培养基灭菌方式对细菌分离效率的影响

自然界蕴含大量未/难培养微生物,分离这些微生物对理论研究和资源开发具有重要意义。本研究使用高压灭菌和过滤除菌方式制备培养基,采用稀释涂布方法,从红树林灰泥样品中分离获得123株细菌,通过16S rRNA基因序列分析对其进行鉴定,进而探究培养基灭菌方式对细菌分离效果的影响。结果表明：过滤除菌培养基生长的单菌落数目（339±82）个显著多于高压灭菌培养基生长的单菌落数目（179±65）个;两种培养基分离细菌的群落结构在门、科和属分类水平上总体相似,但优势类群的数目和少数类群存在差异;过滤除菌培养基分离细菌的Shannon Wiener’s指数、均匀度、新种率、基因多样性均高于高压灭菌培养基,而其与近缘模式菌株相似度的平均值和中位数则低于高压灭菌培养基。因此,过滤除菌培养基分离获得细菌的多样性、均匀性和新颖性均高于高压灭菌培养基。本研究首次探究培养基灭菌方式对细菌分离效果的影响,具有更高分离效率的过滤除菌培养基为未/难培养微生物菌株资源获取提供了借鉴。     

高压灭菌前后培养基pH值和渗透压的变化

配制马铃薯和N_6培养基,蔗糖浓度为9％,pH值为3—9(间隔0.5),渗透压分别为315mO_s(马铃薯培养基)和335mOs(N_6培养基)。经高压灭菌(120℃.1.5kg/cm~2·18分钟)后分别测量了各培养基的pH值和渗透压。高压灭菌前pH值低于4.5的培养基,其pH值在高压灭菌过程中升高;pH值越低,这种升高的趋势越明显。相反,高压灭菌前pH值高于5的     

离体条件下用秋水仙素处理小麦-黑麦杂种细胞的研究

在液体培养基上用0.05%的秋水仙素处理小麦-黑麦杂种幼穗愈伤组织,含秋水仙素的培养基采用两种方法灭菌：（1）秋水仙素与培养基成分混合在一起用灭菌锅灭菌。处理愈伤后愈伤组织无伤害迹象,推测可能是灭菌过程中秋水仙素浓度降低所致;再生植株的育性得到有效的恢复,48.1%的穗子结实,5.2%的穗子结实率达到34.8%;（2）秋水仙素经超滤灭菌后,在常温下与灭过菌的培养基成分混和,处理愈伤后愈伤组织伤害严重,几乎不能分化苗。     

高压蒸汽灭菌柜性能验证方法的研究

高压蒸汽灭菌柜在使用之前和运行一定时间后,必须进行性能验证,采用热分布,热穿透和微生物挑战试验法对GE,GEV型脉冲式蒸汽灭菌柜的性能进行验证,多孔物质及流体物质灭菌循环中,灭菌腔内不存在冷点,具备有效的热穿透力,嗜热脂肪芽孢杆菌（ATCC7953）在规定灭菌时间内被完全杀死。因而确认高压灭菌柜的各项性能均达到生产要求,由此建立的一套验证方案及试验方法和结果得到了国家GMP认证中心的认可。     

培养基除菌过滤在百日咳菌苗生产中的应用

经一系列试验证实百日咳菌大罐培养浓度的下降与培养基中不耐热营养因子不足有关,将培养基的高压灭菌方式改为除菌过滤,保留热不稳定营养因子,可以提高百日咳菌大罐培养浓度;优化酸沉淀条件后,提高了菌苗回收率,从而节省了大量培养基,缩短了生产时间,获得了良好的经济效益。     

高压蒸汽灭菌对麦康凯琼脂培养基质量的影响

目的探讨高压蒸汽灭菌对麦康凯琼脂培养基主要质量指标(p H、性能)的影响。方法配制p H为6.80、7.00、7.10、7.20、7.30、7.40、7.50、7.60、7.70、7.80的麦康凯琼脂培养基,经高压蒸汽灭菌后进行p H测定,并将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌和粪肠球菌接种于麦康凯琼脂培养基上,37℃培养24 h,观察不同p H对细菌生长的影响。结果高压蒸汽灭菌后麦康凯琼脂培养基p H降低0.30~0.50。p H为6.78~7.28时,大肠埃希菌生长率≥0.5;p H为6.93~7.39时,鼠伤寒沙门菌生长率≥0.5;不同p H的麦康凯琼脂培养基上金黄色葡萄球菌及粪肠球菌的生长指数均为0。结论高压蒸汽灭菌可影响麦康凯琼脂培养基的p H及性能。     

粉螨危害储藏中药材的实验研究

随机选取１０种中药材分别进行直接孵育（自然组）、高压灭菌后直接孵育（对照组）、高压灭菌并接种腐良酪螨后孵育（试验组）、高压灭菌并接种粉尘螨后孵育（试验组）,探讨粉螨对储藏中药材的危害。结果从自然缓和 药材中分离出螨的种数、虫口密度及真菌污染程度均较高于试验组和对照组,药材质量及重量显著下降,与其它各组相比,差异均有显著性（Ｐ〈０．０１）。人为接种腐食酪螨、粉尘螨的２实验组,粉螨孳生密度高,药材重量     

