生物防治

960285 设计高效抗鳞翅目和鞘翅目昆虫的重组苏云金芽孢杆菌菌株[俄]/Kuzina, L. V.…∥Biotekhnologiya.-1994,7.-15～19[译自DBA,1995,14(8),95-04683] 将苏云金芽孢杆菌subsp.Kurstaki HD1负责晶体蛋白CryIA(b)合成的44MDa质粒分别接合转入不合成晶体蛋白的苏云金芽孢杆菌subsp.thuringiensis98和苏云金芽孢杆菌subsp.tenebrionis1516变种中,构建了重组的苏云金芽孢杆菌     

控制Bt开关 降低对抗性的选择性

作物保护界非常关心的是,在许多新的生物杀虫剂的核心部分及设计遗传工程抗虫植物中普遍使用苏云金芽孢杆菌(Bt)毒素将导致农民希望控制的害虫产生抗毒素群体。有越来越多的证据表明小菜蛾(Plutella xylostella),特别是在以高滴度喷洒毒素的地区,对Bt 产生了田间抗性。预测那些起初有效抗虫的高水平表达Bt 毒素的植物,经过较长一段时间将由于抗Bt 害虫的进化而失效。这方面的努力主要集中于寻求防止抗性扩散的方法,特别是通过降低选择性压力。例如,可将遗传工     

Monsanto开发新的植物抗虫性途径

Monsanto Co.(St.Louis,MO)发现了一种新的可使植物具备抗虫性的途径,即经遗传工程使植物表达胆甾醇(CO)基因。 CO技术为Monsanto提供了一种利用苏云金芽孢杆菌(Bt)毒素蛋白防治害虫的替代性方法。称CO可保护植物免受棉象虫和棉铃虫等害虫为害的Monsanto正积极地寻求美国和欧洲对此技术的专利保护。 Monsanto在Mycogen Corp.(San Diego,CA)囊括在植物中使用杀虫Bt基因的美国专利后仅一     

EPA准许Bt玉米全面商品化

美国环保局(EPA)颁布了一项条件性登记附录,准许全面商品化使用植物杀虫剂以防止大田玉米的虫害。此植物杀虫剂为苏云金芽孢杆菌(Bt)CryIA(B)δ-内毒素及其产生所必需的遗传材料(pCIB4431)。此杀虫剂是通过在植株中产生少量这种天然存在的昆虫毒素文本而起作用的。毒素作用的初步目标是玉米螟。     

转基因植物Bt抗性管理

苏云金芽孢杆菌Bt δ-内毒素是一种潜在的抗虫(如欧洲玉米螟虫)杀虫剂。目前,已将编码这种蛋白的基因导入各种作物。但人们关心的是,这些转基因植株对昆虫的抗性会持续多久。对此,D.N.Alstad和D.A.Andow在“科学”杂志上报道,他们利用计算机模拟法设计了延长转基因Bt植物抗性的     

Monsanto与Pioneer Hi-Bred合作

在美国,Mycogen Corp.(San Diego,CA)和Monsanto CO.(St.Louis,MO)就表达苏云金芽孢杆菌(Bt)基因的遗传工程植物的专利之争又燃起战火。 Monsanto与Pioneer Hi-Bred Int'l. Inc.(Des Moines,IA)开始进行合作,而后者也与Mycogen签订了5100万美元的交易。Monsanto准许世界最大的种子公司Pioneer使用其Yieldgard抗虫玉米的技术。Yieldgard可抗欧洲玉米螟和其它鳞翅目害虫,其保护能力是由于其含有衍生自Bt的蛋白质。尽管Monsanto和Gary Barton称Yieldgard并不侵犯Mycogen公司的专利,因为在Yieldgard的培育中使用了“不同的技术”,但Mycogen公司的Mike Sund不这样认为。据Sund称“所有转基因植物必须使用此法”因此“他们的行为都     

