榆黄蘑中一种抗病毒蛋白的纯化及其抗TMV和HBV的活性

采用阴离子交换层析和凝胶层析方法从新鲜食用菌榆黄蘑 (Plearotuscitrinopileatus)中进行了抗病毒蛋白的纯化 ,结果获得了一个纯化蛋白YP4 6 4 6 ,经SDS PAGE可确定其分子量为 2 7.4kD。以半叶法在枯斑寄主心叶烟上检测该蛋白对烟草花叶病毒 (TMV)的抑制率 ,发现有较好的抗TMV活性 ,其抑制TMV的中浓度为 0 .2 4 μg/mL。同时以HepG2 .2 .2 .15细胞株为模型 ,对所获得的蛋白进行体外抗乙型肝炎病毒效果的评价。结果表明该蛋白对HBsAg的 5 0 %抑制时的浓度为 0 .0 8μg/mL ,但对HBeAg效果不大     

绿色荧光蛋白标记检测鸦胆子素D抗TMV活性

以绿色荧光蛋白（green fluorescent protein, GFP）为报告基因,将含TMV表达载体的质粒p35S-30B：GFP转化农杆菌EHA 105,通过渗透法把经MMA诱导后的农杆菌悬浮液注射到本氏烟叶片内,测定了鸦胆子素D （Bruceine D） 对烟草植株内TMV的增殖和运动的抑制作用;通过PEG介导法把p35S-30B：GFP转化到本氏烟叶肉细胞原生质体内,测定了Bruceine D对烟草原生质体中TMV增殖的抑制效果.结果表明,在10 μg/mL浓度下,Bruceine D不仅可抑制烟草叶肉细胞原生质体中TMV的增殖,还可以抑制烟草接种叶中TMV向茎部及植株上部叶片移动,且对寄主植物不造成明显的毒害.     

杏鲍菇抗烟草花叶病毒蛋白的筛选

采用离子交换层析和凝胶层析方法,从杏鲍菇干样中分离得到多个蛋白组分,经枯斑寄主检测,发现多个蛋白组分都有抗烟草花叶病毒(TMV)的活性,对TMV的抑制率均在70%以上,高者可达99%。其中xb68Ab已得到了纯化,分子量约为23.7kD,在心叶烟和苋色藜上它对TMV侵染的抑制率分别达到99.43%和98.9%。     

TMV介导的外源蛋白在植物中表达

烟草花叶病毒(Tobaccomosaicvirus,TMV)为Tobamovirus代表成员,以此病毒介导的外源蛋白在植物中表达,经过了十几年的研究和不断完善,已被证实为一种有效的表达外源蛋白的途径.这项技术已经在医用活性多肽以及疫苗的研制、功能基因的鉴定、植物体内生物合成途径的研究等方面发挥越来越重要的作用.重点阐述了TMV基因组RNA的结构和分子生物学特征,并着重对重组载体的构建及其利用加以了论述.     

YP3：食用菌榆黄蘑中新的植物病毒抑制物蛋白

食用菌中含有多种抗病毒蛋白,可用于植物保护.采用硫酸铵分级沉淀、DEAE-纤维素离子交换层析和SephacrylTMS-200凝胶层析方法,从食用菌榆黄蘑新鲜子实体中提取到一单亚基蛋白,命名为YP3.利用SDS-聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳初步估计其分子量大约为27.6 kDa.氨基酸组成分析表明该蛋白非常类似其它的抗植物病毒蛋白,并且几乎不含糖.其N-末端序列为NRDVAACARFIDDFCDTLTP,在GenBank中没有找到同源序列.浓度为0.24 mg/L时蛋白YF3对烟草花叶病毒(TMV 20 mg/L)侵染心叶烟的抑制率为50%.同时还发现YP3对供试的细菌和真菌没有抑制活性,对胃癌细胞株MGC-803、肝癌细胞株SMMC-7721、肺癌细胞株SPC-A1的细胞增殖具有一定的抑制作用,其IC50大约为20 mg/L.     

毛头鬼伞（Coprinus comatus）中一种碱性蛋白的纯化及其活性

用离子交换层析（CMsepharose FF）和凝胶层析（SuperdexTM75）方法,从新鲜食用菌毛头鬼伞（Coprinus comatus）子实体中分离纯化出一碱性蛋白y3,经SDSPAGE初步确定其分子量约为14.4kD。活性检测结果显示：当其浓度为12.5μg/mL时,对烟草花叶病毒（TMV）在心叶烟枯斑寄主上的侵染抑制率达83.0%;y3对兔血凝集活性滴度为2.5,对人血凝集活性滴度为26,其浓度分别为1.562μg/mL和0.781μg/mL;利用胃癌细胞株MGC803检测y3体外抗肿瘤活性,其IC50为12μg/mL。y3 N端序列为NRDVAACARFIDDFCDTLTP,为一新的蛋白序列。在SWISSPORT上登录号为P83477。     

