妊娠早期人胎盘绒毛血管紧张素的研究

用生化提取、放射免疫测定及离体培养技术研究了妊娠早期人胎盘绒毛血管紧张素的含量与 变化,观察了血管紧张素Ⅱ对早孕胎盘人绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ）分泌的影响,并用ＡＢＣ法探 讨了血管紧张素Ⅱ的免疫组织化学定位。结果表明：妊娠６～１０周的人胎盘绒毛组织均检测到血管 紧张素,其含量随妊娠周龄增加而升高;离体培养的６～９周人胎盘绒毛亦能分泌血管紧张素,培 液中血管紧张素的水平与妊娠周龄呈平行关系;然而妊娠６～１０周母血中血管紧张素的含量无明 显变化。免疫组织化学结果指出早孕胎盘绒毛有ＡⅡ免疫阳性反应物质．免疫阳性物主要分布在合 体滋养层细胞内;在离体培养条件下,血管紧张素Ⅱ能刺激离体培养的人胎盘绒毛ｈＣＧ的分泌,其 受体阻断剂 ［Ｓａｒ１Ｉｉｅ８］ ＡｎｇⅡ（１０－８～１１－７ｍｏｌ／Ｌ）对 ｈＣＧ分泌无影响,当 ［Ｓａｒ１　Ｉｉｅ８］ ＡｎｇⅡ浓度 达１０－６ｍｏｌ／Ｌ时,绒毛ｈＣＧ分泌量显著降低。     

妊娠早期胎盘绒毛中肾素活性及其分泌的研究

取人工流产的不同妊娠周龄的人妊娠早期胎盘绒毛组织,测定其肾素活性及其在离体培养条件下肾素分泌,同时对组织中的血管紧张素Ⅰ和Ⅱ的含量进行测定。结果表明：人妊娠早期胎盘绒毛组织中的肾素活性较高,但随着妊娠周龄的增加,肾素活性明显降低。ＡⅡ含量随着妊娠周龄的增加而显著增加,与肾素活生的变化趋势相反;离体培养的绒毛有分泌肾素的能力,分泌能力随着妊娠周龄的增加而增加;在绒毛组织提取液和离体培养液中均未检测到     

孕酮对人早孕子宫蜕膜细胞活性肾素分泌的调节

子宫蜕膜是肾素产生的主要部位,肾素包括活性与非活性肾素,活性肾素可使血管紧张素原水解生成血管紧张素Ⅰ,继而调节血管紧张素Ⅱ的表达。实验表明：（１）妊娠早期（孕５～９周）,人子宫蜕膜活性肾素的含量随妊娠周龄增加而升高,孕８周时可达６３３７±１２８４ＡⅠｎｇ／ｇｗｗ·ｈ－１;（２）早孕子宫蜕膜组织活性肾素占总肾素量的１／４;（３）孕酮可调节蜕膜细胞活性肾素的合成与分泌。人早孕子宫蜕膜组织中存在高水平的活性肾素,性类固醇激素可调节蜕膜细胞活性肾素的表达,可以认为,子宫局部肾素血管紧张素系统在妊娠过程中发挥了重要作用。     

子宫-胎盘血管紧张素及其受体

子宫－胎盘中存在局部肾素－血管紧张素系统（ｒｅｎｉｎ－ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ ｓｙｓｔｅｍ,ＲＡＳ）。血管紧张素的分布较广泛,胎盘合体滋养层、子宫腺体、肌肉和血管壁均可见ＡｎｇⅡ的免疫阳性染色。胎盘主要表达血管紧张素Ⅰ型受体,子宫至少有两种血管紧张素受体亚型,其分布与数量存在种间差异。血管紧张素Ⅰ型受体与Ｇ蛋白偶联,可以激活三种不同的信号途径,Ⅱ型受体能否与Ｇ蛋白偶联及其信号转导途径仍有不同看法。     