粘虫颗粒体病毒增效蛋白在苏云金芽胞杆菌中的表达及增效活性

【目的】在苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis, Bt)中表达截短后的转宿主粘虫颗粒体病毒(Pseudaletia unipuncta granulovirus-Ps, PuGV-Ps)增效蛋白,为构建增效Bt工程菌提供理论基础。【方法】通过对截短后增效蛋白的密码子进行优化,构建增效蛋白及其融合蛋白表达载体,分析不同启动子指导下增效蛋白表达量的变化,明确增效蛋白对Bt的增效活性。【结果】本研究构建了表达载体pHTP_cry1AcCoEn81、 pHTRHCoEn81和pHTNCCoEn81, SDS-PAGE结果显示pHTP_cry1AcCoEn81和pHTNCCoEn81分别可以产生81 kDa和134 kDa的重组蛋白。启动子Pcry1Ac和P_cry8E指导下的增效蛋白表达量和重组增效蛋白产量均无显著性差异。生物测定结果表明,重组增效蛋白可以显著增加Bt对小菜蛾的杀虫活性。【结论】研究结果表明,密码子优化的PuGV-Ps增效蛋白可以在Bt中表达并具有显著增效活性,为高效苏云金芽胞杆菌工程菌的构建及...     

cry8E启动子指导的非晶体蛋白GabR在苏云金芽胞杆菌HD73菌株中的表达

【目的】利用cry8E基因启动子指导的高效表达载体pHT315-8E21b,构建一个能够在苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)中正确表达非晶体蛋白GabR的重组菌株。【方法】将苏云金芽胞杆菌中的功能基因gabR装载到cry8E基因启动子指导的高效表达载体pHT315-8E21b上,转入到HD73-无晶体突变株后获得重组菌株HD-8E-gabR。通过SDS-PAGE和凝胶阻滞等方法对GabR蛋白的表达和功能进行分析。【结果】通过SDS-PAGE及蛋白定量等方法首次证明了在Bt表达体系中cry8E基因启动子指导的高效表达载体能够表达非晶体蛋白GabR,且通过碱裂解的方法可以提高GabR蛋白在Bt系统中的溶解性。进一步凝胶阻滞试验证明GabR能与其调控启动子PgabT结合。【结论】证明了cry8E基因启动子指导的Bt表达系统具有大量表达非晶体类蛋白的能力。     

生物防治

苏云金芽抱杆菌贴泽毒素(55kDa)对鳞翅目昆虫的毒性到对双翅目昆虫的毒性的变化至今还没有在其它苏云金芽抱杆菌田(Bt)毒素上观察到.这种变化是由于     

Bt遗传工程植物获EPA批准

美国环保署(EPA)首次批准限量注册含苏云金芽孢杆菌(Bt)毒素基因的遗传工程植物。EPA认为,这种“植物杀虫剂”能降低常规杀虫剂的用量,并降低对公众健康和环境的危害,在掌握一定数据的 基础上,EPA确信使用这些Bt植物杀虫荆对公众健康、其它非目标微生物及环境没有危害。限量注册的目的是允许各公司开发植物杀虫剂,产生大量玉米,棉花及马铃薯种子。这一行动将推动新型杀虫剂产品的商品化。工程化的马铃薯、玉米或棉花植株均产生与在细菌中天然产生的相同的昆虫毒索(“δ-内毒     

国外科技简讯

第三代Bt杀虫剂问世 据ANI 1995年3月报道:美国宾夕法尼亚州Ecogen公司已获得美国环境保护局的准许,将重组苏云金芽孢杆菌(Bt)生物杀虫剂“Raven”投入市场。Raven是在美国环境保护局注册的第一种重组Bt,也是第三代Bt生物杀虫剂。该杀虫剂包含了来自不同的Bt株系的复合蛋白,其有效成分为8％马铃薯甲虫活性毒素和2％蠋毒素。由于马铃薯甲虫已对化学杀虫剂产生了抗性,因此化学防治日渐失效。1994年Raven田间防治试验表明效果良好,为此科学家建议将其与化学杀虫剂结合施用。据统计,目前Raven在世界市场上的销售金额已高达5—10百万美元。     

