猕猴桃种间及种内杂交亲和性研究

以3个种的9个猕猴桃品种为试材,通过培养法比较它们的花粉活力,用荧光显微镜观察猕猴桃种间与种内杂交亲和性,并统计其亲和指数及坐果率,为猕猴桃的杂交育种以及最佳授粉树的选配提供依据.结果表明:猕猴桃花粉活力在种间表现为美味猕猴桃＞中华猕猴桃＞狗枣猕猴桃;中华猕猴桃和美味猕猴桃种间和种内杂交组合的柱头识别反应快,花粉在柱头粘附多、生长快且萌发率高、亲和性较强且坐果率较高,而用狗枣猕猴桃与中华猕猴桃和美味猕猴桃种间杂交的花粉在柱头上萌发生长发育缓慢,其亲和性弱,平均坐果率仅为19.81%;30个杂交组合中亲和指数最高的是'金阳'×'金阳'雄株,亲和指数为960.33,坐果率为95.56%,最低的是'狗枣'×'金阳'雄株,亲和指数201.60,坐果率为12.22%.研究发现,猕猴桃的种间亲和性小于种内亲和性,同种内不同品种间的亲和性与坐果率也不同.     

猕猴桃种间杂交结果初报

目前,国内外栽培的猕猴桃品种均为系统选育而成。采用种间杂交育种,可获得比系统选育更为理想的新型栽培品种。开展猕猴桃远缘杂交研究己见报道的国外有新西兰,国内有郑州果树研究所、北京植物园等,但至今未见有开花结果的资料报道。为了     

几种同域分布姜花属植物的种间杂交亲和性

种间配子不亲和以及种间杂交种子活力低是众多的物种间杂交隔离机制中的两个方面。通过对云南澜沧地区分布的4种（型）姜花属植物——圆瓣姜花（Hedychium forrestii）、草果药(Hspicatum)、两类型滇姜花（Hyunnanense）间进行野外杂交试验,比较杂交结实率、每果种子数以及杂交种子的萌发参数等指标来分析4种（型）姜花之间的杂交亲和性和杂交后代表现,发现4种（型）姜花属植物配子间都具有不同程度的亲和性,但种间杂交种子的萌发适合度比同种授粉获得的种子低。结果表明,这4种（型）姜花属植物间配子亲和性不是有效的种间隔离机制,种间杂交种子活力低是一种不完全的隔离机制,它们在同域分布的地区,仍然有形成杂交后代的可能性。     

几种同域分布姜花属植物的种间杂交亲和性及杂交后代种子活力

种间配子不亲和以及种间杂交种子活力低是众多的物种间杂交隔离机制中的两个方面。通过对云南澜沧地区分布的4种（型）姜花属植物——圆瓣姜花（Hedychium forrestii）、草果药（H.spicatum）、两类型滇姜花（H.yunnanense）间进行野外杂交试验,比较杂交结实率、每果种子数以及杂交种子的萌发参数等指标来分析4种（型）姜花之间的杂交亲和性和杂交后代表现,发现4种（型）姜花属植物配子间都具有不同程度的亲和性,但种间杂交种子的萌发适合度比同种授粉获得的种子低。结果表明,这4种（型）姜花属植物间配子亲和性不是有效的种间隔离机制,种间杂交种子活力低是一种不完全的隔离机制,它们在同域分布的地区,仍然有形成杂交后代的可能性。     

棉属栽培种与野生种杂交的不亲和性

本文研究了棉属栽培种与野生种杂交的不亲和性,试验材料涉及5个染色体组,包括2个栽培种(陆地棉和中棉)和5个野生种(戴维逊氏棉、瑟伯氏棉、三裂棉、阿拉伯棉和比克氏棉)。以陆地棉作母本,异己花粉管在花柱中生长缓慢,有花粉管胚珠低于10%,陆地棉×戴维逊氏棉杂种胚在子叶期坏死。以中棉作母本,不亲和性主要表现在受精后的胚胎发育过程中。     

