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用~(32)P和生物素标记的克隆化的人巨细胞病毒(HCMV)AD169株DNA片段作探针,采用DNA-DNA斑点杂交法,对照检测了27例婴儿肝炎综合症患者(血清学检测为非甲非乙型肝炎者)临床血、尿标本的HCMV-DNA。其中16份血标本呈阳性,占59%;9份尿标本呈阳性,占33%。初步结果表明,血标本中HCMV DNA检出率比尿标本检出率高26%。标记的~(32)P探针可检测10pg同源DNA,生物素探针可检测50Pg同源DNA,均不与其它疱疹病毒及未感染的人胚肺细胞DNA杂交。将其中26份血标本的HCMV DNA杂交结果与抗HCMV IgM ELISA检测结果相比较,符合率为65%。 相似文献
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本实验采用一种非放射性物质——碱性磷酸酶标记乙肝病毒HBV DNA制备分子探针。碱性磷酸酶在苯醌作用下与单链DNA联结,形成DNA和酶的共价复合物,即酶标探针。此探针通过分子杂交与待测DNA结合,与酶的底物作用显色,几小时内可观察结果,其最低检测量约为10pg。用此探针检测乙肝病人血清中的HBV DNA,与~(32)P标记的探针比较,酶标探针可检测出~(32)P标记探针检出率的95.7%。结果表明,所合成的酶标探针具有准确、简便、快速、安全而经济的优点,具有应用前景。 相似文献
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本文报道用非标记的克隆 EBV DNA 限制性酶解片段作标准,同时以标记的克隆片段R 作探针,经 DNA 点杂交检测每个 H_(18)细胞中 EBV 基因组拷贝数。由于实验中结合用 W 片段作标准 DNA 和探针,测定每个 Raji 细胞中所具有稳定的 EBV 基因组拷贝数,以及每个 Raji 细胞中 EBV 基因组的重复序列 W 片段数均与前人报告的结果基本一致,所以说明了本文所用方法及结果的可靠性。此项技术可在病毒阳性细胞培养物中定量测定病毒核酸,也可用于临床分子病毒学作为常规的核酸杂交技术。 相似文献
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本研究用克隆的HCMV AD169株DNA片段,制备了生物素标记的DNA探针,建立了检测临床脐带血、尿标本中HCMV DNA的核酸探针杂交方法。该探针可测出100pg同源DNA,不与人胚肺细胞、Hep-2细胞DNA以及其他疱疹病毒的DNA发生反应。用核酸杂交方法检测了30份脐带血标本,有11例阳性,阳性率为33%。10例孕妇尿标本中,3例阳性,阳性率为30%。检测结果表明:我们建立的生物素标记的HCMV DNA探针的点杂交法,具有高度的特异性、敏感性,比分离病毒法更迅速,可用于HCMV感染的临床标本的病毒核酸检测。 相似文献
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采用碱性磷酸酶标记DNA制备分子探针, 并首次在植物中应用。酶在苯醌作用下与单链DNA联结, 形成DNA和酶的共价复合物即酶标探针。此探针通过分子杂交与待测DNA结合, 再与酶的底物作用显色, 3~6h 内可观察结果。用此探针检测转基因植物中的UidA基因, 点杂交和Southern杂交结果表明, 所合成的酶标探针具有快速、准确、安全而经济的优点。点杂交证明外源UidA基因被成功转化到受体植物中, Southern 杂交对转基因的材料检测的结果证明, 该材料包含多个外源UidA基因拷贝, 初步确定其外源UidA基因拷贝数在5个以上。 相似文献
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本文报道以油桐尺蠖核型多角体病毒(BsNPV)DNA、单纯疤疹病毒(HSV)DNA、λDNA为材料,用国产~(125)I-碘化钠制备探针。探讨了离子强度,pH值、反应温度及时间诸因素对以三氯化铊为氧化剂核酸标记的影响。在pH值为4.8—4.9,离子强度(以Na~ 计)为0.1mol/L、反应温度为70℃、时间为30分钟条件下,可获得高比活性的产物。~(125)I的掺入率在10—30%之间,探针的比活性可超过10~6cpm/μgDNA。点杂交结果显示,探针最低可检测出1Pg同源DNA,探针的特异性强,存放于-20%冰箱的探针在两个月内最低检测量没有明显变化。 相似文献
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<正> 近年已能对乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)进行测定。作者用~(125)Ⅰ标记的HBV-DNA探针,检测HBV的DNA聚合酶,并同32P标记法所测结果进行比较,探讨~(125)Ⅰ标记法的准确性,现报告如下: 对象和方法:HBV健康携带者8例,慢性肝炎89例,肝硬变11例,肝癌2例共计110例作为受检对象。所有患者HBsAg均阳性,HBeAg阳性83例,抗HBe抗体阳性17例。 HBy-DNA测定步骤是首先使DNA2条链中的1条变性,然后加入~(125)Ⅰ标记HBV-DNA,使其和血清中的1条DNA链杂交。反应液进行柱层析后,将洗出液用r-计数器检测并定量。 结果:HBV-DNA量和HBV-DNA 相似文献
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《生物技术通报》2017,(4)
