从豆制品废水厌氧发酵液分离的一株新的产甲烷球菌

用Hungate厌氧技术,从豆制品废水厌氧发酵液中分离到一株细胞直径为0.5--1.2μm的球形产甲烷细菌,编号8508。该菌株利用H2／CO2和甲酸盐生长产甲烷。生长要求乙酸盐、酵母膏和酪素水解物。最佳生长要求0．5--1．0％的NaCl或MgCl20生长的最适温度为35℃,最适pH 7．0--7．3。DNA的G+C含量为41mol％。菌株8508可能是甲烷球菌属(Metha-nococcus)中的一个新种,但还要通过DNA杂交、荧光抗体等测定证实。     

一个嗜热分解纤维素的梭菌新种的分离和鉴定

本文描述了一个严格厌氧,形成芽孢,嗜热,分解纤维素、糖和蛋白质的梭菌新种。这个种的两株菌(H11,H12)是从奶牛场的青贮饲料(山草)中分离出来的。在PYC液体培养基中细胞杆状,0．3mO．6×1．5—-5．5μm,单生或成对,很少成链。革兰氏阴性,能运动,有周生鞭毛。芽孢卵至球形,端生和次端生,使细胞膨大。游离芽孢球形,有孢子外壁和附属丝。在PYC琼脂滚管中,深层菌落呈双凸镜状,湿润,浅黄色,直径1—2mm,边缘完整。生长的最适条件是50—53℃和pH 7．5。所需要的生长因子是生物素、维生素B6、B12和对氨基苯甲酸。发酵纤维素或纤维二糖产生琥珀酸、乙酸、乙醇、氢和二氧化碳。DNA的G十C含量是38.8 mol％。参考这个种在非挥发酸中的主要产物是琥珀酸的特性,将它定名为产琥珀酸梭菌(Clostridium succinogenum Ten & Wang sp.nov．)。     

芽孢杆菌属的一个新种

从苏芸金芽孢杆菌戈氏变种(Bacill thuringiensis var. Kurstaki)的混杂培养物中,分离得到编号为55B的三株菌。与已知的芽孢杆菌相比,在形态、生理生化和营养特征方面均不相同。其主要特征为：同时具有圆形和椭圆形两种芽孢,在芽孢游离之前,二者比例为1／3一1／2;游离后,比例降至1／10。好氧。在5％NaCI中生长,而在10％NaCl中不生长。不从葡萄糖产酸。不还原硝酸盐。产脲酶和酪氨酸酶,但苯丙氨酸不脱氨。不水解淀粉,也不产生二羟基丙酮。 以酪朊为唯一碳、氮源时,生长需要外源吡哆醛。其DNA中G+。含量为42 3—43．2克分子％。我们将其定为新种,根据菌落极易扩散的特点,命名为扩散芽孢杆菌(Bacillus diffusus Cai ＆ Wang sp. Nov.)。     

链球菌属的一个新种

自君子兰(Clivia miniata)软腐病病株的叶片病灶中分离到两株致病菌。经鉴定其中一株(85—2)多为双球状,也有呈单个存在,极少为四个细胞相连的短链。无芽孢,无鞭毛,不运动,革兰氏染色阳性,抗酸染色阴性,兼性厌氧生长;可从多种糖类产酸,但不产气;接触酶和苯丙氨酸脱氨酶均为阴性;不液化明胶,还原石蕊牛奶并凝固、胨化;生长温度范围为15—53℃,DNA中G+C含量为41．7mol％。由于其性状与链球菌属的各已知种均不相同,故定为一个新种,命名为君子兰链球菌(Streptococcus miniatus Zhou,Ping et Shao sp. Nov.)。     

活动甲烷微菌的分离和性状

应用改良的Hungate技术,从湖南省常德市酒厂下水道的污泥中分离到一株产甲烷菌cc8l。该菌株细胞短杆状(0．6—0．8×1．5—2．0Fro),两端圆钝,具一根端生鞭毛,能运动,不形成芽孢,革兰氏阴性,通常单个存在,从不成链状a菌落很小,圆形,直径0．7—1mm,凸起,边缘完整,半透明,初为乳白色,后中央褐黄色。菌株只能利用H,／co,或甲酸盐作为碳源和能源,不能利用CH30H、CH,COONa、CHsNH,。在培养基中分别加入牛的瘤胃液、酵母膏、胰酶解酩蛋白均能刺激菌株的生长和产甲烷,但不需夕。．源辅酶M。生长温度25。一45℃,最适生长温度40℃。生长pH值在5．5—7．5,最适生长pH7．0左右,菌体倍增时间为Il12．5小时,根据形态和生理性状,cc8l菌株与活动甲烷微菌(Jdethanorobium mobile)很相似,确定为活动甲烷敢菌。     

