趋化因子受体CCR3在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义

目的:探讨趋化因子受体CCR3在上皮性卵巢癌组织中的表达情况,以及其与卵巢癌临床病理特征的关系。方法:收集上皮性卵巢癌组织、良性上皮性卵巢肿瘤组织以及正常卵巢组织标本各30例,采用多聚腺苷酸加尾实时荧光定量反转录聚合酶链反应[poly(A)-RT-qPCR]检测其CCR3的表达,并分析上皮性卵巢癌组织中CCR3的表达与患者临床病理特征之间的关系。结果:上皮性卵巢癌组织中CCR3的表达显著高于良性卵巢肿瘤组和正常卵巢组,差异有统计学意义(P0.05);且上皮性卵巢癌组织中CCR3的表达与患者的分期、组织分级及淋巴结转移均显著相关(P0.05)。结论:CCR3在上皮性卵巢癌组织中呈高表达,且在上皮性卵巢癌的发生和发展过程中均起着十分重要的作用。     

牛α-IFN及FMDV P12A3C双表达载体的构建及其在BHK-21细胞中的表达

从口蹄疫病毒Asia I/Jiangsu毒株的细胞毒中提取总RNA,通过RT-PCR方法分别获得FMDV的P12A及3C基因;同时以pMD18-T-α-IFN质粒为模板,PCR扩增得到α-IFN基因.将α-IFN基因及FMDV P12A及3C基因连接至双启动子表达载体pBudCE4.1上,构建成双效表达质粒pBudCE4.1-α-IFN-P12A3C,经电泳、PCR、双酶切和DNA测序鉴定表明双效质粒载体构建成功.用此重组质粒转染BHK-21细胞后并对其表达情况进行检测,表明该双表达质粒在BHK-21细胞中能够成功表达.以此重组质粒免疫乳鼠后12 h,按100 TCID50/O.1 mL的量进行攻毒,结果发现该质粒能够抑制病毒的增殖,对乳鼠有一定的保护作用.结果表明成功构建了牛α-IFN及FMDV P12A3C组合基因双表达载体,为进一步研究口蹄疫基因疫苗提供前期基础.     

基因重组神经营养蛋白-3在中国仓鼠卵巢细胞中的表达

建立了能表达基因重组NT 3的中国仓鼠卵巢 (CHO)细胞系 ;通过Southernblot分析表明克隆细胞染色体中有明显的NT 3基因插入 ;用DotELISA和Westernblot实验证实了目的蛋白的表达及其分子量约为 1 4ku .利用EIA方法测定了阳性细胞株表达NT 3的量平均为 2 1 0 0ng/( 1 0 ⁶细胞·48h) ;rNT 3可促进鸡E8背根神经节神经突起生长 ,其长度与rNT 3浓度有明显的量效关系 ;rNT 3的EC5 0 值为 1 6 .7ng/mL ;单克隆抗体 3W3可中和所表达的rNT 3的生物活性 .     

嗜热脂肪芽孢杆菌α-淀粉酶基因在大肠杆菌中的克隆和表达

以质粒pATl53为载体,应用鸟枪法在大肠杆菌中建立了嗜热脂肪芽孢杆菌α－淀粉酶基因无性繁殖系。两个含α一淀粉酶基因的克隆的Hind Ⅲ片段均为4．5kb,内切酶谱也相同。本文还比较了从HBl01,p^a－1823和从基因供体菌中提取的α－淀粉酶的耐热性。     

