在三维结构上对百合花粉母细胞actin的免疫定位

传统的切片仅仅能够显示样品的平面结构,不能用于细胞中三维网络结构的研究。笔者在DGD(diethylene glycol distearate)包埋去包埋的基础上,结合电镜免疫胶体金技术对大卫百合花粉母细胞胞间及胞内细胞的骨架系统进行了研究,观察到高反差细胞微梁结构的三维网络,actin这一细胞骨架的主要成员被定位在该微梁结构纤维上。三维结构上的研究表明,actin不但是植物细胞核及细胞质骨架的成员,而且也存在于胞间连接结构(胞质桥和胞间连丝)中,推测它可能与细胞融合有关。实验结果同时表明,三维结构免疫胶体金技术对于细胞骨架和核基质的结构蛋白研究是行之有效的。     

拟南芥菜(Arabidopsis thaliana)子叶中蛋白体形成的超微结构和免疫电镜定位研究

本文对拟南芥菜(Arabidopsis thaliana)种子发育过程中贮藏蛋白的积累和蛋白体的形成进行了超微结构和免疫电镜定位的研究。常规超薄切片的电镜观察表明,在开花后第10天(10 DAF),高电子密度的蛋白质物质开始在子叶细胞的液泡中沉积。这一过程一直延续到种子接近成熟(14 DAF),这时液泡中充满了蛋白质物质,转变成为大的蛋白体。利用了该种植物主要种子贮藏蛋白之一的12 s球蛋白的单克隆抗体作为免疫探针,以蛋白质A-胶体金电镜技术对12 s种子蛋白进行了细胞内定位,证实了在液泡中积累的物质为种子贮藏蛋白。实验结果表明在拟南芥菜中,子叶细胞中的液泡是蛋白体的前体,肯定了蛋白体的发生起源于液泡的观点。本文还对应用胶体金电镜技术进行细胞内定位的某些问题作了初步探讨。     

植物激素检测技术研究进展

植物激素是植物体内合成的一系列痕量有机化合物,它们在植物的生长发育和环境应答过程中具有非常重要的作用,其超微定量及原位测定技术仍是制约植物激素研究的瓶颈问题之一。该文着重介绍了近年来茉莉酸及其甲酯、脱落酸、生长素、赤霉素和多肽激素等植物激素分析检测技术的最新研究进展,并对植物激素超微量、高灵敏检测技术研究中存在的问题和发展前景进行了简要的讨论。     

胶体金标记抗体技术

胶体金标记抗体技术是近十多年来免疫组织(或细胞)化学迅速发展起来的一项免疫标记技术。在国外许多研究领域中已经得到发展,并逐渐受到国内同行的重视。本文介绍了胶体金标记抗体技术的原理、方法及其发展概况。     

免疫胶体金技术的应用及展望

免疫胶体金技术是继三大标记技术(荧光素、放射性同位素和酶)后发展起来的固相标记免疫测定技术。免疫胶体金标记技术是以胶体金作为示踪标志物,应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。近年来,该技术在医学、动植物检疫、食品安全监督等各领域得到了日益广泛的应用。从胶体金技术的基本原理、制备方法、标记技术、应用现状及其优点等方面作一简要综述,并对该技术的发展前景作了展望。     

植物激素的受体和诱导基因

植物激素在植物生长发育的诸多方面发挥着重要作用。近年来,随着植物分子遗传学和分子生物学的发展,有关植物激素信号转导分子机制的研究取得了较大的进展。本文介绍了生长素、赤霉素、脱落酸和乙烯四种植物激素信号转导途径中的受体和诱导基因的研究进展,并展望了用生物信息学方法研究植物激素诱导基因的前景。     

嫁接早期IAA在西葫芦/南瓜嫁接面处薄壁细胞和维管分子中的免疫细胞学定位

采用免疫胶体金法对IAA在西葫芦／南瓜离体茎段嫁接早期发育时期在嫁接面处的分布进行了超微结构水平的定位。电镜观察表明在嫁接面处的薄壁细胞中IAA主要定位于细胞核、质体、内质网等细胞器上。在高尔基体、线粒体、细胞壁和液泡中,未发现胶体金颗粒的标记。在分化中的管状分子中,胶体金颗粒位于次生壁上和细胞质中。在筛分子分化过程中,IAA主要定位于筛板、筛孔和细胞质中。在伴胞中有较高的金颗粒密度。对于IAA在嫁接体维管分子分化过程中的作用进行了讨论。     

植物激素的免疫组织化学定位

本文介绍目前在植物激素研究中常用的几种免疫组织化学定位方法及其可用性。     

气—质联用内标法 测定植物材料内源IAA的含量

植物激素在植物生长发育过程中起着重要的调节作用,但因其在植物体内含量很低,对于它的定量分析研究还没有一种简便易行的方法。目前,植物激素的测定方法可归纳为:生物试法,物理化学法和免疫法。气-质联用(GC-MS)内标法为物理化学法的一种,它具有灵敏度高、结果准确、内源激素提取所需植物材料量小(鲜重1g 即可)等优点,在国外1978年就开始使用了,但国内尚无文章专门介绍。本文结合我们自己的实验,详细地介绍了这种方法的原理、计算及操作程序,以便于应用。     

一个水稻β-肌动蛋白基因的克隆及其亚细胞定位

目的:克隆一个水稻β-肌动蛋白基因,并研究其蛋白的亚细胞分布。方法:利用RT-PCR技术从日本晴水稻中扩增得到β-肌动蛋白基因Os Actin,将其与拟南芥肌动蛋白基因家族进行分子进化分析;利用胶体金免疫电镜技术对水稻β-肌动蛋白基因进行定位分析。结果:核苷酸和氨基酸序列分析表明,Os Actin与水稻的Os RAc1基因有较高的同源性(98%);胶体金免疫电镜定位结果显示β-肌动蛋白在细胞核、细胞质中均有分布。结论:获得了水稻β-肌动蛋白基因Os Actin,并研究了其蛋白在水稻韧皮部内的分布,为进一步探讨该基因的功能及作用机理奠定了基础。