。s尹ers云ca)作为模型植物,借助于RFLP研究了桃的基因组组成。从其各个品种叶组织分离出基因组DNA,用之构建基因库。再用携带着存在于基因组内特定位点的DNA序列的DNA探针筛选RFLP“。初步结果表明,60%的克隆DNA以低拷贝数存在于桃基因组内。对其序列进行筛选和鉴定后,发现存在多态现象,这足以制备RFLP图谱。在各个桃品种中约33%cDNA克隆和20%基因组克隆出现RFLP。两个家系… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(6)
922110在噬菌体表面装配组合抗体库:genelll位点〔英〕/Barbaslll,C.F.…/Proe.Natl.Aead.Sei.U.S。A一1991,55(18)一7975~7982仁译自DBA,1991,10(23),13354〕 建成phagemid pCombs系统,以使线型噬菌体M13(克隆于大肠杆菌XLI一Blue)表面的组合抗体Fab库呈单价。Fab片段与gene一111蛋白C-末端区融合。表面带有人抗一破伤风类毒素克隆10C Fab片段的噬菌体与非特异性噬菌体相比抗原覆盖表面积增大1000~100000倍。用此系统分拣预先鉴定的人组合抗一破伤风类毒素Fab基因库,以验证其可用性。此基因库已重新构建于pComb3中,保留了原有的… 相似文献
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930883成熬苹果的一种与乙烯有关的cDNAE英]/RO$S,G.S.…,Plant‘M01.Bi01.·1992,19(2).-231～238E译自DBA,1992,11(17),92—09589] 分离出与参与乙烯生产的mRNA互补的苹果与成熟有关的cDNA。从成熟苹果果实的皮层组织提取Poly—A RNA,在pSPORT载体中构建cDNA基因库。用质粒pTOMB(编码氨基环丙烷羧酸氧化酶的番茄cDNA克隆)筛选基因库。分离出一个苹果cDNA克隆(pAP4),并测定了DNA序列。1182bp的cDNA插入物包括l段942bp的开读框,它与番茄和颚梨的序列在核酸及氨基酸水平上均有很强的同源性。经计算,多肽的分子量为3540… 相似文献
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用胚胎癌细胞株(EC)PCC_3,的poly(A)~+RNA及质粒pBR 322在大肠杆菌中建立了一个eDNA文库。用另一株EC细胞F(?)及由EC细胞衍生的分化细胞株滋养层母细胞癌TDM_1的~(32)PcDNA作探针,对PCC_3 eDNA文库作了差别筛选。自3,000个cDNA克隆中筛出25个克隆。其中1个克隆MS,含有长250bp的cDNA。用MS,cDNA作探针,在F(?)细胞中能检出1个占poly(A)~+RNA约0.2—0.4％、长6kb的RNA(MS_3RNA)。用点印迹杂交及Northern印迹杂交分析法,证明MS_3RNA还存在于供试的另2株未分化EC细胞株PCC_3、PSA_1-NG_2中。在供试的全部分化细胞株,即TDM_1、PSA_1-2、3/A/1-D3、C_(17)-S_1-T(284)中,均查不到MS_3RNA。用Southern印迹杂交分析法,证明MS_3基因在小鼠基因组中存在着大量的拷贝,对小鼠胚胎基因文库的筛选表明,MS_3基因有一个中等重复的基因家族,这个家族在小鼠基因组中约有3,000个成员。 相似文献
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《生物技术通报》1992,(8)
922901在杂种病毒辐粒表面表达口蹄痊病毒外宪蛋白抗原决定签单体或二聚体的修饰的活的感染性牛.炎病拜度苗〔英〕/K it,5.…f Areh.virol一i。。1,120(i~2)。一i~17〔译自DBA,1992,11(s), 92一01373〕 将化学合成的编码牛生长激素信号肤序列和口蹄疫病毒(FMDV)VPI抗原决定基序列单体或二聚体擂入到感染性牛鼻炎(IRV)主要糖蛋白g皿基因中,构建了修饰的减活的牛感染性鼻炎杂种病毒疫苗。外源DNA序列擂入到IRVg皿编码序列的N一末端上,并受IRV 9111启动子控制。由含单体和二聚体FMDV抗原决定基序列插入的杂种病毒分别选择编码IRVg… 相似文献
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《生物技术通报》1994,(3)