Bmo-miR-375-3p对家蚕丝素蛋白轻链基因BmFib-L表达的调控作用

【目的】探究家蚕Bombyx mori miRNAs对丝素蛋白轻链基因(fibroin light chain gene,Bm FibL)和P25蛋白基因Bm P25表达的调控作用。【方法】分别以Bm Fib-L和Bm P25 mRNA 3'UTR为靶序列,应用在线预测软件RNAhybrid从前期家蚕4和5龄幼虫后部丝腺(posterior silk gland)sRNA高通量测序获得的29个差异表达bmo-miRNAs中,筛选对Bm Fib-L和Bm P25具有调控作用的候选bmo-miRNAs;采用半定量RT-PCR方法在mRNA水平分析候选bmo-miRNAs及其靶基因Bm Fib-L和Bm P25在4和5龄幼虫期以及5龄第3天幼虫不同组织的表达水平;利用双荧光报告基因检测系统在家蚕细胞Bm N中验证候选bmo-miRNAs对Bm Fib-L和Bm P25表达的调控作用。【结果】筛选到一个在Bm Fib-L和Bm P25 mRNA 3'UTR上都有靶位点的bmo-miR-375-3p(曾称bmo-miR-375*)。在后部丝腺中bmo-miR-375-3p和其预测靶基因Bm Fib-L和Bm P25都有较高的表达水平,提示bmo-miR-375-3p具备调控Bm Fib-L和Bm P25表达的时空条件。miR-375-3p重组表达载体与融合了Bm Fib-L 3'UTR的萤火虫荧光素酶(luciferase)报告基因(luc)表达载体共转染Bm N细胞,报告基因luc的表达水平显著下降;而在miR-375-3p重组表达载体与融合了Bm P25 3'UTR的luc表达载体共转染Bm N细胞中报告基因luc的表达水平下降不显著。【结论】miR-375-3p显著下调Bm Fib-L基因的表达,而对Bm P25基因的表达无明显调控作用。     

人白细胞介素12(hIL\|12)基因在杆状病毒表达载体系统中的表达

人白细胞介素12(hIL-12)是细胞介导免疫发生的关键调节因子,也是目前发现的唯一的异源二聚体细胞因子,由P35和P40两个亚基经二硫键连接而成.利用DNA重组技术,分别构建了含hIL-12p35基因和p40基因的重组转移载体质粒pAcAB3-p35和pAcAB3-p40.将两个重组转移载体分别与致死缺陷型线性化苜蓿丫纹液蛾核型多角体病毒(AcNPVBaculoGold LinearizedBaculovirus)基因DNA共转染昆虫细胞,构建出遗传稳定的重组病毒AcNPV-OCC-hIL-12(p35)与AcNPV-OCC——hIL-12(p40).将两种病毒分别感染Sf9细胞,取细胞培养物上清和细胞裂解物上清进行SDS-PAGE和Western blot检测,结果显示hIL-12p35和p40两基因均在昆虫细胞中获得表达,且能分泌至胞外.表达产物具有免疫原性.     

人白细胞介素12(hIL\|12)基因在杆状病毒表达载体系统中的表达

人白细胞介素12(hIL\|12)是细胞介导免疫发生的关键调节因子,也是目前发现的唯一的异源二聚体细胞因子,由P35和P40两个亚基经二硫键连接而成。利用DNA重组技术,分别构建了含hIL\|12 p35基因和p40基因的重组转移载体质粒pAcAB3\|p35和pAcAB3\|p40。将两个重组转移载体分别与致死缺陷型线性化苜蓿丫纹液蛾核型多角体病毒(AcNPV BaculoGold Linearized Baculovirus)基因DNA共转染昆虫细胞,构建出遗传稳定的重组病毒AcNPV\|OCC\|hIL\|12(p35)与AcNPV\|OCC-\|hIL\|12(p40)。将两种病毒分别感染Sf9细胞,取细胞培养物上清和细胞裂解物上清进行SDSPAGE和Western blot检测,结果显示hIL\|12 p35和p40两基因均在昆虫细胞中获得表达,且能分泌至胞外。表达产物具有免疫原性。     

14-3-3theta 蛋白在人骨肉瘤中的表达和临床意义

目的：研究14-3-3theta蛋白在人骨肉瘤中的表达和临床意义。方法：在62 例人骨肉瘤和正常骨组织样本中,通过免疫组化 的方法检测14-3-3theta 蛋白的表达情况,并分析其表达与骨肉瘤临床病理学特征间的关系。结果：在62 例骨肉瘤和正常骨组织 中,14-3-3theta 蛋白表达的阳性率分别为80.6%和17.7%。统计学分析表明,14-3-3theta 蛋白的表达与骨肉瘤肿瘤大小（P=0.016）、 高组织学类型（P=0.001）、高Enneking分级（P=0.047）具有显著相关性,而与骨肉瘤患者的年龄（P=0.901）、性别（P=0.691）、肿瘤部 位（P=0.802）、碱性磷酸酶（P=0.884）、血清白蛋白（P=0.822）、血沉（P=0.836）等均无关。Spearman 相关性分析检测发现,14-3-3theta 蛋白高表达与肿瘤大小（r = -0.34, P = 0.034）、高组织学分级（r = -0.27, P = 0.031）、高Enneking 分级（r = -0.05, P = 0.025）呈正相 关,而与骨肉瘤患者的年龄、性别、肿瘤部位、碱性磷酸酶和血沉等均无相关性（P > 0.05）。结论：在骨肉瘤组织中,14-3-3theta 作为 癌基因表达增加,与骨肉瘤的疾病进展密切相关,14-3-3theta 可以作为骨肉瘤疾病监测的一种分子指标。     