生丝微菌属的一个新亚种

从酒窖分离到一株编号为8502—3的细菌。该菌株能以甲醇为唯一碳源和能源生长,并累积PHB颗粒。能以乙醇、甲胺、二甲胺、三甲胺、甲酸盐、乙醇酸、乙酸盐、乙醛酸、乙醛和蛋白胨为唯一碳源生长。有氧时,最适氮源为铵盐和硝酸盐。厌氧条件下,能以硝酸盐作为氮源生长。最适生长pH和温度分别为7．2和35．0℃。DNA中G+C含量为65．5 mol％。它具侧生单鞭毛,在2．5％氯化钠中不能生长,不能用丙三醇、丁酸钠和天冬氨酸作为碳源生长。经鉴定认为此菌株为一新亚种,命名为查氏生丝微菌成都亚种(Hyphomicrobium zavarxiuiisubap.chengducnse subsp.nov)。     

一个水解纤维素的嗜热厌氧菌新种

本文报告了一株分解纤维素的嗜热厌氧菌。该菌株细胞革兰氏阴性,直或微弯杆状,大小0.2-0·6x1·5—9 0μm,以单端丛生鞭毛游动,形成端生膨大芽孢。可利用多种碳水化合物。在纤维素培养基中产生黄色。发酵纤维素的主要产物为乙醇、乙酸、CO2和H2。最适生长温度60℃,生长温度范围40—70℃;最适生长pH7．3—7．5。DNA中G+C含量为34mol％。经鉴定,它与已知的嗜热纤维素水解菌均有较大差别,定名为产黄纤维素梭菌(Clostridiumcelluloflavum sp．nov．)。     

产抑菌素菌株SM-A的分离和鉴定

自市售酸乳酪中分离到一株乳球菌SM-A菌株。该菌株产生的抑菌素能抑制或杀死芽孢杆菌、葡萄球菌、微球菌、链球菌、棒杆菌和梭菌等革兰氏阳性细菌,但对革兰氏阴性细菌、霉菌和酵母无效。SM-A菌株多为链球状,也有成对存在。革兰氏染色阳性,抗酸染色阴性,兼性厌氧生长,最适生长温度32℃,不形成芽孢,无荚膜和鞭毛,不运动;可从多种糖类产酸,但不产气;接触酶、苯丙氨酸脱氨酶和酪氨酸脱羧酶均为阴性,精氨酸双水解酶阳性;不液化明胶,还原石蕊牛奶并胨化,生长温度范围10～43℃,DNA中G+Cmol为36.4％。经鉴定,SM-A菌株为乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)。     

一株产碱性蛋白酶菌株的选育及其发酵条件的研究

从土壤中分离到的553株芽孢杆菌中选出一株产蛋白酶活力较高菌株,经紫外线和亚硝基胍诱变,获得一株产碱性蛋白酶的菌株,酶活力可达10000u／m1,此菌株经鉴定为地衣状芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。适宜的发酵条件：培养基由6％玉米粉(山芋粉或葡萄糖),4％豆饼粉(或其水解液),Na,HP0．·12Hz0 0．4％,KH：P0·0．03％,Na zc0,0．1％组成,pH7．O,37℃旋转摇床振荡培养{2一q6小时。酶作用的最适条件：60℃,pH9．0一10．5,在pH6．0—10．5范围内稳定。酶受DFP抑制。     

嗜树木甲烷短杆菌和甲酸甲烷杆菌的分离和特性

从我国沼气池污泥样品中,采用改良的亨氏操作技术,分离出TC713和TC708两株不运动、革兰氏染色阴性、不形成芽孢的杆菌。TC713菌株呈短杆状,往往两个相连成双杆菌,个别呈链杆状,菌落圆形透明。TC708菌株培养后期呈长杆状,弯曲,菌落圆形,周边呈现丝状。 两菌株均只能利用H2／CO2作为碳源和能源,不能利用CH,COONa、CH,NH。、CH,OH。利用甲酸较慢,且利用率不高。在培养液中分别加入酵母膏、瘤胃液或酪素水解物均能刺激1c713菌株的生长,但该菌株不需要外源辅酶M。Tc713和Tc708菌株生长最适温度分别为35℃和35—40℃在45℃生长不良。适宜生长的pH值分别为6．5—8．5和6．8—9．20在含有o．I％酵母膏的培养液中,以H,／∞,为碳源和能源,37℃下振荡培养,其菌数倍增时间分别为6—7小时和8—10．5小时。Tc713菌株经荧光免疫测定,仅对甲酸甲烷杆菌抗体有微弱的反应。DNA中G+c克分子含量为27．83士0．26％。根据Tc713和Tc708两菌株的性状,分别确定为嗜树木甲烷短杆菌(Methanobrevibacter arboriphilus)和甲酸甲烷杆菌(Methano-bacterium formicicum)。     