9俘1204遗传工程有助于防治病害〔会,英〕/Ward,K.A。…了Feedstuffs一2993,65(39)一14,16~17〔译自DBA,1993,12(22),93一12904〕 讨论了遗传工程技术在防治家畜疾病中的潜在价值。提出了遗传工程改良动物产率所需的步骤: (1)鉴定出获得理想表型所需特性的蛋白;(2)分离出编码相关蛋白的基因;(3)修饰基因在宿主动物中表达;(4)修饰基因转移到宿主;(5)鉴定和评估基因在转基因动物中的表达;(6)建立育种工程。澳大利亚的CSIRO应用这些原理:通过N宕eotia九a to哪e儿tos‘form‘5 JL丁质酶cDNA在转基因绵羊中的表达生产抗肉蝇绵羊,胧氨酸生… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(5)
921734太平洋维鱼催乳激素原在大肠杆菌中的克隆〔俄〕//Prokopenko,I.V。…了Mol.Biol.(Mos-eow)。一1991,25(3)一689~694〔译自DBA,1991,10(21),91一12145〕 克隆T太平洋鱿鱼(ooeo,h鱿。eh:s无eta)催乳激素原cDNA,并测定了序列。应用催乳激素DNA探针从建立于大肠杆菌L87及l监菌体入gt10中的垂体 cDNA基因库中筛选出入gt Prk12。将此序yI]与蹲鱼习a乙饥0 ga而己几e子么及王鱿(0.名schaw-夕‘。“ha)作了比较,显示出显著的同源性。比较太 之洋鱿和王鱿时,在催乳素编码区内发现12个核普酸替代,其中3个导致氨基酸替代(Tyr一宁4、AsP… 相似文献
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水杨酸诱导湖北海棠全长cDNA文库的构建及应用 总被引：4，自引：0，他引：4
以'湖北海棠'为材料,经水杨酸处理后,用改良CTAB法提取总RNA,纯化后构建全长cDNA文库,并进行PGIP基因的克隆.结果表明:(1)提取的总RNA无降解,无污染;mRNA弥散带主要集中在500～2 000 bp左右,没有rRNA 残留.(2)ds cDNA弥散带主要分布于300～2 000 bp之间,PCR验证后片段大小分布于200～2 000 bp之间,说明合成ds cDNA质量较好,成功地构建了全长cDNA文库.(3)通过PCR从该cDNA文库中克隆了PGIP基因,命名为MhPGIP,GenBank登录号为FJ449708;其核苷酸序列及推导氨基酸序列与苹果的一致性分别为98%和97%,该序列含有两个串联的亮氨酸重复序列.综上所述,构建的全长cDNA文库质量很好,该文库的建成可以用于今后抗病新基因的挖掘、克隆和利用,为苹果抗病机理的研究奠定基础. 相似文献
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《生物技术通报》1992,(11)
924173电激导人番茄原生质体的黄瓜花叶病毒的复制足迹分析[英〕/Smith,C.R.…/Anal.Bioehem一1092,200(2)一310~314〔译自DBA,1902,11(8),92一04507〕 将黄瓜花叶病毒(CMV)株系WT RNA(带有相应的随体CARNAS)电激导入番茄活原生质体中。以不同的时间间隔,从样品中提取总核酸并通过半一变性PAGE进行分析。用序列专一性杂交探针检测病毒和随体RNA。产生的PAGE谱型或自动放射自显影显示,各时间收集的提取物中都含有一定比例的病毒和随体RNA,属于专性CMV/CARNAS种组合的“复制足迹谱型”(REP)。电激后6小时便可检测到基因组… 相似文献
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设计了一种能促进全长cDNA有效克隆的cDNA ClonStruct盒。完整盒包括载体引物、所有必需酶及试剂,从而构建五个cDNA库。单个库构建需要10～20μg poly A~+ RNA。大型的、具有高度代表性的cDNA库构建方法是: 用一改良载体作首链合成引物。通过末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)加入C尾部序列以修饰载体-cDNA:mRNA杂种分子的每一端。仔细校正反应条件使其正如参入5～20个残基的尾部序列。载体含 相似文献
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灰绿藜RNA提取方法及在cDNA文库构建中的应用 总被引：1，自引：1，他引：1