毛头鬼伞(Coprinus comatus)中一种碱性蛋白的纯化及其活性

用离子交换层析(CM-sepharose FF)和凝胶层析(Superdex^TM 75)方法,从新鲜食用菌毛头鬼伞(Coprinus omatus)子实体中分离纯化出一碱性蛋白y3,经SDS-PAGE初步确定其分子量约为14．4kD。活性检测结果显示：当其浓度为12．5μg／mL时,对烟草花叶病毒(TMV)在心叶烟枯斑寄主上的侵染抑制率达83．0%;y3对兔血凝集活性滴度为2^5,对人血凝集活性滴度为26,其浓度分别为1．562μg／mL和0．78lμg／mL;利用胃癌细胞株MGC-803检测y3体外抗肿瘤活性,其IC50为12μg／mL。y3 N-端序列为NRDVAACARFIDDFCDTLTP,为一新的蛋白序列。在SWISS-PORT上登录号为P83477。     

苦瓜核糖体失活蛋白的分离纯化及其抑制烟草花叶病毒活性

目的:探讨分离纯化苦瓜种子核糖体失活蛋白(RIP)的方法,并研究利用纯化后的RIP抑制烟草花叶病毒(TMV)的活性。方法:用盐溶液抽提总蛋白后,经30%～90%的(NH4)2SO4分级沉淀,制成粗提液。用CMSepharoseFastFlow离子交换层析结合SephadexG-75凝胶柱分离纯化RIP。结果与结论:经SDS-PAGE检测及RNAN-糖苷酶活性鉴定,确定最终得到的蛋白为苦瓜RIP;所纯化的RIP对感染黄瓜和番茄的TMV有明显的抑制作用,但RIP的浓度并不与其抑制TMV的活性呈正相关。     

灰树花中一种抗烟草花叶病毒的蛋白质的纯化及其性质

通过硫酸铵分级沉淀、阴离子交换柱层析及凝胶过滤柱层析,从灰树花子实体中分离到了一种具有抑制烟草花叶病毒（TMV）侵染活性的热稳定蛋白——GFAP.经常规凝胶电泳和等电聚焦电泳显示为单一条带,而SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果证明该蛋白质含有两个亚基,其分子质量分别为34 ku、40 ku.等电聚焦测定蛋白质pI为3.76,含糖量约为2%.GFAP的40 ku条带N端氨基酸序列为ACCVPSVTEFENAINSDPVM,将其与GenBank中的氨基酸序列检索比较后没有发现同源序列,预示可能为一新的氨基酸序列.GFAP与TMV混合接种心叶烟,当GFAP浓度为32 mg/L时即可完全抑制浓度为10 mg/L的TMV的侵染,而4 mg/L的GFAP对浓度为40 mg/L的TMV的抑制率仍可达60%以上.     

Induction of systemic resistance in tobacco against Tobacco mosaic virus by Bacillus spp.

Bacillus pumilus strain EN16 and Bacillus subtilis strain SW1 were tested for their systemic resistance and protection abilities against tobacco mosaic virus disease under greenhouse conditions. The results showed that strain EN16 and SW1 treatment significantly reduced mosaic symptoms and disease severity, resulting in 52 and 71% protection at 14 days of inoculation, respectively. A decreased amount of virus was detected in EN16- or SW1-treated tobacco plants by ELISA. Moreover, 5- and 7-day intervals between inducer treatment and pathogen inoculations were respectively required for strain EN16 and SW1 to induce optimal resistance. Further analysis on phenylalanine ammonia-lyase, peroxidase, polyphenol oxidase and pathogenesis-related (PR) proteins in tobacco showed that the amounts of defense enzymes and PR proteins significantly increased in Bacillus-treated plants challenged with pathogen when compared to control.     

人白细胞干扰素两种不同制剂对慢性乙型肝炎抗病毒效应的对比观察

本文报道了人白细胞干扰素两种不同制剂对44例慢性乙肝近,远期抗病毒效应的对比观察结果,其中Ⅰ组23例,Ⅱ组21例,Ⅰ组剂量为1×10~6u/次,im每周3次,共四周后改为1×10~6u/次,每周2次,共6周,总计10周为一疗程,Ⅱ组6×10~4u/次im,每周3次,6个月一个疗程,治毕近期效应在HBeAg,HBcAg,DNA-P及HBV-DNA阴转率及总有效率方面,Ⅰ组分别为52.1％,30％,0％,7.1％及52.1％;Ⅱ组分别为72.2％,50％,60％,28.5％及68.3％。治后进行半年以上追踪观察,Ⅰ组20例,Ⅱ组21例,远期效应,在HBeAg,HBcAg,DNAP,HBV-DNA,阴转率及总有效率方面,Ⅰ组分别为40％,33.3%,66.6％,33.3％及40％;Ⅱ组分别为70％,66.6％,80%,60％及71.4％,经统计学处理,两组近、远期HBV复制指标阴转率及总有效率均无显著差异(HBeAg除外),Ⅰ组抗病毒效应并不优于Ⅱ组。扼要讨论两组疗效相近的因素,认为Ⅰ组适当调整剂量及疗程有可能提高疗效,并讨论了治程中肝功能改变的意义,两组均未出现明显的副反应,是较安全的。     