三种甘草属植物的种间杂交亲和性及杂交种子活力

通过新疆分布的3种甘草属植物——乌拉尔甘草（Glycyrrhiza uralensis）、光果甘草（G．glabra）和黄甘草（G．eurycarpa）的人工杂交试验,比较了杂交结果率、杂交种子的萌发参数、幼苗成活率等指标,并对杂交授粉后花粉管萌发、生长过程进行荧光观察,旨在探讨3种甘草属植物的种间杂交亲和性及杂交后代种子活力。结果表明：（1）种间杂交结果率最高为96．67％,最低为55．62％,说明3种甘草种间杂交配子亲和性较高;（2）荧光显微观察表明,各杂交组合在授粉后0．5～2h内花粉均可在柱头上大量萌发,在授粉后48h内花粉管均可到达子房与胚珠受精,说明三种甘草种间杂交不存在配子隔离障碍;（3）杂交种子萌发率、发芽指数、平均萌发时间和幼苗成活率与自然结实种子无显著差异,种间杂交种子活力较高,幼苗成活率均为75％以上。以上结果表明3种甘草属植物的同域分布区,在相同传粉途径下,这三种甘草属植物的种间隔离机制不完善。有发生自然杂交并形成杂交区的可能。     

美味猕猴桃和软枣猕猴桃种间杂交花粉管行为和早期胚胎发生的观察

美味猕猴桃（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ｄｅｌｉｃｉｏｓａ Ｎｏ．２６）和软枣猕猴桃（Ａ． ａｒｇｕｔａ）杂交,观察了花粉管在花柱内的行为和早期胚胎发生,结果如下： 花粉粒在柱头的乳突细胞表面萌发,在开放型的Ｖ 形花柱道内生长,生长速度比对照的缓慢, 到达胚珠珠孔处的时间延迟５０ 到６０ ｈ。当花粉管生长到花柱基部时出现波纹状弯曲;顶端膨大或尖细;部分花粉管的直径发生变化;少数花粉管生长极不规则。花粉管中胼胝质沿管壁不规则沉积, 有的不形成胼胝质塞,或整个管壁被胼胝质所覆盖。约有２６．７４％ 的胚珠受精, 并发育成种子,其中正常种子占６８．５０％ ;败育种子占３１．５０％ ,其中约有１１．４１％ 为空瘪种子;未受精胚珠占６１．４５％ 。正常种子及其胚均较对照的小。胚发育为茄型,胚乳为细胞型,合子保持休眠十几天后开始分裂形成胚,传粉后５０ｄ 见到子叶胚     

烟草种间杂交亲和性

以野生烟草Nicotiana alata、N.rustica、N.repanda、N.stocktonnii与栽培烟草K326、红花大金元、Yun87、Yun97为材料,进行种间正反杂交,研究种间杂交亲和性.田间观察杂交后的坐果情况并统计坐果率,采用显微荧光染色观察授粉后花粉管在雌蕊上的生长情况,并结合杂交后代萌发检测的方法.结果表明:N.rustica、N.repanda、N.stocktonnii与栽培烟草杂交不亲和.N.rustica花粉能够穿过K326花柱,N.repanda和N.stocktonnii花粉在K326柱头上很少萌发生长.N.alata花粉可以穿过K326的花柱,并得到果实,但是萌发实验显示其种子无活力.N.alata作为母本与栽培烟草杂交不亲和.     

Embryology and Embryo Rescue of an Interspecific Cross Between Actinidia deliciosa cv. Haywardand A. eriantha