14-3-3θ蛋白在乳腺癌中的表达和预后的临床研究

目的:研究14-3-3夼蛋白在人乳腺癌中的表达和预后的临床意义。方法:在210例人乳腺癌组织样本中,通过免疫组化的方法检测14-3-3夼蛋白的表达情况,并分析其表达与乳腺癌临床病理学特征间的相关性及与患者总生存期的关系。结果:在210乳腺癌组织中,14-3-3夼蛋白的阳性表达为64.3%。卡方检验分析表明,14-3-3夼蛋白的表达与患者的发病年龄、肿瘤大小、组织分化程度以及HER2状态均没有相关性(P0.05);而14-3-3夼蛋白高表达与高TNM分期(P=0.013)、淋巴结转移(P0.0001)以及ER阴性(P=0.006)存在相关性。Spearman相关性分析检测发现,14-3-3夼蛋白高表达与高TNM分期(r=-0.187,P=0.006)、阳性淋巴结转移(r=-2.272,P0.0001)呈正相关,而与ER阳性状态(r=-0.046,P=0.003)呈负相关。Kaplan-Meier分析结果显示:伴有14-3-3夼蛋白高表达患者的DFS与OS明显少于14-3-3夼蛋白低表达的患者,log-rank检验提示P值分别为0.0379和0.0037,具有统计学意义。结论:在乳腺癌组织中,14-3-3夼作为癌基因表达增加,与乳腺癌的发展和转移发生呈正相关,14-3-3夼可以作为乳腺癌患者预后和疾病复发的检测指标。     

传染性法氏囊病病毒VP3结构蛋白基因在大肠杆菌中的高效表达

传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）是危害养鸡业的重要病原之一,属双股双节段ＲＮＡ病毒科成员,由Ａ和Ｂ两个片段的ｄｓＲＮＡ构成,大小分别约３３００－３４００ｂｐ和２８００－２９００ｂｐ。基因片段Ａ首先编码ＶＰ２－ＶＰ４－ＶＰ３聚合蛋白,然后再断裂成ＶＰ３、...     

杨树叶绿体3′rps12基因,rps7基因和ndhB基因片段的克隆及序列分析

通过烟草叶绿体相关序列设计引物 ,从杨树的叶绿体基因组中克隆出 2个相邻的DNA片段 .经分析发现 ,这 2个DNA片段包含核糖体蛋白 3′rps12、rps7基因和NADH脱氢酶第二亚基ndhB基因片段 .利用DNAMAN等软件 ,将扩增到的杨树叶绿体DNA片段与烟草、拟南芥、玉米和黑松的相关序列进行比较 ,证实所扩增的片段具有较高的保守性 ,尤其是在这 3个基因的编码区 ,同源性均在 90 %以上 .插入或缺失常发生在基因间隔区 ,同源性在 80 %左右 ;对其编码区所推导的氨基酸序列进行了比较 ,同源性均在 92 %以上 .首次克隆了杨树叶绿体的部分DNA序列 ,详细报道并分析了杨树 3′rps12、rps7基因和ndhB基因片段及其边界序列信息 .所报告的基因序列均已登录GenBank .     