肾神经传入纤维在DOCA—salt大鼠高血压形成中的作用

于大鼠皮下埋入含醋酸去氧皮质酮（ＤＯＣＡ）的交管以形成ＤＯＣＡ－ｓａｌｔ高血压,其中一组动物在埋管前切除（Ｔ９－Ｌ２）脊髓右侧背根神经,每周以尾套法测定大鼠收缩压,埋管后６周测定大鼠脑和血浆中儿茶酚胺（ＣＡ）和血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）的浓度,用电脑血管显微图像分析系统测量血管的结构变化。与对照鼠相比,ＤＯＣＡ－ｓａｌｔ高血压大鼠下丘脑和延脑 肾上腺素含量和ＡｎｇⅡ放免活性及血浆去甲肾上腺素（ＮＥ）     

促肾上腺皮质激素释放激素放射免疫测定法的建立及其应用

用本室制备的兔抗羊促肾上腺皮质激素释放激素（ＣＲＨ）多克隆抗体和￣（１２５）Ｉ标记的Ｔｙｒ°－ｒＣＲＨ建立了ＣＲＨ放射免疫测定法。并用该方法测定了人胎盘组织和大鼠脑及胸腺组织ＣＲＨ含量。所得抗体与ｒＣＲＨ的亲合常数Ｋａ＝５．３×１０￣９Ｌ／ｍｏｌ,与促肾上腺皮质激素、血管紧张素Ｉ、β－内啡肽、生长激素释放因子、血管活性肠肽、胆囊收缩素、加压素等１８种肽没有交叉反应。￣（１２５）Ｉ－ｒＣＲＨ的比放射性为４１６３ｋＢｑ／μｇ。建成的ＣＲＨ放射免疫测定法取代比率为２．２９,灵敏度为４０ｐｇ,ＥＤ＿（５０）约为６５０ｐｇ,百分精密度和百分准确度分别为３．８４％和１０．３６％。用该法所测人胎盘和大鼠组织ＣＲＨ含量的结果表明,分娩胎盘组织ＣＲＨ含量远高于妊娠６─７周者,约相当于后者的１５倍;大鼠组织ＣＲＨ含量以下丘脑最高,垂体次之,然后依次是海马、胸腺和大脑皮质;且下丘脑和垂体的ＣＲＨ含量雄鼠明显高于雌鼠。     

肾神经传入纤维在DOCA─salt大鼠高血压形成中的作用

于大鼠皮下埋入含醋酸去氧皮质酮（ＤＯＣＡ）的硅胶管以形成ＤＯＣＡ－ｓａｌｔ高血压,其中一组动物在埋管前切除（Ｔ＿９－Ｌ＿２）脊髓右侧背根神经,每周以尾套法测定大鼠收缩压,埋管后６周测定大鼠脑和血浆中儿茶酚胺（ＣＡ）和血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）的浓度,用电脑血管显微图像分析系统测量血管的结构变化。与对照鼠相比,ＤＯＣＡ－ｓａｌｔ高血压大鼠下丘脑和延脑的肾上腺素含量和ＡｎｇⅡ放免活性及血浆去甲肾上腺素（ＮＥ）浓度均明显增加,血浆ＡｎｇⅡ浓度降低,心系数（心重／体重）和肠系膜动脉的中层厚度、壁厚与腔径（壁腔）比值增大;切除脊髓背根可明显延缓ＤＯＣＡ－ｓａｌｔ高血压的形成、预防以上组织ＣＡ浓度和ＡｎｇⅡ放免活性增加以及缓解心肌和血管平滑肌的肥厚。提示,肾神经传入纤维在ＤＯＣＡ－ｓａｌｔ高血压形成中起作用,其机制可能通过影响脑内肾上腺素能神经元和激活脑肾素－血管紧张素系统增加交感传出而起作用。     

人早期胎盘绒毛纤维连接蛋白的分离纯化及鉴定

人妊娠５－８周的胎盘绒毛经匀浆后,用２ｍｏｌ／Ｌ ｕｒｅａ－ＰＢＳ提取,通过Ｈｅｐａｒｉｎ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ亲和柱层析,再经Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－６Ｂ凝胶过滤层析,得到人早期胎盘纤维连接蛋白（ｅａｒｌｙ ｐｌａｃｅｎｔａ ｆｉｂ－ｂｒｏｎｅｃｔｉｎ,ｅｐＦＮ）。经还原及非还原ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和免疫印迹电泳分析,ｅｐＦＮ分子量约５００ｋＤ,是由两个２５０ｋＤ亚基组成,与人足月胎盘纤维连接     