九株嗜热产甲烷菌的特性

从处理生活废水的厌氧污泥床的4个样品中,分离、纯化了9株嗜热的、利用H_2/CO_2和甲酸盐产甲烷的细菌。它们在细胞形态和生理特性上基本一致。细胞为直或略弯的杆状,两端钝圆,0.3～0.4×1～3μm;单个、成对,或多个相联,可达10μm以上。革兰氏阳性,不运动。细胞和菌落在荧光显微镜下呈现产甲烷菌所特有的绿色荧光。化能自养。生长温度30～75℃以下,最适为55～65℃。生长pH5.8～9.0,最适为6.9～7.6。菌株602B_3DNA中G+C含量为44.6mol％。将该菌株鉴定为嗜热甲酸甲烷杆菌的不同菌株:Methanobacterium thermoformicicum 602B_3     

氧化还原条件对紫色硫和非硫细菌生长的作用

紫色硫细菌(Chromatium mlnutissimum)发育在合Na2S的无机培养基中,原始的电位较低(rH2=9．3),由于生长过程中Na2S被氧化,氧化还原电位随之升高到棚：14．5。在有机酸培养基中Caromatium和Rhodopseudomonas表现出同样的规律性,随着细菌的发育,培养液的电位由高向低的方向变化,紫色硫毒田菌在合丙酮酸的培养基中rH2由20降至11—11．5,紫色非硫釉菌在合苹果酸的培养基中rHz由25降低到2—4。专性厌氧紫色硫捆菌只能生长在加有适量还原剂如：。Na2S、Na2S2O4和抗坏血酸的培养基中,此时rHz在3—2i范围内,并且rH：低于13较为适宜。兼性厌氧紫色硫相菌的生长不需加任何还原剂,它们生长的氧化还原电位范围比较广,rH：从0．5到27,其生长最适的rH2在25—26。     

从豆制品废水厌氧发酵液分离的一个螺旋体新种

用Hungate厌氧技术,从豆制品废水厌氧发酵液分离到一株厌氧生长、细胞柔软、活跃运动、产红色素的螺状细菌。能发酵多种碳水化合物,主要产物是乙酸盐、乙醇、Ht和CO2。生长要求酵母膏,可利用Nll6Cl和蛋白胨为氯源生长。不要求NaCl。最适生长温度为30—35℃。DNA的G+C含量为49mol％。按照《伯杰氏细菌学手册》(1984年版),此菌属于螺旋体属中的一个新种,命名为产红螺旋体 (Spirochaeta shodogenes n. sp.)。     

德克斯氏菌属的一个新种

从水稻的种子上分离出编号为7954的菌株。该菌株细胞杆状,单生或成对排列,革兰氏阴性,以周生鞭毛运动,细胞内有许多聚β-羟基丁酸盐颗粒,不形成孢囊,无芽孢。细胞外含有大量浓稠坚韧的胶状物质,呈淡黄色至淡暗棕褐色。需氧性,营呼吸代谢,接触酶阴性。马铃薯块上生长差、薯块不变色,还原硝酸盐,有固氮酶活性。12—42℃范围内生长,最适生长温度为32—35℃;PH5．3—9．5内生长,最适生长pH 6．8—7．9。DNA中的G+c克分子含量为74．3±0．12％,与胶德克斯氏菌的DNA体外杂交的同源性为54％,经鉴定认为菌株7954是德克斯氏菌属(Derxia)的一个新种,定名为周毛德克斯氏菌(Derxia peritricha sp．nov．Wu et Chen)o     

嗜热菌的耐热L-乳酸脱氢酶的研究

从广东各地的热温泉(55—95℃)水样中,分离到200余株最适生长温度高于70℃的极端嗜热菌。其中一株编号为HG25,具有耐热胞内L-乳酸脱氢酶(L—Lactate dehydrogenase EC．1．1．1．27．,简称LDH),有栖热菌属(Thermus)的特征,革兰氏阴性,无芽孢,好氧,不运动,产黄色素,最适生长温度为65—75℃,最高生长温度为85℃,最低为40℃,不水解淀粉,不从葡萄糖产酸,DNA的G+c百分含量为65mol％,L-乳酸脱氢酶经硫酸铵分级沉淀、DEAE-纤维素生层析作了初步提纯,比活提高7倍,LDH还原丙酮酸反血的最运温度为6 0℃,最适PH为8 0,酶在70℃稳定,保温10分钟后,仍保留85％的原始酶活力。失活半寿期(t1/2)为85℃10分钟。     