目的:为分离灰绿藜耐盐相关新基因,构建叶片cDNA文库,探索从盐生植物中提取高质量RNA的方法.方法:以灰绿藜叶片为材料,应用RNA Plant Reagent法(Tiangen)、Plant RNA purification Reagent法(Invitrogen)、UNIQ柱式总RNA试剂盒提取法(Sangon)、SDS-LiCl法、TRIZOL试剂法(Invitrogen)等进行总RNA的提取,并构建其全长cDNA文库和抑制消减文库.结果:RNAPlant-Reagent法、Plant RNA purification Reagent法和UNIQ柱式总RNA试剂盒提取法获得的RNA完整性均不好;SDS-LiCl法提取的RNA完整性好(28S条带亮度是18S的2倍、条带锐利清晰)、纯度高(A280/A260为1.89±0.03,A260/A230为2.23±0.02),适合用于直接反转录及构建全长cDNA文库,并获得成功;TRIZOL试剂法简单快捷,产率高(2724±82μg/g),完整性较好,可经mRNA纯化后用于抑制消减文库的构建并获得成功.结论:建立了用于构建高质量cDNA文库的灰绿藜RNA的制备方法. 相似文献
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《生物技术通报》1992,(3)
920814蟀传染的脑炎病毒cONA克隆片段的分子杂交〔英〕/Pogodina,V。V。…/Aeta Virol一1901,35(i)一71~80〔_译自DBA,1991,10 (15),91一08440〕 以重组D NA质粒做探针,在潜伏期、急病期和持续感染叙利亚仓鼠时检测脾传染的脑炎(TB-E)病毒RNA。通过克隆TBE病毒RNA(大于染色体RNA的50%)的非交叠的RNA拷贝构建探针。构建T质粒pBR一TBEVi、pBR一TBEV7、pBR-TBEVio和pBR一TBEVis,“ZP放射标记后用于dot一blot杂交。在感染后的最初三周内,脑中直接的病毒分离率和RNA检测率为100%,病毒滴度在1.9,至10.5.LDs0/口1范围内,… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(9)
923449重组体葡聚糖水解啤酒酵母菌株的构迷与分析〔英〕/Suihko,M.L.…了Appl.Mierobiol一B 1 oteehnol一1991,35(6)一751~757〔译自DBA,1992,11(5),92一02748〕 构建了4种不同类型的具纤维素酶活性底面发酵酿酒酵母(Saecha,o仍鲜ees ee:e‘s￡ae),方法为利用共转化和基因置换,使里氏木霉(T八-“hoder,a俨eese￡)vTT一D一50133的纤维素酶egll基因整合到酿酒酵母VTT一A一63015(A15)的PGKI或ADHI位点。用质粒pMA91和质粒pAAHS构建分别在PGKI和ADHI启动子和终止子之间携带egn基因的质粒pMN20和质粒pMN200。构建的单拷贝整合… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(2)
JJ,‘翻920422大片段定位缺失:缝合环聚合酶链反应〔英〕/5 ong,C.…/B ioteeh Forum Enr一1991,s(s)一130一132仁译自DBA,2991,10(12),91-06633〕 用缝合环聚合酶链式反应(PCPCR)在载体中的噬菌体T7启动子与菊花矮小类病毒(CSV)的cDNA序列之间制造缺失,这样,不含外源序列的CSV RNA即可通过T7的离体转录来合成。新方法应用超螺旋质粒pBCSU172作为PCR扩增模板,产生不含要删除区的线性DNA分子。采用与线性分子两端相配对的第三寡核昔酸来制备缝合环状DNA,并用于大肠、杆菌JM109的直接转化。用该法合成了与天然CSV序列一样… 相似文献
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《生物技术通报》1992,(11)
924009异源基因在牛分枝杆菌BCG中的表达:抗HIV一1Nef蛋白细饱反应的诱导〔英〕/Winter,N.…了Geue一1991,109(i)一47~54〔译自DBA,1992,11(8),92一04359〕 为了用牛分枝杆菌菌株BCG作保护性抗原载体,将编码Nef蛋白的H工V一病毒一1基因克隆于大肠杆菌一分枝杆菌穿梭载体(质粒pRR3)几中并导人BCG。质粒pRR3含一个在分枝杆菌中复制和保留必需的质粒pALSOo。片段、转座子Tn 903卡那霉素抗性基因和大肠杆菌复制原。n“f_基因在含白色链霉菌(St,epto哪歹ees albos)groES/groELi操纵子的启动子和合成核糖体结合位点的DNA表达框架(… 相似文献