表皮生长因子,生长抑素对人早孕胎盘hCG分泌及其因表达的影响

观察了表皮生长因子,生长抑素对体外培养的人早孕绒毛膜促性腺激素分泌及ｈＣＧβ－ｍＲＮＡ含量的影响,发现ＥＧＦ可明显刺激绒毛分泌ｈＣＧ,显著增加ｈＣＧ β－ｍＲＮＡ含量。生长抑素虽然对绒毛ｈＣＧ分泌及ｈＣＧβｍ－ＲＮＡ含量无明显影响,但可抑制ＥＧＦ,ＧｎＲＨ的ｈＣＧ分泌及ｈＣＧβ－ｍＲＮＡ。提示ＥＧＦ,ＳＳ在妊娠早期参与了ｈＣＧ分泌的调节。     

血管紧张素在人子宫蜕膜化中的作用

我们用放免测定和放射自显微证明人早孕蜕膜组织中存在免疫活性的血管紧张素Ⅱ和丰富的血管紧张素Ⅰ型受体。离体细胞培养实验显示,血管紧张素Ⅱ以剂量依赖方式刺激蜕膜细胞催乳素的分泌,而血管紧张素转换酶抑制剂对催乳素分泌似乎有微弱的抑制作用,但未显示统计学差异。以上结果表明AngⅡ可以促进人子宫蜕膜化反应,推测它在胚胎植入和妊娠维持中可能发挥重要的作用。     

胎盘X细胞的免疫组织化学研究

胎盘Ｘ细胞为一种绒毛外滋养层细胞,作者对２５例晚期妊娠胎盘中Ｘ细胞进行了Ｋｅｒａｔｉｎ、ＥＭＡ、ＨＣＧ、ＨＰＬ、ＰＬＡＰ、Ｐｒｏｌａｃｔｉｎ等免疫组织化学研究,其中Ｋｅｒａｔｉｎ、ＥＭＡ、ＨＰＬ、ＰＬＡＰ等染色均示部分细胞呈阳性反应。上述结果表明Ｘ细胞介于合体滋养细胞与细胞滋养细胞之间,符合中间滋养细胞的光镜及免疫组织化学特征,而与蜕膜细胞完全不同。     

表皮生长因子，生长抑素对人早孕胎盘hCG分泌及基因表达的影响

观察了表皮生长因子（ＥＧＦ）,生长抑素（ＳＳ）对体外培养的人早孕绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ）分泌及ｈＣＧβ－ｍＲＮＡ含量的影响。发现ＥＧＦ可明显刺激绒毛分泌ｈＣＧ,显著增加ｈＣＧβ－ｍＲＮＡ含量,生长抑素虽然对绒毛ｈＣＧ分泌及ｈＣＧ　β－ｍＲＮＡ含量无明显影响,但可抑制ＥＧＦ,ＧｎＲＨ刺激的ｈＣＧ分泌及ｈＣＧβ－ｍＲＮＡ水平。提示ＥＧＦ,ＳＳ在妊娠早期参与了ｈＣＧ分泌的调节。     

钙调神经磷酸酶依赖的信号通路参与血管紧张素Ⅱ刺激的心肌细胞肥大

本研究观察了钙调神经磷酸酶依赖的信号通路在血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心肌细胞肥大中的作用。在ＡｎｇⅡ刺激的大鼠心肌细胞肥大模型上,应用环孢素Ａ（ＣｓＡ）阻断ＣａＮ通路,观察心肌细胞＾３Ｈ－亮氨酸掺入,ＣａＮ,ＭＡＰＫ及ＰＫＣ活性的变化。结果表明,ＡｎｇⅡ（１０＾－７ｍｏｌ／Ｌ）刺激大鼠心肌细胞＾３Ｈ－亮氨酸掺入较对照组增高４６％（Ｐ〈０．０１）,ＣｓＡ（０．５－５μｇ／ｍｌ）可以浓度依赖性方式抑制Ａｎ     