美国Mycogen公司在日本寻求开发微生物农药的合伙人

美国 Mycogen 公司(加利福尼亚州圣迭戈)正在日本寻找开发微生物除草剂和重组微生物杀虫剂的合伙人并开始销售。计划是提供该公司的所有技术的独占权,并开发适应包括日本在内的亚洲地区的微生物农药。介绍日本企业和 Mycogen 公司合作的是三菱商事公司。Mycogen 公司是一个风险企业,它探索有用微生物和来自微生物的生理活性物质,设法将它们用于农业。它拥有100多株杀虫谱不同的微生物杀虫剂苏云金芽孢杆菌(Bacillus th-uringiensis,Bt),并从60株中克隆化了毒素基因。它发现了对马铃薯甲虫有效的苏云金芽     

细菌毒素基因成功克隆到烟草细胞中

<正> 据《Biotechnology News》(1985年5卷4期)和《Newsw ATCH》(1985年5卷3期)报道;Rohm 和 Haas 公司声称已将细菌的基因首次克隆到烟草植株中,并且得到表达。研究人员将来自苏云金芽孢杆菌产生毒素的基因片断插入烟草植株、使烟草能够抗某些害虫。苏云金芽孢杆菌作为一种微生物杀虫剂广泛用以防治某些害虫,含有苏云金芽孢杆菌毒素的烟     

苏云金杆菌6－内毒素基因及3’末端缺失基因在大肠杆菌和农杆菌中的亚克隆和表达

苏云金芽孢杆菌交种Bacillus thuringiensis aizawai 7-29 δ-内毒素基因及其3,末端缺失基因,亚克隆到质粒pUCl9上,构建了Pucf33和Puck63重组质粒。进一步将δ-内毒素基因及其3’端缺失基因,插入到植物表达载pBl121．2质粒中,构建了Pgy61和Pgyck63重组质粒。．用32P标记的δ-内毒素3’末端缺失的KpnI DNA片段的探针,与重组质粒进行DNA—DNA分子杂交,结果阳性。带有全长和3’末端缺失重组质粒,转入大肠杆菌HB101和农杆菌LA4404受体细胞中,其克隆子细胞抽提物,对大菜粉蝶和玉米螟幼虫均具有杀虫生物活性。结果证明δ－内毒素基因不仅能在大肠杆菌HB10l中,而且能在农杆菌LA4404中表达。     

球形芽孢杆菌C3-41二元毒素基因在苏云金芽孢杆菌以色列亚种中的克隆和表达

球形芽孢杆菌C3-41是我国分离的一株对蚊幼虫有毒杀作用的高毒力菌株,对库蚊、按蚊幼虫的毒性高于2362菌株,Southern杂交证明C\-3\|41总DNA中35Kb HindIII片段上带有419和514kD二元毒素基因,该片段由3479个核苷酸组成,核苷酸序列同2362菌株的二元毒素基因序列完全相同。含二元毒素基因的重组质粒pCW\|1和pCW\|2能在大肠杆菌中表达产生二元毒蛋白,但表达量低,重组子杀蚊毒性低。无晶体型苏云金芽孢杆菌以色列亚种重组子在其芽孢形成中能产生以晶体形式存在的二元毒素蛋白,其全发酵液和纯化晶体蛋白的杀蚊活性与C\-3\|41相近。     