中麻黄的组织培养

1植物名称中麻黄（Ephedraintermedia）。2材料类别幼茎。3培养条件愈伤组织诱导及其继代培养基：(1)MS＋KT0．05mg·L－1＋2．4D1．1mg·L－1（单位下同）;（2）芽分化培养基：MS＋BA3＋IAA0．2;（3）生根培养基：MS＋BA0．06＋2,4-D1.1。以上培养基均加30g·L-1蔗糖,9g·L-1琼脂,pH值5.8左右,高压灭菌。培养温度(25±）℃,光照12h·d－1,光照度2000lx.4生长与分化情况4.1愈伤组织诱导及继代培养无菌操作下,切取中麻黄幼苗节间幼茎5mm大小,置培养基（1）上。15d后,淡黄绿色愈伤组织开始生长,愈伤组织疏松易碎。再过1…     

培养基微波灭菌法探讨

应用微波作为消毒灭菌方法,是近年来发展的一项新技术,已在食品工业和医药卫生的某些方面推广应用。本文试用微波对不耐高温或高压蒸气灭菌的含糖、血清等微生物培养基进行灭菌试验,结果报告如下。     

苦瓜的离体繁殖

1植物名称苦瓜M＆NlirutaJn哇地向）,杂交一代（瓦）,商品名称“高月”,高雄制种。2材料类别无菌种子苗茎尖和带芽茎段。3培养条件培养基：（1）1／2MS;（2）MS＋ZTI～6rug·L‘（单位下同）;（3）MS＋6－BAI～6;Q）MS＋ZT｝05。培养基（）、（《）中加蔗糖20g·L‘,（2）、（3）中加入30g·L‘;另外,培养基（1）中加入琼脂7g·L‘,（2）、（3）、（4）中加人sg·L’。培养基PH值均为58左右,高压灭菌。培养温度23士2℃,光照12h·d’,光照度2000IX左右。4生长与分化情况4．且无茵茵的获得种子用肥皂水漂洗,自来水…     

用家用高压锅消毒微生物培养基

随着新课程标准的实施,生物学实验课的范围更加广泛。初中教材和高中选修课本中,都出现了制备培养基,培养微生物的实验。实验用具、用材的无菌是微生物学实验成败的关键所在。在有条件的学校,一般都采用高压灭菌锅进行培养基灭菌。但在一些农村中学,由于缺乏相关设备,培养基的消毒灭菌就很难进行。于是,我们设想用家用高压锅代替高压灭菌锅来消毒培养基,并对其效果进行初步的探索。     

矮牵牛的离体培养和快速繁殖

InvitroCultureandRapidPro阴切nonofCommonpetunianHua,WENChun－Xu（PbeedeyIfes～lrchIndddeofHdri,SAsfor050061）1植物名称矮牵牛（Petun。htwde）,又名碧冬茄。2材料类别茎尖、带芽的茎段。3培养条件（回）诱导培养基：l／3MS＋6－BAImg／L（单位下同）＋IBA0．02＋GellanGum（进口琼脂）2g／L;（2）增殖培养基：MS＋6．BA0．5～1＋IBA0．2;（3）生根培养基：l／2MS＋IBA0．5。培养基含蔗糖25g／L,（2）和（3）附加普通琼脂55g／L。PH58,高压灭菌。培养温度22～25”C,光照度1500IX,照光10～12h／d。毛生…     

一种有效地提高银杉人工菌根苗诱导率的方法

 银杉（Cathaya argyrophylla）是一种极其珍稀的濒危松科植物。该研究建立了一种有效的银杉人工菌根诱导技术。通过将银杉种子播种于琼脂培养基7 d后,切除1/5～1/3的 种皮以及胚乳,从而使银杉种子的发芽率达到60％以上;同时筛选出既适合外生菌根菌土生空团菌（Cenococcum geophilum）平铺扩展生长的要求,又能满足银杉幼苗生长的培养基 RM, 使银杉的侧根能最大程度地与菌丝接触,确保了菌根的诱导率;通过紫外线照射加70％酒精 或0.05%NaOCl的表面消毒的双重处理,使不能高压灭菌的容器达到表面消毒效果,同时验证了用该灭菌法既能达到完全的灭菌效果又不会对植物的生长产生不良影响,而且银杉小苗的菌根形成率达到87.5%。该方法对于银杉的菌根学研究以及其它基础研究具有实际应用价值     

芋的组织培养

1植物名称芋,又称芋艿（Colocasiaesculenta）。2材料类别芽。3培养条件培养基：（1）MS＋NAA0．2mg／L（单位下同）＋BA2;（2）MS＋NAAI＋BA4;（3）MS＋NAA2＋BA0．2。琼脂6．5g／L,pH54。光照度500～2000IX,照光12h／d,25C恒温下培养。毛生长与分化情况芋的球茎经清洗后,常规方法灭菌,无菌水洗3次,再以解剖刀切取球茎上的顶芽或腋芽供试验。芽接种于培养基（l）上,2～3个月后芽长大,叶片展开,其基部两侧长出报并成完整小苗。若将纵切一刀的芽接种到培养基（1）上,50d后形成两个芽。芽切块接种在培养基（2）上6个…     

