环境保护及农业废物利用

924252通过脱氮细菌纯培并物厌级降侧甲笨〔英〕/Soh。-eher,R.J.…j Areh.Mierobiol一1991,157(1)一7~12〔译自DBA,1992,11(s),92一04791〕 从各种芳香化合物中分离到几株脱氮的假单胞菌,并试验其在有分子氧时降解甲苯的能力。从苯乙酸(SP)、对一苯基苯乙酸(B‘P)以及苯丙氨酸(FF)中富集并分离的菌株不能够使甲苯无机化。从脱氮、降解甲苯的试验室蓄水柱中分离的假单胞菌(pse:‘o仍o.as)T菌株、从苯酚中富集分离的K170和5100菌株、从水杨酸中富集并分离的52菌株,在有N:O作为唯一电子供体时可降解甲苯。从苯环标记甲苯中50%以上的“…     

环境保护及农业废物利用

920789采用筛选出的土维中固有细菌增进土镶中烃类的降解〔英〕/Veeehioli,G.I.…2 Environ.Poll-ut一1500,67(s),249~255〔译自DBA,1991,10(12),91一07216〕 采用土壤中分解烃类化合物细菌的混合菌群可促进石油化学废料的生物降解。混合培养物是从土壤中分离出来的。通过将1克土壤加到补充有烃类的无机培养基中可以得到富集的培养物。对混合培养物进行了鉴定,系假单胞菌(尸8e“‘。,口“a约FN了了5一5、假单胞菌FN775一i以及产碱菌(AI-caz‘ge,e。)FN775一2。将芳香烃贮存堆底的残留物与土壤(10%w/w)进行混合。经1个月后,在未接种和…     

软腐白菜细菌群落结构多样性与生长环境的相关性

[目的]通过对比分析不同生境白菜软腐病变组织与根系土壤相关细菌的群落结构,探讨白菜软腐细菌种群的多样性,以及与生境土壤细菌种群的相关性.[方法]样品采自河南省2个不同生态型白菜田,以成熟白菜软腐组织及病株根系土壤为目标,利用模拟原环境的培养基成分和条件,对样品中的细菌进行高通量分离培养和细胞16S rRNA基因序列比对分析,获得各样品细菌种群结构及其丰度,进而对各样品的优势菌群进行对比分析.[结果]两种不同生境白菜软腐组织细菌总量M05T为4.0×l0s cell/g、Q2T为1.2×1011 cell/g,分别获得纯菌56株和85株.M05T优势菌为萎蔫短小杆菌萎蔫亚种(Curtobacterium flaccunfaciens pv.Flaccumfaciens);Q2T优势菌为假单胞菌(Pseudomonas spp.)(柄木槿假单胞菌(P.hibiscicola)、台湾假单胞菌(P.taiwanensis)、托木尔假单胞菌(P.tuomuerensis)、莫塞尔假单胞菌(P.mosselii)).根系土壤细菌总量M05S为2.7 × 105 cell/g、Q2S为6.2 × 107 cell/g,分别获得纯菌36株和70株.M05S优势菌为巨大芽胞杆菌(Bacillus megatherium);Q2S优势菌为假单胞菌(Pseudomonas spp.)(香鱼假单胞菌(P.plecoglossicida)、栖木槿假单胞菌(P.hibiscicola)、类黄色假单胞菌(P.parafulva)、蒙氏假单胞菌(P.monteilii)、膝形假单胞菌(P.geniculata)).[结论]依据不同生境的白菜软腐组织和根系土壤细菌群落结构对比分析,认为白菜软腐菌可能具有多样性和多种致病来源,本研究为软腐病多种防治措施的制定提供基础研究和菌种资源.     

基因诱变、重组、克隆

921649影响细菌从叶面吸移的因素〔会,英〕/Waltor,M。…了Abstr.Gen.Meet.Am.Soe.Mi-erobiol一1991,91 Meet一251〔译自DBA,1991,10(21),91一12047〕 向接种丁香假单胞菌的大豆和燕麦田输送4m/sec的气流,可引起细菌从叶际飘流。采用全玻璃冲击器和安德森空气取样器收集三米以内的飘流菌。研究了植物种类、接种时间以及存活计数丢失量的影响。从大豆飘移的铜绿假单胞菌比燕麦多79%。施用两小时后,丁香假单胞菌的数量为3.14109 efu/m“,而接种i天后降至1.75109 efu/m“,5天后为1.77109 cfu/m“。比较了营养细胞与枯草杆菌抱子的飘流效应…     