苏云金芽孢杆菌Bt9875晶体蛋白诱导HL-60细胞凋亡

[目的]研究苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)Bt9875菌株晶体蛋白对人急性髓细胞性白血病细胞HL-60的影响.[方法]采用MTT比色、荧光显微观察、DNA凝胶电泳、流式细胞术等方法来检测不同浓度的Bt9875晶体蛋白处理后HL-60细胞的凋亡特征.[结果]Bt9875晶体蛋白对HL-60细胞的生长具有明显的抑制作用,且随着蛋白质浓度的增加对HL-60细胞生长抑制愈加明显,而对正常人外周血单个核细胞(PBMC)无作用;荧光显微镜下观察发现经该蛋白作用后HL-60细胞核的形态呈现凋亡特征;流式细胞术分析表明,HL-60细胞经100 μg/mL晶体蛋白作用后,凋亡率达到52%;琼脂糖凝胶电泳显示细胞DNA呈梯状降解.[结论]初步证明了Bt9875晶体蛋白在体外能够明显抑制HL-60细胞的增长,并诱导其凋亡,这为苏云金芽抱杆菌晶体蛋白的应用开创了新的思路.     

美开发利用重组细菌的作物疫苗并计划进行用于水稻的野外试验

美国作物遗传国际公司向美国农业部和美国环境保护署(EPA)两机关提出申请,要求批准该公司开发的作物用疫苗“Incide”用于水稻的野外试验。1988年公司已对玉米进行了Incide的野外试验,决定今年还要在内布拉斯加州、伊利诺斯州、明尼苏达州进行玉米的试验。“Incide”是CGI公司与USDA的研究者共同开发的一种微生物农药。CGI公司把已用作微生物农药的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的BT毒素基因导入寄生在水稻的细菌Clavibacter xylicylnodontis。CGI公司把这种重组微生物利用高压封入玉米和水稻的种子内。随着作物生长,这种菌在导管等植物组织内增殖。估计导入了Incide的水稻     

Bt杀虫晶体蛋白受体分子的结构与功能

苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis, Bt)杀虫蛋白与昆虫中肠细胞膜上受体的结合是Bt毒素作用的关键环节和决定Bt杀虫蛋白选择性的关键因素。受体与Bt杀虫蛋白结合能力的改变可能是昆虫对Bt产生抗性的主要原因,也因此成为近年来国际上的研究热点和焦点,并取得了突破性的进展。该文就昆虫体内Bt毒素的４种受体：氨肽酶N、类钙粘蛋白、碱性磷酸酶以及最近报道的糖脂类受体的结构、功能、受体与毒素的结合特性、受体基因在离体细胞中的表达特性以及受体基因的突变与害虫对Bt毒素的抗性等方面进行了综述。     

含二元毒素基因的苏云金杆菌重组子晶体蛋白分析及其对蚊幼虫的毒性

通过电转化方法将含球形芽孢杆菌（Bacillussphaericus简称B.s)二元毒素基因的重组质粒pCW2转化野生型苏云金杆菌以色列亚种（B．thuringiensissubsp.israelensis简称B．t．i）,获得一株含二元毒素基因的重组菌株B＋CW-1。重组菌株能表达二元毒素及δ-内毒素和CytA毒素,并形成2类位于芽孢孢外膜外的伴孢晶体。B＋CW-1对伊蚊（Aedes）、按蚊（Anopheles）和抗性库蚊（Culex）的毒力明显高于B．s,同时也略高产B.t.i菌株,但其杀蚊谱和杀活性水平同B．t．i相似。未发现二元毒素同B．t．i毒素间的协同作用。     

杀蚊苏云金芽孢杆菌及其晶体蛋白研究进展

自从发现苏云金芽孢杆菌Bacillusthuringiensis(Bt)具有杀蚊活性以来,目前已发现多种Bt亚种或血清型对蚊虫具有杀虫活性,同时也发现了一些新的杀蚊晶体蛋白。在对杀蚊晶体蛋白的分子结构进行研究的基础上,对其的作用机理有了一定的了解。近年来利用DNA重组技术显著提高杀蚊晶体蛋白的合成和将不同菌种的杀蚊晶体蛋白进行联合表达,为有效控制蚊虫危害展示广阔前景。