一个嗜热嗜酸细菌的新属——硫球菌属

本文报道从酸性热泉地区分离出一株比较少见的无机化能自养型嗜热酸细菌,经鉴定是一新属新种,命名为硫球菌属(Sulfosphaerellus gen. Nov.),模式种为嗜酸热硫球菌(Sulfosphae-rellus thcrmoacidophilum sp. Nov.)。细胞球形,直径0.8一1.2μm,有类似纤毛的结构,革兰氏阴性,需气,在无机盐培养条件下,氧化元素硫至硫酸获得能量进行自营生长。生长最适温度70℃,范尉55—80℃。生长最适pH2．5,范围1．0—5．5。DNA中G+C含量为33—39mol％。并将该菌与国外近十多年来分离的硫叶菌(Sulfolobus)等7种高温嗜酸细菌作了比较,并对其命名和分类位置作了讨论。     

短小芽孢杆菌289(pBX96)α-淀粉酶的性质

将巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)α-淀粉酶基因克篷到短小芽饱杆菌(Bacilluspumilus)中获得表达。将该工程菌发酵液的上清液,经硫酸铵分级盐析和DEAE-纤维素柱层析,得到纯化的α-淀粉酶。此酶的最适pH为6．0;在pH 5—8之间稳定;最适反应温度为55℃;金属离子Zn2+、Ab2+、Cu2+、Ag+对酶有明显的抑制作用;Ca2+、Na+,K+对酶略有激活作用：3 x 10-3mol／L对氯汞苯甲酸(PCMB)对酶有95％的抑制作用;其免疫性质与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)所产生的α-淀粉酶相同。     

由原油及其制品生产细菌胞外多糖的研究II.黄橙色棒状杆菌由原油产生的胞外多糖

从胜利油田的油污土样中分离出一株革兰氏阳性、无芽孢、不分枝,不运动、不抗酸、能从原油产生胞外多糖的杆菌D 9004。生长12—24小时,细胞0．5—0．6×1．5—3．5μm,到48小时,成为类球状和短杆。在营养琼脂平板上,菌落圆形,隆起,枯红色,表面光滑、润泽,边缘些齐。该菌不还原硝酸盐,石蕊牛奶中产碱,产生硫化氢,脲酶和过氧化氢酶阳性。从葡萄糖、果糖和蔗糖氧化产酸。不液化明胶。在SSC系统中,DNA解链温度(Tm值)为94．35士0．59℃,G+C含量为61．1土1.44克分子％。上述特征与黄橙色棒状杆菌(Corynebactertum flavoaurantiacum)基本一致。     

短小芽孢杆菌289(pBX96)α-淀粉酶的性质

将巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)α-淀粉酶基因克篷到短小芽饱杆菌(Bacilluspumilus)中获得表达。将该工程菌发酵液的上清液,经硫酸铵分级盐析和DEAE-纤维素柱层析,得到纯化的α-淀粉酶。此酶的最适pH为6．0;在pH 5—8之间稳定;最适反应温度为55℃;金属离子Zn2+、Ab2+、Cu2+、Ag+对酶有明显的抑制作用;Ca2+、Na+,K+对酶略有激活作用：3 x 10-3mol／L对氯汞苯甲酸(PCMB)对酶有95％的抑制作用;其免疫性质与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)所产生的α-淀粉酶相同。     

三株梭菌通过生物转化形成熊去氧胆酸的研究

用改进的薄层层析法定量测定了三株厌氧梭菌——产气荚膜梭菌(Clostridium perfr-ingens)HS-10、丁酸梭菌(C.butyrium)DL-20和LQ-29形成熊去氧胆酸(UDCA)的生物转化能力,并用正交法确定了HS-10菌株的最佳转化条件。发现该菌株在含O．2mmol／L鹅去氧胆酸(CDCA)的RCM培养基中培养6-48小时内,UDCA转化率均在80％以上。而且,当CDCA的浓度高达0．8-1．0 mmol／L时,其转化率仍在70％以上。此外,还初步发现未加任何营养成分的豆腐废水也可作为良好的转化培养基。本文是这两种菌能单独将CDCA 转化为UDCA的首次报道。