农业其它

880318促进出土的根际细菌〔专,英〕/K-loeppe,,,J .W.…了PCT patent Appl.WO 8700194。Pub.25 .01 .57。Appl.CA廷86217,filed 02。07 .85〔译自CBA,]987,(4),l了67〕 新的psyehotrophie根际细菌能用于促进农作物,尤其是在寒冷气候开始播种地区的出土。这样的菌标包括一种沙雷氏菌(Ser-rat‘a liguefaeiens)、恶臭假单胞菌(P:eud-。m。朋:夕utida)、荧尤假单胞菌(尸.fl如-reseen:)、产气肠杆菌(Enterobaerer aer-ogenes)以及印度[l十林克氏菌(Be‘jerinck-f a indiea)(杜允)880319通过黑蛋巢菌属、侧耳属和侧抱霉属使稻草富集灰分…     

一株烟酸羟基化转化菌株的筛选和鉴定

从南京地区的土壤中筛选到一株高效转化烟酸为 6_羟基烟酸的菌株NA_1。形态及生理生化特征测定结果表明 ,NA_1菌株与假单胞菌属 (Pseudomonas)中的恶臭假单胞菌 (P .putida)种的特征基本一致。测定了该菌株的16SrDNA序列并根据 16SrDNA构建了系统发育树 ;在系统发育树中 ,NA_1菌株与恶臭假单胞菌形成一个类群 ,序列同源性为 99%。因此将NA_1菌株鉴定为恶臭假单胞菌     

基因标记、转化、表达与检测

920889在发醉杂件下乳抽对tac启动子的诱导〔英刀Neu-bauer,P.…j Aeta Bioteehnol一1091,11(一)一23~2。〔译自DBA,i,。i,10(15),91-08级38〕 发展了一种用乳糖代替昂贵的TPTG诱导tac启动子的表达系统。采用大肠杆菌JC53的R100质粒协助质粒诱动,用平板结合法将大肠杆菌JM109的F,质粒(Lelq、pro AB)转入受体菌NK5525(lae‘、pro)。得到的原养型CW3oll超量表达lae阻遏物基因,并以乳糖为能源和碳源生长。质粒pOFI.o转化的菌株CW3oll含控制lae操纵子(I-acZ和lacy)片段的 tac启动子和氨节青霉素抗性基因。摇瓶和发酵罐实验结果表明…     

基因标记、转化、表达与检测

921682木枪发醉菌树千毕赤醉母的遗传转化〔会,英〕/H。,N .W.Y.…了APpl。Bioehem.Bioteeh-nol一1991,25~29一369一s7e〔译自DBA,1901,10(21),91一12053」 发展了适用于树干毕赤酵母(尸￡。矶。。“娜t-￡。)CBS7126的质粒转化系统。将含有酿酒酵母2一声m复制源和卡那霉素抗性标记的质粒载体(如pUCKms,7.57kb)引导到酵母细胞中,并以染色体外因子的方式稳定遗传。含此载体的转化子能抗G418。从转化子中回收到相同的质粒,拷贝数很高。另外,在相同条件下,大肠杆菌一产阮假丝酵母(Ca:d玄da”‘感l玄s)穿梭载体pLCii(含有该假丝酵母的…     

生物防治因子

8了2222抗噬菌体并促进植物生长的根细菌〔专,英〕/Suslow,T.V.泌US Patent US4584274.Pub.22.04.86.Appl.US 465082,f iled 09.02.53〔译自CBA,1956,(s),3183〕 本专利报道了恶臭假单胞菌(尸se“do-。:onas力“t‘da)的菌株SHS PR3(ATCC39270)。(杜允)872223向大田甜菜蚜虫群体引人的一种真菌:接种体的类型及灌溉的效果〔英]/ Wil-ding,N.…了Ann.Appl。Biol.Apr一1986,105(2)一373一385〔译自CBA,1986, (8),3185〕 研究了用真菌Erynia neoaPhidis对春播蚕豆田的甜菜蚜虫群体进行处理的效果。于1979年6月21日施用真菌,它们和…     

CAT为报告基因的铜绿假单胞菌启动子文库的建立及初步鉴定

以CAT(chloramphenicol acetyltransferase,CAT)为报告基因,构建p CAT2启动子探针载体从绿脓杆菌基因文库中筛选启动子。Sau3AⅠ酶切铜绿假单胞菌的基因组,回收(500~1 500 bp)片段并与p CAT2载体连接构建铜绿假单胞菌的基因组文库,PCR鉴定文库的多样性,利用氯霉素(10μg/m L)和卡那霉素(50μg/m L)双抗平板筛选了16株阳性菌株,并用PCR、测序、NCBI比对进行鉴定。构建的基因文库的库容量可达50 000个,覆盖基因全长的3.5倍,插入率达90%,具有较强的随机性。采用双抗平板进行启动子的筛选,筛选效率高达96%。获得了绿脓杆菌基因组中的9个启动子,同源性达99%以上,并对其活性进行初步鉴定,为铜绿假单胞菌基因表达调控的进一步研究奠定基础。     