AngⅡ和PKC对心肌细胞AngⅡ 1型受体的转录调节

利用体外培养的心肌细胞,观察血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）和蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）在诱导ＡｎｇⅡ１型受体（ＡＴ１）基因表达及蛋白质代谢中的作用．研究结果表明：ＡｎｇⅡ可诱导ＡＴ１ｍＲＮＡ水平一过性下调,呈时间及剂量依赖性,１０ｎｍｏｌ／ＬＡｎｇⅡ刺激细胞６ｈ,引起ＡＴ１ｍＲＮＡ水平降低幅度最大,降至对照的５１．６％±９．５％,然后逐渐回升,２４ｈ恢复至对照水平．３０μｍｏｌ／ＬＨ－７（ＰＫＣ抑制剂）能阻断ＡｎｇⅡ诱导的ＡＴ１ｍＲＮＡ水平的下调．０．３μｍｏｌ／Ｌ的ＰＭＡ（ＰＫＣ激活剂）单独应用可诱导ＡＴ１ｍＲＮＡ水平下调达对照的４３％±８％,加入ＡＴ１拮抗剂ＤＭＰ８１１及Ｄｕｐ７５３均可阻断ＡｎｇⅡ诱导的ＡＴ１ｍＲＮＡ水平的下调．１０ｎｍｏｌ／Ｌ的ＡｎｇⅡ刺激心肌细胞９６ｈ可使蛋白含量降低至对照的７３．４％±５．６％,而加药持续刺激１４４ｈ可使蛋白含量较对照增加３３．８％±６．３％,Ｈ－７不能阻断ＡｎｇⅡ诱导的蛋白含量降低,但可有效地抑制蛋白含量的增加．以上结果提示：ＡｎｇⅡ对心肌细胞ＡＴ１基因的转录和细胞的蛋白代谢有调节作用,而ＰＫＣ则参与了ＡｎｇⅡ的这种调节作用     

肾素—血管紧张素系统——应激激素反应系统

各种急性与慢性庆激时,循环血中及脑、心血管、肾上腺等组织中血管紧张素Ⅱ（ＡⅡ）显著增多;人剧烈运动后血浆ＡⅡ与皮质醇一样均剧烈增加,在慢性应激性高血压动物循环及组织中,ＡⅡ含量持续地增高。还发现高浓度ＡⅡ对肾上腺糖皮质激素的分泌有直接的刺激作用,而组织ＡⅡ含量增多又受肾上腺素能β受体的激发。根据近年来的系列工作,并结合文献,我们认为ＡⅡ是一种重要的应激激素;肾素－血管紧张素系统是一个应激激素反应系     

人女性生殖器官和胎盘组织的凝集素标记研究

应用ＡＢＣ法和ＰＡＰ法系统研究了９种凝集素对子宫、卵巢、输卵管、乳腺和胎盘绒毛等５种组织的标记状况,发现大豆素（ＳＢＡ）只与子宫内膜被覆上皮而不与子宫内膜腺体上皮结合;蓖麻素－１（ＲＣＡ－１）则恰相反。胎盘绒毛合体细胞滋养层游离缘呈线状麦胚素（ＷＧＡ）结合阳性,而细胞滋养层麦胚素（ＷＧＡ）标记可为环细胞膜阳性。当子宫内膜由增生期向分泌期、妊娠期和乳腺由静止期向泌乳期进展时,麦胚素（ＷＧＡ）、双花扁豆素（ＤＢＡ）、花生素（ＰＮＡ）等凝集素在腺细胞游离缘的结合明显增强。此外,麦胚素（ＷＧＡ）、花生素（ＰＮＡ）、蓖麻素－１（ＲＣＡ－１）等在子宫内膜、乳腺、输卵管、卵巢等组织的被覆上皮和腺上皮细胞都有较高的结合。间质中纤维组织、血管内皮细胞和巨噬细胞等也与麦胚素（ＷＧＡ）、花生素（ＰＮＡ）、荆豆素－１（ＵＥＡ－１）及刀豆素（ＣｏｎＡ）等呈阳性结合。作者探讨了上述女性生殖器官和胎盘组织的凝集素标记特点、相互关系、共同规律及可能具有的生理生化意义。     