一种食用菌提取物y3对烟草花叶病毒的钝化作用及其机制

测定了从食用菌毛头鬼伞(Coprinus comatus)中提纯的y3蛋白对烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的钝化作用,结果表明y3对TMV有较强的体外钝化作用,在心叶烟枯斑寄主上对TMV的抑制中浓度约为2．0μg／mL;y3在pH9．0时较稳定;TMV与y3混合后刚RNase处理,测得侵染率为61．74％,比未用RNase处理的对照降低了38．26％,说明y3具有一定的体外脱衣壳作用;另外电镜观察发现y3可使部分TMV粒体发生裂解,变短。     

一种食用菌提取物y3对烟草花叶病毒的钝化作用及其机制

测定了从食用菌毛头鬼伞(Coprinus comatus)中提纯的y3蛋白对烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的钝化作用,结果表明y3对TMV有较强的体外钝化作用,在心叶烟枯斑寄主上对TMV的抑制中浓度约为2.0μg/mL;y3在pH9.0时较稳定;TMV与y3混合后用RNase处理,测得侵染率为61.74%,比未用RNase处理的对照降低了38.26%,说明y3具有一定的体外脱衣壳作用;另外电镜观察发现y3可使部分TMV粒体发生裂解,变短.     

烟草花叶病毒运动蛋白cDNA的克隆及融合蛋白的表达

从烟草花叶病毒(TMV)中提取总RNA,通过反转录PCR (RTPCR) 扩增得到其运动蛋白(MP)的基因,将扩增产物克隆到pMD18T载体上。DNA序列分析表明,所得到的运动蛋白的基因全长为807bp (GenBank接受号AY300161), 与已发表TMV序列（GenBank登陆号为NC-001367）和同属的番茄花叶病毒（ToMV, GenBank登陆号为NC-002692相比核苷酸的同源性分别为98.0％和80.9％,氨基酸的同源性分别为99.1％和80.0％。 将目的片段亚克隆到表达载体pET30a上,并在大肠杆菌JM109中诱导表达,诱导9h 后,融合蛋白表达量最大。诱导后的工程菌超声后经SDSPAGE检测,融合蛋白以可溶形式存在。     

云南五个不同地区烟草花叶病毒外壳蛋白基因的序列比较

Five Tobacco mosaic virus isolates, obtained from tobacco leaves showing typical symptom in Qujing, Honghe, Dali, Chuxiong and Yuxi in Yunnan province, were selected and studied from 637 TMV samples. Using a pair of primers specific for TMV-U1 strain, a specific fragment of 530bp including the TMV coat protein gene was amplified using IC-PCR. The products of PCR were cloned and sequenced. The nucleotide and amino acid sequences of the coat protein of the five isolates were found to be very similar each other and have more than 90% sequence identity with TMV-U1, TMV-B,TMV-P, TMV-FUJIAN, although minor differences existed among them. The results showed that the five isolates from Yunnan province belong toTMV-U1 strain.     

Characterization of Synergy between Cucumber mosaic virus and Tobacco necrosis virus in Nicotiana benthamiana

Mixed infections of Nicotiana benthamiana plants by Cucumber mosaic virus (CMV) and Tobacco necrosis virus (TNV) exhibit a synergistic interaction and result in symptom enhancement. Accumulation of CMV(+) RNA as well as capsid protein (CP) in mixed infection was considerably higher than that of singly‐infected plants. There was also a slight increase in TNV(+) RNA and CP levels in doubly infected plants. Synergistic infection by CMV‐ and TNV‐induced higher increase in the levels of malonyldialdehyde, hydrogen peroxide (H₂O₂) and more decline in the activities of catalase than singly infected ones. Both peroxidase and superoxide dismutase activities increased rapidly for the first 10 days post inoculation (dpi) in doubly‐infected plants and then declined, whereas the enzyme activities continued to increase after 10 dpi in singly infected plants and had higher enzyme activities in the late stages than that of co‐infected plants. These results suggest that synergistic infection by CMV and TNV produced severes oxidative stress in N. benthamiana plants and the synergy between the two viruses was mutual.     

云南五个不同地区烟草花叶病毒外壳蛋白基因的序列比较

烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)是烟草花叶病毒属(Tobamovirus)中的典型成员,具有极广的寄主范围,可以侵染30个科的310多种植物,为单组份正链ssRNA病毒,TMV基因组RNA由6395个核苷酸组成,共有4个ORF,分别编码183kDa、126 kDa、30 kDa和17.5 kDa蛋白[1,2].