杏鲍菇原生质体制备与再生条件初探

研究酶浓度、酶解时间、酶解温度、培养时间、稳渗剂种类、pH值和几种再生培养基对杏鲍菇原生质体制备与再生的影响。最适条件为 :在 30℃、pH5 .5、1.5 %溶壁酶条件下 ,以 0 .6mol L甘露醇作为稳渗剂 ,酶解 2 .5h ,原生质体产量达到 2 .90× 10 7个 mL。将所得原生质体过滤、纯化、稀释后涂布再生培养基 ,再生率为 0 .18%。为利用原生质体技术进行杏鲍菇育种奠定了基础。     

平菇原生质体制备与再生条件初探

平菇原生质体制备最佳条件是菌丝培养5 d、酶浓度1.5%、pH 5.5、0.6 mol/L甘露醇渗透压稳定剂、酶解温度30℃、酶解时间2 h、OS培养基。原生质体过滤、纯化、稀释后涂布再生培养基,再生率为2.6%。     

羊肚菌原生质体制备与再生*

羊肚菌原生质体制备的最佳条件为以培养3d的菌丝体为材料,0.6mol/L蔗糖溶液为稳渗剂,1.5%浓度的溶壁酶30℃条件下酶解3个小时,可得原生质体产量最高为3.35×106个/100mg.以0.6mol/L的蔗糖溶液做稳渗剂,CYM再生培养基上得到原生质体再生率为0.171%.这一研究结果为羊肚菌通过原生质体技术进行菌株的遗传改良提供了重要技术参数.     

大球盖菇原生质体制备与再生条件研究

研究了大球盖菇(Stropharia rugoso-annulata)菌丝原生质体制备和再生条件,结果表明:在30℃、pH5.5、0.6mol/L甘露醇、1.5%溶壁酶条件下对培养3d的菌丝体酶解2.5h,原生质体产量达到1.36×107个/mL。原生质体适宜再生培养基为马铃薯200g,蔗糖20g,蛋白胨2g,酵母粉2g,KH2PO41.5g,K2HPO41.5g,MgSO4.7H2O 1.5g,维生素B10.1g,维生素B60.1g,0.6mol/L甘露醇。采用上述培养基,双层平板法进行再生试验,再生率达到0.96%。为大球盖菇原生质体技术深入研究和应用奠定了基础。     

白腐真菌原生质体制备和再生条件的研究

对影响白腐真菌(5．776)原生质体制备和再生的条件：包括菌龄、水解酶液的种类及浓度、酶解温度、酶解时间、再生培养基的稳渗剂的选择进行了研究。通过单因素比较分析和正交实验得到最适合的白腐真菌原生质体制备和再生条件。结果表明：当菌龄为58h,采用1%纤维素酶和1%蜗牛酶(2：1)混合液,酶解温度30℃,酶解时间180min,用0．7mol/L氯化钠作渗透压稳压剂,白腐真菌(5．776)原生质体的形成数和再生率均比优化前大为提高,原生质体形成量为8．36×10~5个/mL,原生质体再生率为9．12%。     

无花果曲霉原生质体形成与再生条件的探讨

根据正交试验得出无花果曲霉原生质体形成的最佳条件,用１％的混合酶液（０．５％纤维素酶＋０．２５％蜗牛酶＋０．２５％溶菌酶）作用无花果曲霉菌体细胞,原生质体产量达３．２×１０７个·ｍｌ－１,渗透压稳定剂为０．６ｍｏｌ·Ｌ－１ＫＣｌ于０．２ｍｏｌ·Ｌ－１ＰＯ３＋４（ｐＨ５．８）中,酶解时间和酶解温度分别为３．０ｈ、３０℃．比较不同酶解时间、再生稳定剂和碳源等因素对原生质体再生的影响,可确定最佳再生条件,再生率达３０％以上．     

红色酵母原生质体形成和再生条件的研究

了不同渗透压稳定剂、酶浓度、酶解时间,温度等对红色酵母原生质体的形成与再生的影响。实验结果表明：使用对数生长期早期的细胞,蜗牛酶浓度１％,３０℃处理５０－６ｍｉｎ,山梨醇为渗透压稳定剂,有利于原生质体制备和再生。     

松茸菌丝原生质体形成与再生条件的研究

采用多因素实验正交优选法比较不同酶、渗透压稳定剂、菌丝生理状况、菌丝培养基、预处理液和酶解时间等因素对松茸原生质体形成的影响和再生培养基、明胶、酪蛋白对松茸原生质体再生的影响.以0.6MMgSO4作为渗透压稳定剂,2-硫基苏糖醇为预处理液,用2%蜗牛酶在30℃酶解6h,每克菌丝可以得到1×106个原生质体.再生最优条件0.6MMgSO4,PDY再生培养基,2.5%明胶,松茸菌丝再生率最高4.97%.     