为了建立烟草花叶病毒辽宁分离物(TMV-LN)的高特异性、高灵敏度的分子杂交检测体系,从粗提纯的TMV-LN粒子中提取RNA,设计特异性引物通过RT-PCR扩增TMV-LN的CP和3'端非翻译区域,将片段连至p UC119载体获得重组质粒p UCTMV-PP,体外转录获得地高辛(DIG)标记的TMV-LN正义链RNA杂交检测探针,同时构建DNA检测探针作为对照。采用点印迹(Dot-blot)杂交和Northern杂交对比RNA探针和DNA探针对TMV-LN的检测特异性和灵敏性。检测结果表明,RNA探针和DNA探针在点印记杂交和Northern杂交中均表现出良好的检测特异性,RNA探针在检测灵敏度方面要略好于DNA探针,且点印迹杂交体系在病毒定性方面较为快捷,Northern杂交体系在病毒基因组RNA的定量方面具有明显优势。 相似文献
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异羟基洋地黄毒甙元(Digoxigenin)标记的探针在乙型肝炎病毒核酸杂交中的应用 总被引:1,自引:0,他引:1
应用异羟基洋地黄毒甙元标记的探针,检测了人和鸭的血清及肝脏中的乙型肝炎病毒核酸,并与~(32)P标记的同位素探针做了比较。结果证明,该探针的特异性和敏感性与同位素探针一致(0.2pg)。它可用于各种核酸杂交试验,如打点杂交、Southern和Northern转印杂交试验等。恰当地从标本中提取待测核酸,是应用该探针的重要条件。 相似文献
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我们提取纯化了芹菜,菠菜和蕃茄叶绿体核糖体4.5SRNA(4.5SrRNA)并在其5’端标记~(32)P,作为探针与菠菜,蕃茄和芹菜叶绿体DNA(ctDNA)进行分子杂交。结果不仅证明4.5SrRNA可作为公用分子杂交探针,而且也说明不同植物4.5SrRNA序列有相当大的同源性。 相似文献
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对29例肝炎,1例尸检肝组织和血清中乙型肝炎病毒的DNA(HBV DNA)进行了研究,发现HBsAg( )/HBeAg( )患者中,有9/17(52.94%)血清HBV DNA阳性;HBsAg( )/抗-HBe( )患者中,2/6(33.33%)也为阳性。从30例肝组织中提取DNA经琼脂糖电泳,Southern吸印转移及分子杂交试验结果表明,27例HBV DNA阳性,全部有游离型HBV DNA。27例中有5例经用标记pBR322探针杂交排除非特异杂交带后,在高分子量区有HBV DNA特异的杂交带,提示有HBV DNA整合。 相似文献
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斑点杂交生物素法检测流行性出血热病毒RNA 总被引:1,自引:0,他引:1
为寻找一种用于检测流行性出血热病毒的分子杂交方法,以生物素-7-dATP标记流行性出血热病毒(EHFV)R_(22)株M片段的cDNAR_3克隆作探针,与人源性的EHFVH-114、H-435株RNA基因组进行斑点杂交,得到阳性结果,可检出5pg的cDNA或RNA。此探针与疱疹病毒DNA不出现杂交信号。以上结果说明这种标记探针具有EHFV特异性,可以扩大应用范围,结果还表明动物源性和人源性EHFV均具有共同的保守核苷酸序列。 相似文献
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《微生物学免疫学进展》2016,(2)
目的对地高辛标记DNA探针杂交法检测人用狂犬病疫苗(Vero细胞)DNA残留量进行适用性验证及应用。方法对地高辛标记DNA探针杂交法检测人用狂犬病疫苗(Vero细胞)DNA残留量进行特异性、灵敏度及稳定性验证,并应用该方法检测3批人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的DNA残留量。结果地高辛标记探针的标记效率为0.1 pg。验证结果显示探针与非同源DNA无杂交;最低检测限度为1 pg;探针在-20℃放置7个月后,检测灵敏度仍可达到1 pg;3批人用狂犬病疫苗(Vero细胞)中残留DNA含量均符合《中国药典》规定质量控制标准。结论地高辛标记DNA探针杂交法特异性、灵敏度好,结果稳定,适用于人用狂犬病疫苗(Vero细胞)中Vero细胞DNA残留量的检测及疫苗生产过程和其成品的质量控制,对其他以Vero细胞为基质的病毒性疫苗质量控制具有借鉴意义。 相似文献
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提取纯化了油菜叶绿体核糖体4.5S RNA(4.5S rRNA)并在其5’端标记 32P,作为探针与高梁叶绿体DNA(ctDNA)进行分子杂交。结果证明油菜4.5Sr RNA可作为公用探针,对一般植物,特别是高等植物进行分子杂交研究。杂交的结果得到两条带。 相似文献
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以Bio-ll-dUTP替代dTTP经二步法缺口平移标记DNA片段制得生物素DX_(13)探针。其碱性磷酸酶ABC体系显色灵敏度为100fg(约5×10~(-18)mol);与5μg染色体DNA进行Southern印迹杂交,可得清晰的单拷贝杂交区带。以此探针对一血友病家系做RFLP分析,确定两成员为甲型血友病基因携带者。与32P探针对比,两种探针的杂交和分析结果完全一致。表明高标记的生物素探针可应用于单拷贝基因分析和基因诊断。 相似文献