红细胞生成刺激素(EPO)的纯化

 本文用中空纤维柱超滤浓缩尿,再经离子交换层析、聚焦层析、凝胶过滤和制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)-层析等四步从15L再生障碍性贫血患者尿中获得约2mg EPO制品。比活性达10 300U/mg蛋白。该制品在分析型PAGE中呈一条区带。     

人红细胞生成素（EPO）工程细胞建立及特性分析

构建了ＥＰＯ真核表达质粒,成功地实现了其在ＣＨＯ－ｄｈｆｒ＾－细胞中的表达,所得到的ＥＰＯ工程的细胞株的形态与ＣＨＯ－ｄｈｆｒ＾－细胞相似,细胞株小瓶静止培养时最高表达水平为２－３μｇ／１０＾６ｃｅｌｌｓ／２４铺达稳定,连续传代三个月和反复冻存复苏三次,细胞表达水平无明显下降。经过对细胞的一系列特性分析表明,该细胞株无支原体、真菌及细菌污染、无致瘤性,形态正常,染色体畸变率与出发株相当。     

用三步法纯化重组人促红细胞生成素

在生物反应器中培养中国仓鼠卵巢细胞—促红细胞生成素(CHO-EPO)C2细胞株,培养上清液中重组人促红细胞生成素(rHuEPO)表达水平达2000～3000U/ml。培养上清经过三步纯化:第一步为反相柱色谱,可将样品浓缩约96.7％,其收集液经充分透析后进行第二步的DEAE-离子交换色谱,最后进行分子筛色谱,总回收率为30％以上,经纯化的rHuEPO比活性为1.5×10~8U/g蛋白,SDSPAGE一条带,扫描测试纯度达98％以上。     

无血清培养基生产重组人红细胞生成素的纯化

用无血清培养基在生物反应器中培养CHO-EPO C2细胞株,培养上清中重组人红细胞生成素表达水平达10～21 mg/L.培养上清经过三步纯化后纯度可达到98%以上,比活性约为1.5×10⁵ U/mg.纯化第一步使用反相柱层析,可将样品体积浓缩约30倍.取其收集液进行DEAE-离子交换柱层析,最后进行分子筛层析,全过程回收率为40%左右.SDS-PAGE表明,所制备终产品分子质量为35～40 ku,等电聚焦方法测其等电点在3.75～4.15之间,均属文献报道范围;ELISA和蛋白质印迹实验结果证明其具有天然红细胞生成素抗原性;采用溴化氰裂解方法做肽谱电泳,结果与理论推测相符.该纯化路线简单、迅速、高效,重复性好,可用于规模化生产临床使用重组人红细胞生成素.     

重组人促红细胞生成素纯化的研究进展

促红素能促进人前体红细胞的增殖和分化,从而使人体内红细胞数量增加。临床上主要用于贫血、组织断离以及癌症患者透析后的恢复。促红细胞生成素自1971年在羊的尿液中被提取出后,近30年以来人们不断对其进行研究。促红素蛋白纯化工艺从Myake的七步法完善到现在的三步纯化法。本文综述了促红细胞生成素蛋白纯化的发展历史以及促红素未来的发展方向。     

重组人促红细胞生成素纯化工艺的优化

采用堆积床生物反应器,用无血清培养基培养分泌重组人促红细胞生成素（rhEPO）的工程细胞株ZK9703.所收集的上清,采用阴离子交换层析－反相层析－分子筛层析三步纯化工艺路线,分别用Q－Sepharose XL-C4-S-200（方法Ⅰ）和DEAE Sepharose FF-Source-S-200(方法Ⅱ）纯化3批产品,所得EPO纯度达98％以上,体外比活性大于1.3^10^5IU/mg。方法Ⅰ、方法Ⅱ纯化过程的EPO体外活性回收率分别为23.56%和28.57%。本纯化方法Ⅱ工艺纯化日程短,分离效果好,EPO体内、体外活性回收率较高,更适合于大规模生产重组人促红细胞生成素。     

重组人促红细胞生成素中试纯化工艺研究

采用堆积床生物反应器,用无血清培养基培养分泌ｒｈＥＰＯ的工程细胞株ＸＰ９５０１。所收集的上清液,经过快速离子交换层析—反相—分子筛层析纯化后,所得ＥＰＯ纯度达９９％以上,比活性为１－５×１０５ＩＵ／ｍｇ。整个纯化全过程的ＥＰＯ体内活性回收率为４６％。所纯化的ＥＰＯ分子量为３６ｋｄ,等电点为３－５。免疫印迹证明其有天然ＥＰＯ的免疫原性,Ｎ端１５个氨基酸序列分析与文献报道一致。本纯化工艺路线简单,时程短,重复性好,适合于大规模生产重组人促红细胞生成素。     

扬子鳄红细胞超氧物歧化酶的纯化及其性质研究

扬子鳄红细胞超氧物歧化酶的纯化及其性质研究周衍茂（安徽教育学院生物系,合肥２３００６１）尹路明（中国科学技术大学生物系,合肥２３００２６）关键词超氧物歧化酶;纯化;扬子鳄;红细胞超氧物歧化酶（的田广泛存在于各类生物组织中,是生物体内超氧自由基有效的清...     

促红细胞生成素(EPO)

一、产品概述 促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)主要是在肾脏中产生的一种造血激素,是具有166个氨基酸残基,分子量为35000的糖蛋白。 EPO对原红细胞集落生成细胞CFU-E或其早幼阶段的BFU-E起作用,具有促进向红细胞前体细胞--网状红细胞,原红细胞的分化,并生成红细胞的作用。     

卵泡刺激素受体短肽的表达及纯化

目的:表达人卵泡刺激素受体(follicle-stimulating hormone receptor,FSHR)N端第18-34氨基酸片段.方法:将FSHR N端第18-34氨基酸片段克隆p-pGEX4T-1中,构建成重组质粒pGEX4T-1-FSHRN(18-34位氨基酸).将该重组质粒转化E.coli BL21后,IPTG诱导其表达,经亲和层析进行分离纯化,western blot鉴定.结果:克隆成功,并表达FSHRN端第18-34氨基酸片段,所表达的融合蛋白中60%为可溶性蛋白.结论:成功克隆、表达、纯化了人FSHRN端第18-34氨基酸片段,为后续动物免疫试验提供抗原.     

Amgen公司的促红细胞生长素（EPO）制剂“Aranesp”Ⅱ期临床试验取得良好结果

美国Amgen公司2006年3月12日宣布,以心力衰竭患者的贫血治疗为对象的促红细胞生长素（Erythropoietin,EPO）制剂“Aranesp”（Darbcpoctin α）的Ⅱ期临床试验获得了良好的结果,血红蛋白（Hemoglobin）的增加和症状的改善．在对循环器官系统疾病进行症状评估（KCCQ）时获得高分。     

雪山豆凝集素红细胞凝集成分的纯化

雪山豆凝集素(SML)经SP-Sephadex C-50和磷酸纤维素离子交换层析分离红血球凝集成分。聚丙烯酰胺凝胶电泳分析和红血球凝集试验为一不均一成分。其中E_2-SML有两条迁移较快的蛋白带,红细胞凝集效价是SML的64倍,是L-SML的512倍。该法制备的红细胞凝集成分具有高的产量和纯度。