血管紧张素Ⅱ对培养心肌细胞c-fos表达和蛋白质合成的作用

本实验在培养新生大鼠心肌细胞上,探讨血管紧张素Ⅱ对心肌细胞ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ表达和蛋白质合成的影响。结果显示,血管紧张素Ⅱ能诱导ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ的表达,增加蛋白质含量,并呈量－效关系,还能加速＾３Ｈ－亮氨酸的掺入速度。上述这些作用可血管紧张素Ⅱ受体拮抗ｓａｒａｌａｓｉｎ所阻断,提示这些作用是受体介导的。     

肾素－血管紧张素系统──应激激素反应系统

各种急性与慢性应激时,循环血中及脑、心血管、肾腺等组织中血管紧张素Ⅱ（ＡⅡ）显著增多;人剧烈运动后血浆ＡⅡ与皮质醇一样均剧烈增加,在慢性应激性高血压动物循环及组织中,ＡⅡ含量持续地增高。还发现高浓度ＡⅡ对肾上腺糖皮质激素的分泌有直接的刺激作用,而组织ＡⅡ增多又受肾上腺素能β受体的激发。根据近年来的系列工作,并结合文献,我们认为ＡⅡ是一种重要的应激激素;肾素－血管紧张素系统是一个应激激素反应系统;它与经典的应激激素反应系统,下丘脑－垂体－肾上腺皮质系统及交感－肾上腺髓质系统也存在着密切的关系。     

蛋白激酶C和Na~＋－H~＋交换在ANGⅡ诱发心肌细胞肥大反应中的作用

血管紧张素（ＡＮＧ）Ⅱ在１０－１０－１０－６ｍｏｌ／Ｌ范围内剂量依赖性促进无血清培养新生大鼠心肌细胞蛋白质合成速率。蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（Ｓｔａｕ２ｎｍｏｌ／Ｌ）对心肌细胞基础状态３Ｈ－Ｌｅｕｃｉｎｅ掺入无明显影响，但Ｓｔａｕ预处理３０ｍｉｎ，则可有效阻断ＡＮＧⅡ（１μｍｏｌ／Ｌ）对细胞蛋白质合成的刺激作用；单纯应用ＰＫＣ激活剂ＰＭＡ（１μｍｏｌ／Ｌ）可使心肌细胞蛋白质合成速率增加，与对照组相比，ＰＭＡ组３Ｈ－Ｌｅｕｃｉｎｅ掺入量增加了４１．０４％。细胞Ｎａ＋－Ｈ＋交换抑制剂Ａｍｉｌｏｒｉｄｅ预处理也能阻断ＡＮＧⅡ刺激３Ｈ－Ｌｅｕｃｉｎｅ掺入细胞蛋白质的作用。以上结果提示ＰＫＣ和Ｎａ＋－Ｈ＋交换的激活，可能是ＡＮＧⅡ诱发的心肌细胞肥大反应的重要胞内信息转导机制。本工作还观察到，阻断细胞Ｎａ＋－Ｈ＋交换后并不影响由ＰＫＣ激活导致的蛋白质合成增加，提示可能存在着ＰＫＣ和Ｎａ＋－Ｈ＋交换彼此相对独立地调节心肌细胞生长的途径。     

开搏通对游泳大鼠心肌肥大的影响

为了明确开搏通对运动性心肌肥大的作用。本实验采用游泳训练引起的大鼠心肌肥大模型,应用放射免疫及生化等方法对心肌肥大及心脏肾素－血管紧张素系统（Ｒ－Ａ－Ｓ）的变化进行了初步研究。观察到游泳五周时,大鼠心重／体重比值（Ｈ／Ｂｗｔ）显著升高,同时心肌血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）及心肌血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）也明显升高。而服用开搏通的游泳大鼠心肌ＡｎｇⅡ,ＡＣＥ较单纯游泳组低,但心重／体重比值却升高。上述结果提示开搏通能抑制运动所致心肌ＡｎｇⅡ升高,但不能防止运动引起的心肌肥大。