红菜苔子叶离体培养与植株再生

IhVitroCotyledonCultureandPlantRegenerationofBrassicacampestrisLIHan－Xia,YEZhi-Biao,LINGHut（DepartmentofIlorticulture,HuazhongAgriculturalUniversity,Wuhan430070）1植物名称红菜苔(Brassicacampestris)2材料类别无菌苗子叶。3培养条件基本培养基为MS。（1）无菌苗培养基为1／2MS;（2）芽分化培养基是MS＋BA2mg／L（单位下同）4NAAI;（3）生极培养基是MS＋IAAo5;培养温度25C,每天光照14h,光照度1800IX。4生长与分化情况于超净台上将种子在含O．l％SDS的0．1％HgCI,溶液中表面灭菌10min,再以无…     

高温高压灭菌对MS培养基pH的影响

常规蒸气高温高压灭菌明显改变MS培养基的pH值。灭菌前营养液pH在5～7范围时,其平均降低值（-△pH）约为0．56。灭菌前pH为7～8或8～9时,则-△pH分别为0．87和1．13。文中还比较了灭菌时间、培养基体积、琼脂、脱脂棉、PVP、NaCl、CaCl2、蔗糖、活性炭等因素对灭菌过程中MS培养基pH改变的效应。     

长寿花叶片愈伤组织的诱导和植株再生

１植物名称长寿花（Ｋａｌａｎｃｈｏｅｂｌｏｓｓｆｅｌ－ｄｉａｎａ）。２材料类别叶片。３培养条件培养基：（１）ＭＳ＋２,４－Ｄ１ｍｇ·Ｌ~（－１）（单位下同）＋６－ＢＡ０．１;（２）ＭＳ＋ＮＡＡ１＋６．ＢＡ０．１;（３）ＭＳ＋６－ＢＡ１＋ＮＡＡ０．１;（４）１／２ＭＳ。以上培养基均加蔗糖３０ｇ·Ｌ~（－１）,琼脂８ｇ·Ｌ~（－１）,ｐＨ值为５．８,高压灭菌,培养温度２３～２６℃,光照１２ｈ·ｄ~（－１）,光照度１０００ｌｘ左右。４生长与分化情况４．１无菌材料的获得从实生苗上取下叶片,经自来水冲洗后,用…     

香水白掌的组织培养和快速繁殖

1植物名称白鹤芋属品种香水白掌（Spathiphyllum“Xiangshui”）。2材料类别茎段、茎尖。3培养条件以MS为基本培养基。诱导丛生芽培养基：（1）MS＋6－BA4～6mg·L-1（单位下同）＋NAA0．2。丛生芽增殖培养基：（2）MS＋6－BA2～4＋NAA0．2;（3）培养基（2）＋KH2PO485。4生长与分化情况4．1丛生芽的诱导取香水白掌茎段,剥去外层叶片,75％酒精消毒lmin,然后用灭菌净浸泡20～35min,切取茎尖和茎段,置于培养基（1）上培养。7d后开始出现侧芽萌发和茎尖萌发成苗。30d后将萌发苗基部切割,置于培养基（1）继续培养,2周后出现了…     

日本茄F1离体快速繁殖

R8pidPfopsgstiollofEggplslltFIIrtMtTOCHENLi－Pin,CHENZhu－Jung,DONGWeiMin（几W训MOfHonk？1’LI;,7w,出。山wApe2,7YllUn。吻,H哗哗m310029）1植物名称茄（Sdri肌＿）,来源于日本的杂交1代（F;）,松岛制种。2材料类别无菌种子苗的茎尖和带芽茎段。z培养条件培养基：（川／ZMS;Q）Ms＋KTI～7mg／L（单位下同）;（3）MS＋6－BAI～7;（4）l／2MSuNAA0．l。以上培养基均加蔗糖30g／L,琼脂8g／L,PH值为5．8左右。高压灭菌,培养温度23～26C,光照12h／d,光照度1000IX左右。4生长与分化情况4．1…     

瓶栽灵芝管理的几点经验

(一)为了防止瓶栽灵芝的杂菌污染(从接种后到菌丝铺满之前,是污染率最高的时期),可采取以下办法: 1.抢温接种,即灭菌后的培养料温度降至25—30℃时,及时接种。 2.活化菌种,即接种前,把二级菌种放入温箱中1—2天。 (二)瓶栽灵芝的培养基,在高压灭菌后常出现表面干燥现象,致使接种后的菌丝生长缓慢,大大增加了污染的机会。解决的办法是: 1.封瓶口时,在牛皮纸外面再包一层塑料薄膜(为降低成本,可不用纱布或棉塞封口)。 2.先用无菌水湿润培养基表层后再接种。