G0101C03-3和L0254H10-3 基因在小鼠动情周期子宫中的差异表达

正常动情周期的维持是小鼠子宫多功能的必要条件 ,但对于其分子基础至今尚不十分明了。我们曾通过基因芯片技术分析了小鼠动情期与间情期子宫的基因表达谱 ,发现了许多差异表达的基因或表达序列标签(ESTs)。本实验选取了G0 1 0 1C0 3 3及L0 2 5 4H1 0 3两个差异表达的EST ,通过Northern印迹与原位杂交方法分析了它们在小鼠动情周期子宫中的时空表达模式。结果表明 :这两个基因的表达水平都发生周期性变化 ,在动情期表达量较少 ,而在间情期表达量较高 ;G0 1 0 1C0 3 3在动情期的表达量是间情期的 2 7% ,L0 2 5 4H1 0 3在动情期检测不到有表达 ,提示它们的表达受卵巢类固醇激素的调控 ;G0 1 0 1C0 3 3基因主要在子宫的腔上皮与腺上皮中表达 ,可能与子宫细胞的程序性死亡有关 ;而L0 2 5 4H1 0 3基因则主要位于基质细胞中     

SEMA3B基因在鼻咽癌组织中的表达、杂合性丢失和甲基化分析

SEMA3B基因定位于鼻咽癌高频缺失区域3p21.3上,最近被证明具有抑瘤基因的功能.分析了鼻咽癌组织中SEMA3B基因的表达、杂合性丢失(LOH)和甲基化情况.首先应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测了33例鼻咽癌组织和15例慢性鼻咽炎组织中SEMA3B基因的表达,结果显示75.8%(25/33)鼻咽癌组织中SEMA3B基因表达缺失或下调,显著低于慢性鼻咽炎组织中的表达(P=0.001).进一步选取3个微卫星位点D3S1568、D3S1621和D3S4597分析了20例鼻咽癌组织中SEMA3B基因LOH的情况,结果表明3个位点的丢失率分别为10%、20%和15%,总的丢失率为45%,统计分析发现LOH与基因表达之间存在明显相关(P=0.023).最后,采用甲基化特异性PCR方法分析了SEMA3B基因启动子区甲基化,结果发现在100%的鼻咽癌组织和73.3%的慢性鼻咽炎组织中检测到SEMA3B基因启动子区高甲基化.由此得出结论,SEMA3B基因在鼻咽癌组织中表达缺失或下调,LOH是引起其表达异常的原因之一.     

口蹄疫病毒3A基因在大肠杆菌中的高效表达

将口蹄疫病毒(Foot\|and\|Mouth Disease Virus,FMDV)的3A基因克隆到线形化的原核表达载体pProEX\|HTb中,转化大肠杆菌BL21和DH5α,经氨苄抗性筛选得到阳性克隆,IPTG诱导表达。SDSPAGE和West bolt结果证实大肠杆菌菌体不可溶性蛋白中富含3A蛋白,说明3A蛋白在表达产物中以包涵体的形式存在,所表达的蛋白含量占菌体蛋白的29.2%。     

人白细胞介素-3基因在酿酒酵母中的分泌表达

利用PCR突变方法,改造了人白细胞介素-3(hIL-3)cDNA,在成熟蛋白编码顺序5＇端前突变入了XbaⅠ酶切位点和酵母类胰蛋白酶加工位点Lys-Arg的密码子。改造后的hIL-3cDNA插入大肠杆菌-酵母穿梭质粒pVT102u/α,使其准确融合于α-交配因子前导序列之后,并置于启动子ADH1调控之下。转化入酿酒酵母宿主菌S-78筛选后,30℃培养48h,上清能明显促进hIL-3依赖细胞TF-1生长。上清中分泌表达的hIL-3经ELISA鉴定并定量,其表达量大于1.0mg/L。~3H-TdR掺入法测定上清中hIL-3活性为1.8×10~3u/ml。     

Cox-2、P504s、CK3413E12和P63在前列腺腺癌中的表达及其临床意义

目的:研究Cox-2、P504s、CK34βE12和P63在前列腺腺癌组织中的表达及其临床病理学意义.方法:用免疫组织化学法检测134例正常前列腺、良性前列腺增生和前列腺腺癌石蜡包埋组织中Cox-2、P504s、CK34βE12和P63的表达.结果:正常前列腺组织或良性前列腺增生组织未见或偶见P504s弱表达,但CK34βE12和P63均表达良好;前列腺腺癌组织中P504s表达良好,但CK34βE12和P63均表达消失,P504s表达阳性率为91.07%;与正常前列腺组和良性前列腺增生组相比.前列腺癌组的P504s阳性表达率存在显著性差异(p=0.001).COX-2在正常的前列腺组织几乎不表达,而良性前列腺增生组织及前列腺腺癌组织均可见阳性表达,阳性率分别为4.76%和80.36%;COX-2阳性表达率在正常前列腺组或良性前列腺增生组和前列腺腺癌组间有显著性差异(p=0.0027).COX-2与P504s表达存在相关性(r=0.377,P=0.039);COX-2的表达与年龄、临床分期、分化程度、有无远处转移等临床病理特征间无明显相关关系.结论:联合P504s、P63、CK34βE12和COX-2免疫组化检测可提高前列腺腺癌病理诊断的准确率.     