The study deals with an investigation of embryo and endosperm development in seeds of interspecific hybridization betwwn Actinidia deliciosa cv. Hayward (6X) and A. eriantha (2X) and an attempt to hybrid embryo rescure. The average seed number per fruit of hybrid com suitable culture media for in vitro embryo growth and subsequent growth of the seedlings are tested for hybrid embryos from normal and abortive seeds. The highest percentage of seed germination and the best growth of early seedlings are obtained op. MS medium supplemented with 0.5 ppm of IAA and 0.5 ppm of GA3; MS supplemented with 2 ppm of 2ip, 0.5 ppm of IAA and 0.5 ppm of GA3; MS supplemented with of 2ip and 0.5 ppm of GA3. When these embryos, as seedlings, were transferred onto MS supplemented with 0.5 ppm of GA3 and then MS without growth regulators, they readily develop into seedlings with normal leaves and roots, A lot of adventitious buds produced from hypocotyl of some normal and abortive embryos on MS supplemented with 2 ppm of BAP and Ms+ 0.5 ppm IAA+0.5 ppm GA3 further grow into hybrid plantlets. Although various percentage of embryos developed from abortive seeds also germinate, but when inoculated onto media as mentioned in Table l, a number of malformed seedlings form subsequently. The remaining embryos on all the media, however, show limited growth, and eventually either form callus or die. The nature of hybrid seedling is confirmed by cytological test. Half of them showed chromosome number as 4X=116 approx., the rest may have 19, 27, 30, 46, 120, 131, ect. In conclusion, according to embryological and cytological observation on hybrid seeds and seedlings: (I) the cross between Actinidia deliciosa cv. Hayward and A. eriantha appears interspecific incompatibility and compatibility to some extent, (2) normal hybrid seedlings are produced by normal hybrid embryos from normal seeds and abnormal embryos from abortive seeds, and (3) both may induce initiation of adventitious buds from hypocotyl. We suggested that these results may be useful for plant breeding program.     

In situ hybridization in Actinidia using repeat DNA and genomic probes

 In situ hybridization has been used to probe chromosome spreads of hexaploid Actinidia deliciosa (kiwifruit; 2n=6x=174) and tetraploid A. chinensis (2n=4x=116). When a species-specific repeat sequence, pKIWI516, was used, six hybridization sites were observed in some accessions of tetraploid A. chinensis and all of A. deliciosa. Southern analysis with the pKIWI516 probe revealed that there are two types of tetraploid A. chinensis. Genomic probes from diploid A. chinensis (2n=2x=58) did not differentiate the genomes of hexaploid A. deliciosa and tetraploid A. chinensis, irrespective of the presence or absence of blocking DNA. The results indicate that the genomes of polyploid Actinidia species are similar but not identical. The origin of A. deliciosa is discussed. Received: 29 June 1996 / Accepted: 5 July 1996     

改良CTAB法用于多年生植物组织基因组DNA的大量提取*

根据多年生植物组织富含多酚、多糖的具体特性,对现有的DNA提取方法进行了改进。通过增加提取缓冲液中b-巯基乙醇用量,简化氯仿/异戊醇抽提液步骤,改用经-20℃预冷异丙醇沉淀DNA等,对CTAB法加以改进。改进后方法具有以下优点：（1）获得的DNA质量良好,提取过程无明显的DNA降解,基本上排除了多酚物质的干扰;（2）用获得的DNA进行Southern杂交,可得到理想的杂交信号,可满足相关的分子研究要求;（3）操作简便。Abstract It is a difficult problem to isolate high quality DNA from plants containing a high contents of polyphenolics and polysaccharose, such as Actinidia plant. The protocol described in this paper is a modified CTAB (hexadecyltrimethylammonium bromide) method. High quality genomic DNA can be isolated from Actinidia plant using the improved method. The DNA is good enough for Southern blot and other uses in DNA research. The protocol is also efficient for quick and macro-DNA extraction.     

兰属植物种间杂交亲和性研究

以10个中国兰品种和8个大花蕙兰品种为材料开展了兰属植物间的杂交试验,比较不同组合的杂交亲和性。结果表明:(1)54个杂交组合,共授粉582朵,获得杂交果实131个,平均结实率为22.51%;中国兰与大花蕙兰正交结实率(23.19%)高于反交结实率(9.27%)。(2)墨兰与大花蕙兰无论正交或反交均可获得较高的结实率,其亲和性高于春兰、建兰与大花蕙兰杂交的亲和性。(3)中国兰种间杂交亲和性较高,3类组合结实率均大于30%,但不同品种间杂交亲和性不一,春兰‘绿萼’,墨兰‘企黑’、‘白墨’,建兰‘金荷’,大花蕙兰‘黄金岁月’比较适宜做母本;春兰‘大富贵’,墨兰‘富贵’、‘白墨’,大花蕙兰‘月影’、‘日本绿’和‘黑珍珠’比较适宜做父本。     