MvaT调控铜绿假单胞菌吩嗪的合成机制

【背景】属于H-NS家族的MvaT转录因子参与了铜绿假单胞菌的许多重要代谢过程,如吩嗪合成代谢,但其调控方式仍不十分明确。【目的】确定转录调控因子MvaT是否直接调控铜绿假单胞菌的吩嗪合成过程,即该蛋白是否可以直接结合2个吩嗪-1-羧酸合成基因簇(phzA1G1和phzA2G2)与3个分支转化基因(phzH、phzS和phzM)的上游启动子区域。【方法】以铜绿假单胞菌SJTD-1和其mvaT基因敲除突变株SJTD-1(ΔmvaT)为研究对象,检测其在不同培养基条件下吩嗪化合物的合成量差异。通过体外异源表达与亲和纯化,获得重组蛋白MvaT。利用凝胶阻滞实验,确定MvaT重组蛋白对5个吩嗪代谢基因簇/基因上游启动子的结合情况。【结果】mvaT基因敲除突变株SJTD-1(ΔmvaT)的吩嗪产量较野生型显著提升。MvaT重组蛋白被有效表达与纯化,体外凝胶阻滞实验结果显示,该重组蛋白可与phzA1G1、phzA2G2、phzM、phzS和phzH的上游启动子区域均发生特异性结合。其中,重组蛋白MvaT与phzA1G1和phzA2G2的结合区域位于其上游启动子的200 bp以内,而该蛋白与phzM、phzS和phzH的结合区域则位于其上游启动子的100 bp以内。【结论】MvaT蛋白通过直接结合吩嗪合成代谢基因的上游启动子区域来直接调控假单胞菌的吩嗪类化合物合成。     

生物防治因子

831266用一种限定培养基生产具有冻核形成活性的细菌〔专,英〕/Lynn,5.Y.…/European Patent Appl.EP 0272669.Pub.29,06.55.入ppl.US 944120,f于-肠d咒.12,吕位仁译白七压、.工州;:“‘、4 089] 介绍了具有冰核形成活性的微生物门丁香假单胞菌(尸:。d。二。二:、、脚坛,‘、“夕)、抢光假单胞菌(j,.fl。。r。:二二)、·“大川胜价胞l翁(尸。eoronajaeiens)、/’.了、公:‘反,”一,遭欧文氏菌(Er田艺瓜ah郡bicola)。采用的培养墓包括葡萄糖(作为碳源)以及“一弋汉代)_戈二酸或能形成氧代戊二酸的氨感暇(仁为氮源)气.具体配制时,还可含…     

荧光假单胞菌M18 rpoD克隆及其对抗生素合成的影响

荧光假单胞菌M18对多种植物病原真菌具有显著的抑制作用。荧光假单胞菌(Pseuclomones fluo-rescens)M18能同时合成吩嗪-1-羧酸(PCA)和藤黄绿菌素(P1t)两种抗生素。从M18的基因组中克隆了rpoD基因,其相应的氨基酸序列与荧光假单胞菌CHAO中RpoD蛋白的氨基酸序列完全相同。利用基因重组技术和大肠杆菌-荧光假单胞菌穿梭质粒,pME6032,将rpoD置于强启动子Ptac的控制下,导入M18菌株。发现经重组质粒转化的M18,与对照相比,培养基中PCA和Plt开始累积的时间分别提前4h和8h,积累量提高1倍和6倍.     

假单胞菌M18株pltZ基因转录阻抑藤黄绿菌素ABC转运系统

假单胞菌(Pseudomonassp .)M18株的藤黄绿菌素(Pyoluteorin ,Plt )生物合成基因簇下游存在一个Plt生物合成负调控基因pltZ和一个负责Plt分泌及自身抗性的ABC(ATP_bindingcassette)转运系统基因簇。利用启动子探针载体pME6 0 15和pME6 5 2 2分别构建ABC转运基因pltH与lacZ的翻译和转录融合表达质粒pHZLF和pHZCF ,分别引入野生型假单胞菌M18株和pltZ突变菌株M18Z。半乳糖苷酶活性的测定结果表明:在pltZ突变株M18Z中,pltH’-‘lacZ翻译融合表达水平约比野生型提高3 7～8 4倍,pltH’‘lacZ转录融合表达水平显著提高了2 8～7 4倍,表明pltZ能在转录水平上阻抑PltABC转运系统的表达,pltZ很可能通过阻抑PltABC转运系统的表达,间接地负调控Plt的生物合成     