茯苓原生质体制备与再生条件的研究

研究了酶、酶解时间、菌龄、稳渗剂等对茯苓原生质体制备与再生的影响。茯苓原生质体制备的最佳条件为:纤维素酶(1．5%)和蜗牛酶(1．5%)的等量混合酶解系统,酶解时间3h,7d菌龄菌丝,产量可达1．77×10~7个/mL。以甘露醇为稳渗剂,采用CYM再生培养基,酶解时间3h,7d菌龄菌丝,其原生质体再生率最高,为0．164%。这一结果为茯苓通过原生质体技术进行菌种改良提供了重要技术参数。     

疏绵状嗜热丝孢菌原生质体的制备与再生

以疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)为供试菌株,研究了菌龄、酶的种类及浓度、酶解时间、酶解温度和稳渗剂对原生质体制备的影响及稳渗剂对原生质体再生的影响。结果表明,制备嗜热丝孢菌原生质体比较适宜的条件为:PDB液体培养基培养28 h,以0.7 mol/L NaCl为稳渗剂,0.15 mol/L的溶壁酶,30℃酶解4 h。原生质体再生以0.7 mol/L蔗糖作稳渗剂为最佳。     

植物原生质体的细胞壁再生

细胞壁作为植物细胞重要的组成部分,在决定细胞形状、维持机械支撑、吸收养分等方面发挥重要功能.因此,揭示植物细胞壁合成的调控机制具有重大的生物学意义.基于植物组织水平研究细胞壁的生物合成具有难以控制时间尺度、观察空间狭小等局限性.原生质体作为去除细胞壁的单个细胞是研究细胞壁再生的理想系统.在过去的几十年里报道了大量关于植...     

Chemical Modification of Neutral Protease from Bacillus subtilis var. amylosacchariticus: Assignment of Tyrosyl Residues Iodinated

The neutral protease of Bacillus subtilis var. amylosacchariticus (B. amylosacchariticus) was iodinated with a 25-fold molar excess of iodine at pH 9.4 for 3 min at 0°C, by which treatment the proteolytic activity toward casein was markedly reduced, while the hydrolytic activity toward an N-blocked peptide substrate was rather increased. The modified enzyme was digested with Staphylococcus aureus V8 protease at pH 8.0 and the amino acid sequences of resultant peptides were compared with those obtained from the native enzyme. One of the peptides was found to have an amino acid sequence of Thr-Ala-Asn-Leu-Ile-Tyr-Glu, which corresponds to residue Nos. 153—159 of the enzyme, where Tyr-158 was identified to be mono-iodotyrosine. The other two peptides were those containing Tyr-21 which was mono- and di-iodinated, respectively. Referring to nitration experiments on the neutral protease and the active site structure of thermolysin, it was concluded that the iodination of Tyr-158 is mainly responsible for the activity changes of B. amylosacchariticus neutral protease.     

南蛇藤原生质体培养及植株再生

以4℃低温暗处理24 h的南蛇藤胚性愈伤组织为分离原生质体的原材料,用MS培养基进行液体浅层静置、固液双层以及琼脂糖包埋培养原生质体,获得再生愈伤组织并分化成苗,建立了原生质体培养体系。结果表明,低温暗处理利于高产率高质量原生质体的获得;0.5%纤维素酶+0.5%果胶酶+5 mmol.L-1MES为酶的最佳配方;12 h为最佳酶解时间;13%为甘露醇最佳浓度;静置12 h+振荡0.5 h为最佳酶解方式;液体浅层静置培养取得了较好的原生质体培养效果;MS+6-BA2.0 mg.L-1+IBA 0.1 mg.L-1为愈伤组织最佳分化培养基;1/2MS+NAA0.1 mg.L-1为最佳生根培养基。     

影响枯草芽胞杆菌和荧光假单胞菌原生质体再生的因素

目的：为了提高再生率,对影响革兰阳性菌枯草芽胞杆菌KR株和革兰阴性菌荧光假单胞菌B13株原生质体再生的因素进行研究。方法：研究了酶解时间,再生方式,再生培养基中稳定剂的种类,Ca^2＋、Mg^2＋、琥珀酸钠、L-色氨酸的浓度及培养基的放置时间对KR和B13株原生质体再生的影响。结果：对KR株酶解20min,采用夹层培养,再生培养基中加入0.6mol/L蔗糖、0.03mol/L Ca^2＋、0.02mol/L Mg^2＋、0.3mol/L琥珀酸钠、0.2mol/L L-色氨酸,培养基在37℃放置72h,原生质体再生率可达42.7%;对B13酶解15min,采用夹层培养,培养基中加入0.6mol/L NaCl、0.02mol/L Ca^2＋、0.01mol/L Mg^2＋、0.3mol/L琥珀酸钠、0.1mol/L L-色氨酸,培养基在37℃放置48h,原生质体再生率可达15.3%。结论：影响革兰阳性菌枯草芽胞杆菌KR株和革兰阴性菌荧光假单胞菌B13株原生质体再生的因素是不同的。     

丝状真菌AL18的原生质体制备和再生条件的优化

目的:为了建立起产苝醌类光敏剂丝状真菌AL18原生质体制备和再生体系。方法:采用单因素实验法研究了预处理方式、渗透压稳定剂和酶解条件对原生质体制备率和再生率的影响。结果:原生质体制备及再生的最佳条件是用0.3%的β-巯基乙醇预处理15 min,酶解液以0.6 mol/L的MgSO4·7H2O作为渗透压稳定剂,0.02 mol/L的磷酸盐缓冲液pH值为5.8,纤维素酶:蜗牛酶=2:3,酶的总浓度为15mg/mL,36℃酶解2h;以0.6mol/L的蔗糖作为再生培养基的渗透压稳定剂。结论:原生质体的制备率和再生率可分别达到1.42×107/mL和3.2%。     

灵芝原生质体的分离及其转化

对灵芝（赤芝）进行了原生质体的形成和再生实验,研究了渗透压稳定剂、菌龄、酶解条件对原生质体分离的影响,以及渗透压稳定剂、培养基对原生质体现生的影响,另外还尝试用电穿孔在灵芝原生质体中进行报告基因（report gene）β-gal的转化,结果β-gal在菌丝体中有表达。