人白细胞介素-3基因在酿酒酵母中的分泌表达

利用PCR突变方法,改造了人白细胞介素-3(hIL-3)cDNA,在成熟蛋白编码顺序5＇端前突变入了XbaⅠ酶切位点和酵母类胰蛋白酶加工位点Lys-Arg的密码子。改造后的hIL-3cDNA插入大肠杆菌-酵母穿梭质粒pVT102u/α,使其准确融合于α-交配因子前导序列之后,并置于启动子ADH1调控之下。转化入酿酒酵母宿主菌S-78筛选后,30℃培养48h,上清能明显促进hIL-3依赖细胞TF-1生长。上清中分泌表达的hIL-3经ELISA鉴定并定量,其表达量大于1.0mg/L。³H-TdR掺入法测定上清中hIL-3活性为1.8×10³u/ml。     

IGF-Ⅰ及其受体、IGF结合蛋白-2和LH受体mRNA在卵泡中的表达

利用原位杂交和原位DNA－3’末端标记的方法研究了胰岛素样生长因子河（IG－I）、IGF－I受体、IGF结合蛋白－2、和促性腺激素受体的信使核糖核酸（mRNA）在不同生长与闭锁阶段的大鼠卵巢卵泡中表达的变化。结果表明：IGF－I主要在正常生长的初级卵泡、窦前卵泡和小窦状卵泡中表达。在各生长与成熟阶段的卵泡中都检测到IGF－I受体mRNA,闭锁卵泡的IGF－I受体表达降低。窦前与窦状的生长和闭锁卵泡均表达IGFBP－2。促卵泡激素（FSH）受体在窦前和小窦状卵泡的表达水平比其在大卵泡中的高。窦前与小窦状卵泡仅在膜细胞中表达黄体生成素（LH）受体mRNA,大卵泡的膜细胞与颗粒细胞均表达LH受体,在闭锁卵泡中仅在膜细胞中观察到LH受体的信号。综上结果,提示IGF－I,IGF－I受体和FSH受体在窦前和小窦状卵泡中的协同表达对卵泡的早期发育有重要作用。LH受体mRNA特异地在大卵泡的颗粒细胞中表达可能与优势卵泡选择相关。     

Cox-2、P504s、CK34βE12和P63在前列腺腺癌中的表达及其临床意义

目的：研究Cox-2、P504s、CK34βE12和P63在前列腺腺癌组织中的表达及其临床病理学意义。方法：用免疫组织化学法检测134例正常前列腺、良性前列腺增生和前列腺腺癌石蜡包埋组织中Cox-2、P504s、CK34βE12和P63的表达。结果：正常前列腺组织或良性前列腺增生组织未见或偶见P504s弱表达,但CK34βE12和P63均表达良好;前列腺腺癌组织中P504s表达良好,但CK34βE12和P63均表达消失,P504s表达阳性率为91．07％;与正常前列腺组和良性前列腺增生组相比,前列腺癌组的P504s阳性表达率存在显著性差异（p=0．001）。COX-2在正常的前列腺组织几乎不表达,而良性前列腺增生组织及前列腺腺癌组织均可见阳性表达,阳性率分别为4．76％和80．36％;COX．2阳性表达率在正常前列腺组或良性前列腺增生组和前列腺腺癌组间有显著性差异（p=0．0027）。COX-2与P504s表达存在相关性（r=0．377,P=0．039）;COX-2的表达与年龄、临床分期、分化程度、有无远处转移等临床病理特征间无明显相关关系。结论：联合P504s、P63、CK3413E12和COX-2免疫组化检测可提高前列腺腺癌病理诊断的准确率。