农药

862738降解对硫磷(一六O五)的缺陷假单胞菌质粒的大小及其酶切物理图谱〔英〕/MeDaniel,C.S.…了Abstr.Annu.Meet。Am.Soe。Mierobiol一1985,85,Meet。一12〔译自DBA,2985,4(9),85一04457」缺陷假单胞菌质粒pCS_1可用限制性内切酶酶解降解农药。该质粒编码催化降解一六O五的磷酸醋酶。     

荧光假单胞菌M18的rpoS基因克隆及其功能分析

从荧光假单胞菌 (Pseudomonasfluorescentsp .)M1 8基因组中克隆了RNA聚合酶的稳定期σs 因子编码基因rpoS ,推测其氨基酸序列与铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌和恶臭假单胞菌的同源性分别为 99 1 %、87 35 %和87 8%。利用体外定点插入突变和同源重组技术 ,构建了M1 8的rpoS突变株M1 8R- 。对突变株M1 8R- 合成抗生素吩嗪 1 羧酸 (PCA)和藤黄绿菌素 (Plt)的动力学分析结果表明 ,在KB或PPM培养基中 ,突变株合成PCA的能力比野生型分别提高了 2 5或 5 78倍 ,但Plt的积累量不受影响。与野生型相比 ,突变株对碳源饥饿的耐性下降。同时 ,在碳源饥饿条件下对过氧化氢、乙醇和和氯化钠等环境胁迫的交叉保护性减小 ,存活率显著降低     

不同动物肠道优势需氧菌对黄豆苷原转化菌株转化能力的影响

摘要: 【目的】探讨不同动物肠道优势需氧菌对黄豆苷原转化菌株转化能力的影响。【方法】有氧条件下,采用稀释涂布法分别从ICR 小鼠、芦花鸡、长白猪和獭兔等4 种健康动物肠道中分离优势需氧菌,将不同动物的优势需氧菌分别与不同类型黄豆苷原转化菌株进行厌氧混合培养,高效液相色谱检测培养液中黄豆苷原的转化情况。【结果】16S rRNA 基因序列分析,结合形态学及相关理化特性分析表明,分离的22 株优势需氧菌分属埃希氏菌属(10 株) 、变形菌属(5 株) 、肠球菌属(4 株) 、芽胞杆菌属(2 株) 和假单胞菌属(     

基因诱变、重组、克隆

922055芸苔埋核盘菌的转化及利用基因库进行突变体互朴仁英」/Ball,A.M.…了E叉p。M了eol一i,,i,15(3)一243~254〔译自DBA,1991,10(23),91一13320〕 对植物病原菌芸苔埋核盘菌(p夕r。”。夕‘“za西,。。s‘。a。)JH26和NHlo进行原生质体转化,构建了突变体并用基因库来互补。在有抓化钙和PEG的条件下用3种质粒(编码潮霉素抗性的质粒pAN7一1和装配型质粒pAN7一2或编码腐章霉素抗性的质粒pANS一1)转化该菌分生抱子原生质体。在随机位点整入DNA,并时常发生多重整合。转化频率可变,但与转化其它植物致病真菌的相同 (高达2。/协9 DNA…     

铜绿假单胞菌对碳青霉烯类药物的耐药机制研究

目的 探讨铜绿假单胞菌对碳青霉烯类药物的耐药机制.方法 收集2008年11月至2009年4月我院临床分离的铜绿假单胞菌31株,根据药敏结果分为碳青霉烯类耐药组(21株)和碳青霉烯类敏感组(10株).另设1株标准株ATCC 27853,用亚胺培南-EDTA(乙二胺四乙酸)抑制试验检测菌株是否产生金屑酶,采用PCR法检测各菌株的外膜孔道蛋白oprD2基因,探讨铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药机制.结果 21株耐药株有7株产生金属酶;21株耐药株经oprD2基因扩增,15株阴性,6株阳性,10株敏感株全部阳性.统计学检验结果表明,碳青霉烯类耐药组与敏感组oprD2基因阳性率的差异有极显著性(P＜0.01).结论 oprD2基因缺失和金属酶是本院铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药的重要机制.     

产碱假单胞菌一个新变种

关于假单胞菌的研究,已有许多文献报道。我们于1979—1980年从黑斑泥鳅肠腔内先后分离出假单胞菌83株。经鉴定该菌与产碱假单胞菌(Pseudomonas alcaligenes)很相似,但也有些不同。故认为该菌是产碱假单胞