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在别构抑制剂AMP或底物果糖1,6-二磷酸(FruP_2)存在下,磷酸吡哆醛(PLP)分别专一性地修饰在蛇肌果糖1,6-二磷酸酯酶(FruP_2ase,E.C.3.1.3.11.)的催化部位或别构部位。测得了修饰在催化部位或别构部位的PLP的荧光寿命及其连续分布。通过荧光寿命分布宽度的比较,认为该酶的活性部位柔性大于别构部位的柔性。 相似文献
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腺苷一磷酸对4个快反应巯基被修饰的蛇肌果糖1,6-二磷酸酯酶活性的抑制作用增强,而该修饰的酶受果糖2,6-二磷酸的抑制脱敏,AMP对酶抑制为半部位反应,酶受果糖2,6-二磷酸抑制的脱敏则表现为全部位反应,经枯草杆菌蛋白酶限制性酶解的果糖1,6-二磷酸酯酶的K1增大10倍,但受果糖2,6-二磷酸抑制的性质不变,经胰蛋白酶限制性酶解的果糖1,6-二磷酸酯酶的活性不再为AMP抑制,但果糖2,6-二磷酸对 相似文献
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巯基修饰对蛇肌果糖,16—二磷酸酯酶活力的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
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几种高活性形式的蛇肌果糖1,6-二磷酸酯酶的紫外差光谱与酶在尿素或盐酸胍中差光谱相似,它们的酶学性质及巯基暴露的程度各不相同,提示这些高活性形式的酶的构象呈稳定的松驰状态,构象松驰的程度也各不相同,受果糖2,6-二磷酸、AMP的过量底物抑制的酶处于帮种不同的低活性状态,它们的构象特征与R态相反,提示此三种低活性酶构象处于较紧凑状态,这几种T态酶巯基暴露的程度,受蛋白水解酶限制性酶解的速度不同,说明 相似文献
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腺苷-磷酸(AMP)对4个快反应巯基被修饰的蛇肌果糖1,6-二磷酸酯酶活性的抑制作用增强,而该修饰的酶受果糖2,6-二磷酸的抑制脱敏。AMP对酶抑制为半部位反应,酶受果糖2,6-二磷酸抑制的脱敏则表现为全部位反应。经枯草杆菌蛋白酶限制性酶解的果糖1,6-二磷酸酯酶的Ki(AMP)增大10倍,但受果糖2,6-二磷酸抑制的性质不变。经胰蛋白酶限制性酶解的果糖1,6-二磷酸酯酶的活性不再为AMP抑制,但果糖2,6-二磷酸对该形式酶的抑制作用则明显增强,由于该酶失去受AMP的抑制作用,因此AMP促进果糖2,6-二磷酸抑制的性质亦随之丧失。据此提出在蛇肌果糖1,6-二磷酸酯酶中果糖2,6-二磷酸不是结合在AMP结合部位上的看法。 相似文献
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几种高活性形式的蛇肌果糖1,6-二磷酸酯酸的紫外差光谱与酶在尿素或盐酸胍中差光谱相似,它们的酶学性质及巯基暴露的程度各不相同,提示这些高活性形式的酶的构象呈稳定的松驰状态(B态),构象松驰的程度也各不相同。受果糖2,6-二磷酸、AMP和过量底物抑制的酶处于三种不同的低活性状态,它们的构象特征与R态相反,提示此三种低活性酶构象处于较紧凑状态(T态)。这几种T态酶流基暴露的程度,受蛋白水解酶限制性酶解的速度不同,说明这些T态酶的构象的紧凑程度是有差异的。蛇肌酶的不同的活化状态所具有不同的稳定的构象状态,在能量上可能相差很小,便于受到多种因子的调节。这可能是别构酶所普遍具有的现象。 相似文献
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在果糖1,6—二磷酸酯酶中果糖2,6—二磷酸可能与底物抑制的作用方式不同,因为蛇肌果糖1,6-二磷酸酯酶pH9.2的活性受到果糖2,6-二磷酸的抑制,而不受高浓度底物的影响。K+能增强果糖2,6—二磷酸对酶活性抑制,并能较大程度地解除过量底物的抑制。快反应流基修饰酶不再受较低浓度果糖2,6—二磷酸的抑制,但高浓度果糖2,6—二磷酸仍能抑制酶活性,其IC50增大40倍。修饰酶受底物抑制的阈值不变。为胰蛋白酶或枯草杆菌蛋白酶限制性酶解的果糖1,6—二磷酸酯酶受过量底物和果糖2,6—二磷酸抑制的行为也不相同。以上结果可能提示在蛇肌果糖1,6—二磷酸酯酸中存在既有别于AMP,又有别于过量底物的结合部位。 相似文献
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固定化酵母细胞生产1,6—二磷酸果糖研究 总被引:1,自引:0,他引:1
本文研究了固定化酵母细胞制备果糖1,6二磷酸的方法及其生产。用卡拉胶包埋方法固定化酿酒酵母,对含葡萄糖1.0M,磷酸盐0.8M的糖磷液,PH6.5在37℃下进行磷酸化反应。反复分批转化20天以上,可达到平均产FDPH4 27.58mg/ml。最高为59.94mg/ml。 相似文献
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果糖-1,6-二磷酸的酶法测定 总被引:5,自引:0,他引:5
前言 果糖-1,6-二磷酸(简称FDP)在临床上有广泛用途,主要是作为治疗心脏缺血症的辅助药物,其工业化生产引起了人们越来越浓厚的兴趣。因此,无论是生产或者临床应用试验中,FDP的含量分析都十分重要。 相似文献
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丙糖磷酸异构酶、果糖—1,6—二磷酸醛缩酶及果糖—1,6—二磷酸酶的共表达 总被引:1,自引:0,他引:1
致力于建立一条控制或降低大气中CO2浓度的途径,选择对 进行代谢工程以便改进其光合固定CO2的效率。作为研究的初始阶段,将编码丙糖磷酸异构酶、果糖-1,6-二磷酸醛缩酶及果糖-1,6-二磷酸酶的3个基因构建进一个由启动子trc控制的表达质粒pTrcFAT,成功地在大肠杆菌中实现了上述3个基因的活性共表达。活性测定结果显示:从1L培养液获得的破菌上清液每分钟可以催化二羟丙酮磷酸(DHAP)转化成700μmol果糖-6-磷酸。在此基础上进一步构建了这3个基因共表达的大肠杆菌-蓝藻穿梭表达质粒,也在大肠杆菌中实现了活性表达,当外泊基因的操纵子与载体质粒以大于1:1的比例进行构建时,可显著提高外源基因的表达量及相应的的酶活性。 相似文献