猕猴桃属植物狗枣子的修订

作者将海棠猕猴桃Actinidia maloides H.L.Li,心叶海棠猕猴桃A.maloides H.L.Lif.cordata C.F.Liang合并于狗枣子(Actinidia kollmikta (Maxim. and Rupr.)Maxim.)中作为异名,同时对狗枣子及其近缘种软枣猕猴桃A.arguta (Side. and Zucc.)Planch.ex Miq,木天蓼A.polygama(Sieb. and Zucc.)Maxim.和四数猕猴桃A.arguta (Sieb. and Zucc.)Planch.ex Miq,木天蓼A.polygama(Sied.and Zucc.)Maxim.和四数猕猴桃A.tetramera Maxim.的形态学特征进行了辨析。     

基于ISSR标记的猕猴桃品种 遗传多样性分析及指纹图谱构建

采用ISSR标记对中华猕猴桃(Actinidia chinensis Planch.)、美味猕猴桃〔A.chinensis var.deliciosa(A.Chev.)A.Chev.〕、软枣猕猴桃〔A.arguta(Sieb.et Zucc.)Planch.ex Miq.〕和毛花猕猴桃(A.eriantha Benth.)的32个样本进行了遗传多样性分析,并以ISSR标记为基础构建了DNA指纹图谱.结果表明:筛选的10个多态性高且条带清晰的引物共扩增出200个条带(位点),其中,多态性位点195个,多态性位点百分率(PPL)达97.50%;各引物的多态性信息含量(PIC)以及供试样本的观测等位基因数(Na)、有效等位基因数(Ne)、Nei's基因多样性指数(H)和Shannon's多样性指数(I)的总均值分别为0.9080、1.9800、1.3569、0.2255和0.3613,4个猕猴桃种间的遗传分化系数(Gst)为0.4146,基因流(Nm)为0.7059,且32个样本间的Na、Ne、H和I值差异极显著(P<0.001).供试32个样本间的遗传相似系数(GS)为0.5650~0.9650,平均值为0.7164;基于GS值进行UPGMA聚类分析,在GS值为0.76处将32个样本分为4组,基本对应供试的4个猕猴桃种类,其中,第Ⅰ组的大多数样本属于美味猕猴桃品种,第Ⅱ组的样本均属于中华猕猴桃品种,第Ⅲ组的样本属于毛花猕猴桃品种,第Ⅳ组的样本均属于软枣猕猴桃品种.分子方差分析结果表明:4个猕猴桃的种间变异占总变异的40.84%,种内变异占总变异的59.16%.研究结果表明:供试的猕猴桃品种间遗传分化程度较高,基因交流频率较低,且总遗传变异的近60%存在于种内,说明供试的猕猴桃品种具有较丰富的遗传多样性.另外,根据10个ISSR引物的扩增结果,筛选出引物UBC818、UBC824、UBC854和UBC895扩增的15个多态性位点构建的DNA指纹图谱可用于供试32个猕猴桃样本的鉴定.     

猕猴桃属(Actinidia)植物的离体种质保存

本文研究了猕猴桃属植物离体种质资源保存的方法。在一年中于盛夏时采取的植物材料在离体培养时能得到最好的效果;改进的剥离茎尖的方法使污染率大大降低,在MS附加BA 0.5,Z 0.1,GA 0.1～0.5 mg/L,蔗糖3％,琼脂0.55％的培养基中茎尖生长良好并且不产生不定芽。通过茎尖培养方法已保存了10多个种,40多个猕猴桃的离体种质。     

猕猴桃AFLP分析体系的建立

从64对AFLP分析引物中随机选取了19对引物组合。经过跑小板的聚丙烯酰胺凝胶,银染显带AFLP条带,从中筛选出可做荧光的8对引物。再从中选取了扩增位点丰富,带型质量好,分辨率较高,条带信号强度一致性好,条带分布均匀,且条带较完整的4对引物：E-AAC＋M-CAC、E-AAG＋M-CTG、E-AAC＋M-CAG、EAAC＋M-CTA进行荧光跑带、读带。共在156个位点上扩增出条带,4对引物共扩增出多态性条带132条,多态性比例平均为84．62％,4对引物对10份猕猴桃材料的区分率达100％。说明该4对引物用于猕猴桃属植物的AFLP分析是可行的。